中国生物制品学杂志

2019, v.32(05) 579-583

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23F型肺炎链球菌多糖蛋白结合物游离蛋白含量检测方法的建立及验证
Development and validation of a method for determination of free protein content in type 23F pneumococcal polysaccharide conjugate

邓海清;尹珊珊;郝倩;顾行举;刘杨;张艳红;高宇皎;刘建凯;

摘要(Abstract):

目的建立一种检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量的方法,并进行方法学验证。方法采用体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography and high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法检测23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量。色谱柱:TSKgel G3000(300 mm×78 mm,5μm);流动相:10 mmol/L PBS(150 mmol/L NaCl,pH 6. 8);检测波长:214 nm;流速:0. 5 m L/min;柱温:25℃;自动进样:100μL。同时对该方法进行线性、精密度、准确度、耐用性及专属性验证。结果建立的方法在纯化载体蛋白破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)含量为3~18μg/mL时,与峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数(R2)> 0. 99;23F-2017001、23F-2017002、23F-2017003批供试品重复性相对标准偏差(RSD)分别为0. 1%、0. 3%、1. 0%,中间精密性RSD分别为3. 7%、8. 5%、4. 8%;加入6、8、10μg/mL纯化载体蛋白TT样品的3次检测结果回收率在93. 2%~102. 6%之间,回收率的RSD均为0. 6%;进样温度为20~30℃条件下的保留时间和峰面积相对偏倚在-0. 1%~0. 5%之间;流动相溶液中含甘氨酸及低浓度硼酸时对检测结果无干扰,硼酸浓度为20 mmol/L以上时对游离蛋白峰检测有一定干扰。结论本实验建立的方法具有良好的线性、精密性、准确性、耐用性及专属性,可用于23F型肺炎链球菌多糖结合物游离蛋白含量检测。

关键词(KeyWords): 肺炎链球菌;多糖蛋白结合物;游离蛋白;体积排阻高效液相色谱

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 邓海清;尹珊珊;郝倩;顾行举;刘杨;张艳红;高宇皎;刘建凯;

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