中国生物制品学杂志

2012, v.25(01) 13-17

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AP2α重组腺病毒质粒的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达
Construction of recombinant adenovirus vector containing transcriptional factor activator protein 2α and its expression in rat mesenchymal stem cells

毕杨;龚敏;何昀;张赟;陈洁;李廷玉;

摘要(Abstract):

目的构建转录因子AP2α(Activator protein 2α)重组腺病毒质粒,感染大鼠骨髓间充质干细胞(Mesenchymalstem cells,MSCs),并检测其表达。方法从大鼠PC12细胞总RNA中PCR扩增AP2α基因,定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdtrace-TOX,构建重组质粒,与腺病毒骨架质粒pAd-Easy1在大肠杆菌BJ5183中同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd-AP2α,转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad-AP2α,感染大鼠骨髓MSCs,荧光显微镜下观察RFP的表达;Real-time PCR及Western blot检测AP2α的表达。结果 pAdtrace-AP2α质粒经PCR及双酶切鉴定,均可见约1 400 bp的目的基因条带,测序结果与GenBank报道一致,并正确克隆至腺病毒质粒中;重组腺病毒pAd-AP2α在HEK293细胞中包装,病毒滴度可达2.6×108pfu/ml;感染MSCs 48 h可观察到60%以上的RFP阳性细胞,经Real-time PCR及Western blot鉴定,感染后72 h,MSCs中AP2α的表达显著增高(P<0.01)。结论成功构建了携带转录因子AP2α的重组腺病毒质粒,其能有效感染MSCs,增强MSCs中AP2α的表达。

关键词(KeyWords): 转录因子AP2;腺病毒载体;骨髓间充质干细胞

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(30830106);; 重庆市自然科学基金(CSTC,2010BB5097);; 中国博士后基金(20100480667);; 重庆市卫生局医学科研项目(2010-2-217)

作者(Author): 毕杨;龚敏;何昀;张赟;陈洁;李廷玉;

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DOI: 10.13200/j.cjb.2012.01.18.biy.002

参考文献(References):

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