中国生物制品学杂志

2008, (09) 765-767

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Cyclin A-Cdk2对B细胞成熟因子的体外磷酸化作用
In Vitro Phosphorylation of B Cell Maturation Factor with Cyclin A-Cdk2

李清;何侃;高畅;李晶华;金英花;

摘要(Abstract):

目的原核表达并纯化仅含BH3结构域的细胞凋亡调控蛋白BMF,并进行CyclinA-Cdk2特异性底物的体外磷酸化检测。方法从HeLa细胞中扩增人源BMF基因,克隆至pGEX-6P-1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Glutathione Sepharose 4B凝胶柱亲和层析纯化。以纯化的融合蛋白GST-BMF作为底物,免疫共沉淀得到的CyclinA-Cdk2作为酶源,并以Cdk2的已知底物HistoneH1作为阳性对照,进行体外磷酸化试验。结果BMF基因的原核表达载体构建正确,表达的融合蛋白GST-BMF约占菌体总蛋白的40%,纯化后纯度约为90%。在体外磷酸化试验中,未出现与目的蛋白GST-BMF相对分子质量相近的放射自显影带。结论BMF蛋白在无细胞体系中不能被CyclinA-Cdk2磷酸化。

关键词(KeyWords): 凋亡;B细胞成熟因子;Cyclin A-Cdk2;体外磷酸化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 李清;何侃;高畅;李晶华;金英花;

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