中国生物制品学杂志

2010, v.23(01) 9-12

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百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素基因的克隆及原核表达
Cloning and Prokaryotic Expression of Bordetella pertussis Adenylate Cyclase Toxin Gene

石碧珠;张华捷;孟民杰;张庶民;

摘要(Abstract):

目的克隆百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素(CyaA,ACT)基因,表达并纯化重组CyaA蛋白。方法从百日咳杆菌CS株的基因组DNA中PCR扩增CyaA编码基因,克隆入载体pET30a,构建重组原核表达质粒pET30a/cyaA,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经8mol/L尿素变性、透析复性、DEAE阴离子交换柱纯化后,采用Western blot法鉴定其反应原性。结果重组原核表达质粒pET30a/cyaA经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的20%;纯化的重组蛋白纯度达90%左右,可与全细胞百日咳疫苗和无细胞百日咳疫苗免疫血清结合。结论已成功克隆了百日咳杆菌cyaA基因,并在大肠杆菌中表达了重组CyaA蛋白,为进一步开展CyaA的应用研究奠定了基础。

关键词(KeyWords): 百日咳杆菌;腺苷酸环化酶毒素基因;克隆;表达

Abstract:

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基金项目(Foundation):

作者(Author): 石碧珠;张华捷;孟民杰;张庶民;

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