中国生物制品学杂志

2015, v.28(04) 339-343

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HIV-1 Vpu蛋白在毕赤酵母中的表达和纯化
Expression of human immunodeficiency virus type 1 Vpu protein in Pichia pastoris and purification of expressed product

王娇;刘伟;胡秦;李泽琳;曾毅;

摘要(Abstract):

目的在毕赤酵母中表达并纯化人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)辅助调节蛋白Vpu。方法从质粒p CDNA3.1-vphu中PCR扩增vphu基因,插入毕赤酵母表达载体p PICZαA,构建重组表达质粒p PICZαA-vphu,转化巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达带有6×His标签的重组Vpu蛋白。表达产物经Ni-Agarose 6×His标签纯化柱纯化。表达和纯化产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒p PICZαA-vphu经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约16 000,主要存在于细胞内;纯化后杂蛋白减少,与抗VPU抗体和抗His标签抗体均可结合,浓度为224μg/ml。结论利用毕赤酵母表达系统成功表达并纯化了HIV-1 Vpu蛋白,纯化的蛋白具有良好的抗原活性,为进一步研究其结构和功能以及靶点药物筛选模型的建立奠定了基础。

关键词(KeyWords): 人类免疫缺陷病毒1型;Vpu蛋白;毕赤酵母;表达;纯化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(81202976);; 北京市自然科学基金(7142013)

作者(Author): 王娇;刘伟;胡秦;李泽琳;曾毅;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.000842

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