中国生物制品学杂志

2016, v.29(05) 514-518

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HIV-1gp140蛋白不同聚合体的纯化
Purification of various polymers of HIV-1 gp140

刘建东;何彦平;鞠斌;孙红岩;宋伟;葛向阳;任莉;刘颖;邵一鸣;郝彦玲;

摘要(Abstract):

目的对HIV-1 CN54膜蛋白gp140的不同聚合体进行纯化。方法将在哺乳动物细胞Free Style 293F中表达的gp140蛋白经过糖基化亲和层析、阴离子交换层析和凝胶排阻层析3种纯化方法进行分离,并对该纯化方法进行优化。采用ELISA方法检测不同结构抗原与广谱中和抗体的特异性反应。结果选择lentil lectin填料进行糖基化亲和层析,纯化的gp140蛋白为4.56 mg/L,得率为89.9%;选择弱阴离子填料DEAE用于阴离子交换层析,纯化的gp140蛋白为3.87 mg/L,得率为84.8%;凝胶排阻层析纯化获得了gp140蛋白的多聚体、三聚体+二聚体以及单体3种结构。不同结构的gp140蛋白可与CD4结合位点的广谱中和抗体VRC01以及结构依赖性的V3区特异性广谱中和抗体反应,具有较好的特异性,且不同聚合体在V3区结构依赖性抗体2G12的结合抗体反应上会存在一定差异。结论成功建立了HIV-1 gp140蛋白不同聚合体纯化的方法,该方法对于其他相似蛋白的纯化具有参考作用;不同结构的gp140蛋白的分离为进一步研究其免疫原性奠定了基础。

关键词(KeyWords): HIV;gp140蛋白;纯化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): “十二五”科技重大专项(2012ZX10001008);; 中国疾病预防控制中心青年科研基金(2010A101)

作者(Author): 刘建东;何彦平;鞠斌;孙红岩;宋伟;葛向阳;任莉;刘颖;邵一鸣;郝彦玲;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001329

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