中国生物制品学杂志

2014, v.27(07) 890-894

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金黄色葡萄球菌表面蛋白的表达及其多克隆抗体的制备
Expression of Staphylococcus aureus surface protein and preparation of its polyclonal antibody

许桂丽;蔡冉;周洁;马颖;袁敬宇;徐悦玥;张素芬;尚彦红;潘英;李素芹;李越希;

摘要(Abstract):

目的在原核细胞中表达金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin-binding protein A,FnBPA),制备其多克隆抗体。方法筛选FnBPA抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX4T-2-fnbpa和pET-28a-fnbpa,分别转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,分别用High Affinity GST-NTA resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的FnBPA-His融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以FnBPA-GST融合蛋白为检测抗原,采用间接ELISA法检测血清效价,Western blot法检测特异性。结果经双酶切及测序鉴定,证明质粒pGEX4T-2-fnbpa和pET-28a-fnbpa构建正确;在相对分子质量约42 000和19 000处,分别可见FnBPA-GST和FnBPA-His融合蛋白的表达,表达量分别约占菌体总蛋白的30%和20%,均以可溶性形式表达,纯度均在90%以上;免疫新西兰大白兔后获得高效价的特异性兔抗血清。结论2种标签的融合蛋白均具有较好的免疫原性和抗原性,所制备的多克隆抗体具有较好的特异性,为金黄色葡萄球菌检测方法的建立奠定了基础。

关键词(KeyWords): 金黄色葡萄球菌;纤连蛋白结合蛋白;多克隆抗体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家传染病重大专项(2013ZX10004804-003);; 全军十二五重大项目(AWS11C001)

作者(Author): 许桂丽;蔡冉;周洁;马颖;袁敬宇;徐悦玥;张素芬;尚彦红;潘英;李素芹;李越希;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.000446

参考文献(References):

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