中国生物制品学杂志

2016, v.29(04) 348-353

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人葡萄糖调节蛋白78shRNA真核表达质粒的构建及其稳定转染A549细胞系的建立
Construction of eukaryotic expression vector for glucose regulated protein 78-shRNA and establishment of stably transfected A549 cell line

陈昌明;孙玲玲;林丽珠;

摘要(Abstract):

目的构建人葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 k D,GRP78)shRNA真核表达质粒,并建立其稳定转染A549细胞系。方法根据Gen Bank中登录的人GRP78基因序列(3309)设计3对互补寡聚单链DNA干扰序列(GRP78-mi R-1、GRP78-mi R-2、GRP78-mi R-3)及1对阴性对照,分别插入至载体pc DNA6.2TM-GW/Em GFP,构建shRNA真核表达质粒。在Lipofectamine 3000介导下将各shRNA真核表达质粒分别转染A549细胞,并经Blasticidin S HCl加压筛选稳定的转染细胞系。实时荧光定量PCR和Western blot法检测A549细胞中GRP78基因m RNA转录和蛋白表达水平。结果各shRNA真核表达质粒经测序鉴定证明均构建正确。稳定转染shRNA真核表达质粒的A549细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与空白对照组比较,A549细胞中GRP78基因m RNA转录和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),阴性对照组无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建了人GRP78的shRNA真核表达质粒,并建立了其稳定转染的A549细胞模型,为进一步研究GRP78在肺癌细胞的侵袭和转移中的作用机制奠定了基础。

关键词(KeyWords): 人葡萄糖调节蛋白78;RNA干扰;真核表达;基因重组;A549细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(81273963,81403227);; 广东省自然科学基金重点项目(S2012020010886)

作者(Author): 陈昌明;孙玲玲;林丽珠;

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DOI:

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