中国生物制品学杂志

2012, v.25(08) 989-994

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人VEGF165和小鼠VEGF164共同抗原表位分析及验证
Analysis and verification of common antigenic epitope of mouse vascular endothelial growth factor(VEGF)164 and human VEGF165

刘英富;霍景瑞;范国才;孙志贤;王清明;

摘要(Abstract):

目的分析人VEGF165和小鼠VEGF164的共同抗原表位,为血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表位疫苗的设计和验证奠定基础。方法分析人VEGF165和小鼠VEGF164蛋白与KDR结合的关键位点,确定其共同表位。将共同表位插入到VEGF骨架蛋白中,扩增含共同表位的骨架蛋白基因,与原核表达载体pET-24a连接,构建重组表达质粒pET-24a-FV,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Sephacryl S-100凝胶柱进行纯化,纯化的蛋白进行SDS-PAGE分析。以纯化的表位展示蛋白免疫小鼠,获得免疫血清,ELISA法测定血清效价,Western blot和间接免疫荧光法检测免疫小鼠血清对小鼠VEGF164和VEGF165的识别。结果人VEGF165和小鼠VEGF164共同抗原表位为KDR 40s loop结合区的EYPDEIEYIFKP;重组表达质粒经双酶切及测序证明构建正确;表位展示蛋白主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的20%,纯度可达92%;小鼠VEGF164和人VEGF165均能与小鼠免疫血清发生反应,血清效价达到1∶104;免疫血清不仅能识别表位展示蛋白,还能识别小鼠VEGF164和人VEGF165单体和二聚体,还可与人HeLa、小鼠B16肿瘤细胞之间存在阳性反应,表明表位展示蛋白能展示VFGF的共同抗原表位。结论骨架蛋白展示的VEGF164和VEGF165共同表位免疫小鼠后,能产生针对这两个蛋白的特异免疫反应,证实EYPDEIEYIFKP表位是VEGF164和VEGF165的共同抗原表位。

关键词(KeyWords): 血管内皮生长因子;抗原表位;免疫

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 刘英富;霍景瑞;范国才;孙志贤;王清明;

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