中国生物制品学杂志

2009, v.22(11) 1080-1083

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乙型肝炎病毒P蛋白在大肠杆菌中的分段表达及纯化
Fractional Expression of P Protein of Hepatitis B Virus in E. coli and Purification of Expressed Product

任鹏程;张旭东;吕海港;祁富军;昝玉玲;刘怡;安丽君;

摘要(Abstract):

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)P基因分段重组原核表达质粒,并进行目的蛋白的表达和纯化。方法PCR扩增HBVP基因的不同片段(1~534、1008~2040和2043~2526bp),分别经双酶切后克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组原核表达质粒,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行可溶性分析。用Ni2+-NTA凝胶亲和层析柱纯化融合蛋白,并进行Westernblot分析。结果重组原核表达质粒经酶切及测序证明构建正确。表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,表达量分别约占菌体总蛋白的34%、40%和36%。经Ni2+-NTA纯化的目的蛋白纯度达90%以上,且具有良好的反应原性。结论已成功构建了HBVP基因分段重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了重组蛋白,为研究HBVP蛋白的功能及病毒复制机制奠定了基础。

关键词(KeyWords): 乙型肝炎病毒;P蛋白;原核表达;病毒复制

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 陕西省自然科学基金[2007K14-02(3)]

作者(Author): 任鹏程;张旭东;吕海港;祁富军;昝玉玲;刘怡;安丽君;

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