中国生物制品学杂志

2008, (03) 194-196+203

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天花粉蛋白的定点突变及聚乙二醇修饰
Site-directed Mutation of Trichosanthin and Chemical Modification of Mutant by Polyethylene Glycol

安群星;雷迎峰;穆士杰;张献清;陈蕤;夏爱军;陈晨;易静;吴原茹;徐志凯;

摘要(Abstract):

目的对天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)进行定点突变及聚乙二醇(PEG)修饰,并对修饰产物进行DNA酶活性分析。方法选择TCS分子上可能的抗原决定簇位点(YFF81-83和KR173-174)进行定点突变,将所构建的两个突变体(TCSYFF81-83ACS和TCSKR173-174CG)在大肠杆菌中表达,并纯化表达产物。通过第82位和173位引入的半胱氨酸残基,分别对突变体蛋白进行PEG定点修饰。通过与突变型TCS比较,分析两个PEG修饰型TCS的DNA酶活性。结果突变的TCS经酶切鉴定及测序分析,证明质粒构建正确,表达的目的蛋白相对分子质量约为30000,经PEG修饰后,相对分子质量约为40000。初步分析显示,与突变型TCS相比,所构建的两个PEG修饰型TCS也显示出类似DNA酶活性。结论成功进行了TCS的定点突变及PEG修饰,为基因工程及化学修饰方法改造TCS提供了一条可行的途径。

关键词(KeyWords): 天花粉蛋白;定点突变;聚乙二醇;修饰

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 陕西省科技计划项目(2003K10G9);; 西京医院学科助推计划项目(XJZT07M09)

作者(Author): 安群星;雷迎峰;穆士杰;张献清;陈蕤;夏爱军;陈晨;易静;吴原茹;徐志凯;

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