中国生物制品学杂志

2015, v.28(04) 372-376+382

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肺炎链球菌表面蛋白A的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备
Expression and purification of pneumococcal surface protein A and preparation of its polyclonal antibodies

徐悦玥;蔡冉;马颖;尚彦红;袁敬宇;张素芬;李越希;

摘要(Abstract):

目的原核表达、纯化肺炎链球菌表面蛋白A(pneumococcal surface protein A,Psp A),并制备多克隆抗体。方法应用ANTHEWIN、DNAstar等分子生物学软件,对Psp A氨基酸序列进行分析,筛选出抗原表位富集区(第33~109个氨基酸),选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化学合成全新的基因序列pspa,插入质粒p GEX-4T-2和p ET28a(+)中,构建重组表达质粒p GEX-4T-2-pspa和p ET28a(+)-pspa,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。分别纯化带有GST标签和His标签的Psp A重组蛋白GST-Psp A和His-Psp A,以His-Psp A作为免疫原,经背部多点免疫新西兰大耳白兔,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果两种重组表达质粒p GEX-4T-2-pspa和p ET28a(+)-pspa经双酶切鉴定构建正确;表达的两种重组蛋白GST-Psp A和His-Psp A相对分子质量分别约为33 000和18 000,均为可溶性表达,纯化后目的蛋白条带均无降解,纯度约为95%,蛋白浓度分别为2和0.2 mg/ml;制备的兔抗血清效价较高,可达1∶200 000,且特异性较好。结论原核表达并纯化了肺炎链球菌Psp A融合蛋白,并制备了特异性良好的高效价兔抗血清,为下一步建立肺炎链球菌快速检测技术奠定了基础。

关键词(KeyWords): 肺炎链球菌表面蛋白A;原核细胞;基因表达;纯化;多克隆抗体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家传染病重大专项(No. 2013ZX10004804鄄003);;全军十二五重大项目(No. AWS11C001);;

作者(Author): 徐悦玥;蔡冉;马颖;尚彦红;袁敬宇;张素芬;李越希;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.000850

参考文献(References):

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