中国生物制品学杂志

2015, v.28(04) 422-425

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检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法的建立及其应用
Development and application of double antibody sandwich Dot-ELISA for Neospora caninum infection in deer

田来明;杨滨僮;李智鹏;张桐嘉;宫鹏涛;李建华;王全楷;杨举;李赫;张西臣;

摘要(Abstract):

目的建立检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法,并进行初步应用。方法以双抗夹心ELISA方法的A490值对应Dot-ELISA方法显色结果的方式,建立双抗夹心Dot-ELISA方法检测结果判定标准,确定HRP标记的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1H11、包被抗体(抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1A1)、待测血清的最佳工作浓度,并对该方法的特异性、重复性及灵敏度进行验证。用建立的方法检测79份鹿血清,并与双抗夹心ELISA方法进行比较。结果确定该方法 HRP-H11抗体的最佳稀释度为1∶100,包被抗体最适工作浓度为0.3μg/片,待测血清稀释度为1∶8。自然感染犬新孢子虫的鹿阳性血清的敏感性稀释度为1∶64,与弓形虫阳性血清无交叉反应,敏感性、特异性较强;自然感染新孢子虫的鹿阳性血清3次检测结果重复性较好。该方法检测的76份鹿血清中,阳性12份,阳性率为15.2%,与双抗夹心ELISA方法检测结果一致。结论建立的双抗夹心Dot-ELISA方法可用于检测鹿群感染新孢子虫循环抗原,为新孢子虫病的诊断提供了新的方法。

关键词(KeyWords): 新孢子虫;鹿;双抗夹心Dot-ELISA方法;MIC6

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家重点基础研究发展计划(973计划)(2015CB150300);; 国家质检公益性行业专项(201410061);; 吉林省科技发展计划项目(20100222)

作者(Author): 田来明;杨滨僮;李智鹏;张桐嘉;宫鹏涛;李建华;王全楷;杨举;李赫;张西臣;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.000862

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