中国生物制品学杂志

2016, v.29(11) 1159-1161+1168

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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E胞外区的真核表达及鉴定
Eukaryotic expression and identification of extracellular domain of glycoprotein E of varicella-zoster virus

李春明;朱晓文;赫宝双;朱琳;于铁男;张宇;

摘要(Abstract):

目的真核表达水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)糖蛋白E胞外区(gE_(537)),并进行鉴定。方法用Oka株VZV(VZV-Oka)感染人二倍体细胞(2BS株),提取基因组DNA,以其为模板,PCR扩增gE_(537)目的片段,克隆至载体pCI-neo,构建重组真核表达质粒p CI-neo-g E_(537)-His。大量扩增后提取质粒,转染293FT细胞,瞬时表达,经镍柱纯化,获得目的蛋白gE_(537)-His,Western blot和ELISA法进行鉴定。结果经双酶切及测序鉴定,重组真核表达质粒pCIneo-g E_(537)-His构建成功。200 mmol/L咪唑洗脱液为洗脱目的蛋白的最佳咪唑浓度。纯化产物可与鼠抗gE糖蛋白单抗于相对分子质量约90 000处发生特异性结合,且可与mAb-10、mAb-12抗gE单抗发生反应。结论利用293FT细胞成功表达了gE_(537),为其免疫原性等相关研究奠定了基础。

关键词(KeyWords): 水痘-带状疱疹病毒;糖蛋白;真核细胞;基因表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 李春明;朱晓文;赫宝双;朱琳;于铁男;张宇;

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