中国生物制品学杂志

2003, (05) 257-260

[打印本页] [关闭]
本期目录(Current Issue) | 过刊浏览(Past Issue) | 高级检索(Advanced Search)

人蛋白C cDNA突变体的设计、克隆与序列分析
Design, Cloning and Sequencing of cDNA Mutant of Human Protein C

贾莉玮,吕茂民,徐斯日古愣,沈永才,赵保全,章金刚

摘要(Abstract):

目的 通过对人蛋白C cDNA的定点突变,构建人蛋白C突变体cDNA,以期实现从哺乳动物细胞中直接表达出具有生物活性的人蛋白C产物。方法 针对人蛋白C cDNA序列设计引物以引入突变序列,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和重组PCR方法,从人胎肝总RNA中分别钓取人蛋白C的重链和轻链,经重组PCR反应将两者连接,然后将其克隆入pGEM-T载体中,经酶切和PCR鉴定后进行测序。结果 经RT-PCR和重组PCR扩增获得大小为1374 hp的cDNA片段,并成功构建了人蛋白C cDNA突变体的克隆质粒pGEM-T/mhPC,序列分析证实所引入的编码8个氨基酸短肽的核苷酸序列突变位点正确取代了人蛋白C的活性肽,获得人蛋白C突变体cD-NA的克隆。结论 已成功进行了人蛋白C cDNA的突变,获得了人蛋白c cDNA突变体的克隆,为进一步进行人蛋白C突变体cDNA的表达和活性鉴定奠定了基础。

关键词(KeyWords): 人蛋白C;突变体;RT-PCR;克隆;序列

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 军事医学科学院创新基金

作者(Author): 贾莉玮,吕茂民,徐斯日古愣,沈永才,赵保全,章金刚

Email:

DOI: 10.13200/j.cjb.2003.05.4.jialw.001

扩展功能
本文信息
服务与反馈
本文关键词相关文章
本文作者相关文章
中国知网
分享