中国生物制品学杂志

2019, v.32(10) 1087-1091

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GⅡ.21型诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达、纯化及鉴定
Expression,purification and identification of recombinant Norovirus genotype GⅡ.21 capsid protein

李攀;刘术敏;邓丹妹;吴常伟;程英杰;黄恩启;

摘要(Abstract):

目的构建含有GⅡ.21型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1基因的重组质粒,通过PichiaPink毕赤酵母表达VP1蛋白,并鉴定纯化产物。方法合成NoV GⅡ.21 VP1蛋白基因序列,将其连接至pPink-HC载体,构建重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1;经测序鉴定后,电转化毕赤酵母PichiaPink,甲醇诱导目的蛋白表达;采用AKTA pure M150型纯化仪纯化目的蛋白,Western blot法分析其抗原性,SEC-HPLC法检测纯化蛋白出峰时间。结果经测序鉴定,重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1构建正确;纯化的目的蛋白VP1纯度在95%以上,能与抗NoV病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗体发生反应;测定目的蛋白出峰时间为16. 923 min,与NoV VLP理论出峰时间一致。结论成功在毕赤酵母高表达了GⅡ.21衣壳蛋白VP1,并制备了高纯度及良好抗原性的目的蛋白,为多价重组NoV疫苗的研发及规模化生产奠定了基础。

关键词(KeyWords): GⅡ.21诺如病毒;VP1蛋白;毕赤酵母

Abstract:

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基金项目(Foundation):

作者(Author): 李攀;刘术敏;邓丹妹;吴常伟;程英杰;黄恩启;

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