中国生物制品学杂志

2017, v.30(08) 838-842+846

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小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达、纯化及其抗体间接ELISA检测方法的建立
Prokaryotic expression and purification of Peste des petits ruminants virus N protein and development of indirect ELISA method for its antibody

王东方;刘晔;米立娟;张守峰;扈荣良;

摘要(Abstract):

目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits of ruminants virus,PPRV)N蛋白,纯化后建立其抗体间接ELISA检测方法。方法人工合成PPRV N蛋白基因序列,并构建重组质粒pSumo-mut-N,转化至大肠埃希菌Arctic Express中,IPTG诱导表达,并对IPTG浓度和诱导时间进行优化。表达的融合蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,以其作为包被抗原建立PPRV抗体间接ELISA检测方法,对临床样本进行检测。结果重组表达质粒pSumo-mut-N经双酶切和测序证明构建正确。N蛋白最佳诱导表达条件为0.5 mmol/L IPTG于11℃诱导10 h。表达的重组蛋白相对分子质量约71 900,纯化后纯度在80%以上,浓度可达120μg/ml,与PPRV阳性抗体具有良好的反应原性。基于N蛋白建立的PPRV抗体间接ELISA方法样品检测结果与已知血清之间的符合率为100%。结论原核表达并纯化了PPRV N蛋白,建立的基于N蛋白的PPRV抗体ELISA检测方法为PPRV抗体间接ELISA检测试剂盒的研制和应用奠定了基础,对于流行病学免疫监测及控制PPRV的流行具有重要意义。

关键词(KeyWords): 小反刍兽疫病毒;N蛋白;原核表达;抗体检测;酶联免疫吸附测定

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 农业公益性行业项目:新型动物疾病诊断技术应用研究(201203056)

作者(Author): 王东方;刘晔;米立娟;张守峰;扈荣良;

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参考文献(References):

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