中国生物制品学杂志

2008, (03) 185-189

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抗菌肽Cecropin D在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定
Expression of Antibacterial Peptide Cecropin D in Pichia pastoris and Purification and Activity of Expressed Product

尹娜;李鸿钧;彭梅;谢天宏;张光明;施锐;孙茂盛;

摘要(Abstract):

目的在毕赤酵母GS115中表达抗菌肽Cecropin D,并检测其抗菌活性。方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性,人工合成6条寡聚核苷酸片段,经磷酸化、退火、连接并克隆入酵母表达载体pPIC9K。重组表达质粒pPIC9K-D转化至毕赤酵母菌GS115,经G418筛选,阳性高拷贝克隆用0.5%的甲醇诱导表达,表达产物经CM-Sepharose层析柱纯化,Tricine-SDS-PAGE分析,琼脂糖扩散法和比浊法测定其抗菌活性。结果经Tricine-SDS-PAGE检测,在相对分子质量3900左右处可见目的蛋白表达条带,纯化后的目的蛋白纯度达90%以上,获得的抗菌肽Cecropin D对一些革兰阳性菌和革兰阴性菌均有抑菌活性。结论抗菌肽Cecropin D成功地在毕赤酵母中分泌表达,为以后深入研究抗菌肽奠定了基础。

关键词(KeyWords): 抗菌肽;Cecropin D;毕赤酵母;分泌表达;抗菌活性

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 云南省自然科学基金资助项目(No:2004C0029Q)

作者(Author): 尹娜;李鸿钧;彭梅;谢天宏;张光明;施锐;孙茂盛;

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