中国生物制品学杂志

2008, (08) 675-678

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原发性开角型青光眼致病基因MYOC真核表达质粒的构建及其在COS-7细胞中的表达
Construction of Eukaryotic Expression Vector for Pathogenic Gene MYOC of Primary Open Angle Glaucoma and Its Expression in COS-7 Cells

王建文;刘建巨;周文艳;刘宏宇;

摘要(Abstract):

目的构建原发性开角型青光眼(POAG)致病基因MYOC的真核表达质粒,并在COS-7细胞中表达MYOC蛋白。方法用RT-PCR法扩增人眼组织(角膜缘)MYOC基因cDNA,纯化回收后,克隆入pGEM-T载体,再亚克隆入真核表达质粒pEGFP-N3,构建重组表达质粒pEGFP-N3-MYOC,转染COS-7细胞,用荧光显微镜观察MYOC蛋白在COS-7细胞中的表达,Western blot分析MYOC蛋白分泌特点。结果经酶切和DNA测序鉴定,证实重组表达质粒pEGFP-N3-MYOC构建正确,荧光显微镜观察MYOC蛋白能在COS-7细胞中表达,并且定位在细胞质中,而绿色荧光蛋白分布在整个细胞内。Western blot结果显示,MYOC蛋白能分泌到细胞外。结论已成功构建MYOC基因真核表达质粒,并能在COS-7细胞中表达MYOC蛋白,为进一步研究POAG发病机制奠定了基础。

关键词(KeyWords): 原发性开角型青光眼;致病基因;真核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 黑龙江省青年基金资助(QC07C94);; 哈尔滨医科大学附属第一医院科研基金(2007050)

作者(Author): 王建文;刘建巨;周文艳;刘宏宇;

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DOI: 10.13200/j.cjb.2008.08.40.wangjw.004

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