中国生物制品学杂志

2015, v.28(08) 800-803

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梅毒螺旋体-15脂蛋白的原核表达及其纯化
Prokaryotic expression and purification of Treponema pallidum-15 lipoprotein

边国慧;杨春晖;高瞻;徐敏;何苗;

摘要(Abstract):

目的原核表达梅毒螺旋体-15(Treponema pallidum-15,TP-15)脂蛋白基因,并进行纯化及鉴定。方法人工合成455 bp的TP-15基因序列,克隆至原核表达载体p ETDuet-1,构建原核表达质粒p ETDuet-1/TP-15,经双酶切及测序鉴定后,将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达;表达产物经Ni2+亲和层析纯化,纯化产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果重组质粒p ETDuet-1/TP-15经双酶切及测序鉴定证明构建正确;表达产物相对分子质量约27 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的2.34%,纯化后蛋白纯度达99%以上,可与HRP标记的梅毒螺旋体多克隆抗体发生特异性结合。结论构建了原核表达质粒p ETDuet-1/TP-15,并于E.coli中成功表达,纯化后获得了高纯度的TP-15蛋白,为进一步研究建立梅毒病人血清检测试剂盒奠定了基础。

关键词(KeyWords): 梅毒螺旋体-15;脂蛋白;原核细胞;基因表达;纯化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 边国慧;杨春晖;高瞻;徐敏;何苗;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001002

参考文献(References):

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