中国生物制品学杂志

2010, v.23(02) 142-145

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小鼠截短型可溶性腺苷酸环化酶基因的克隆表达及活性鉴定
Gene Cloning, Expression and Activity of Mouse Truncated Soluble Adenylyl Cyclase

王文;戚中田;

摘要(Abstract):

目的克隆表达小鼠截短型可溶性腺苷酸环化酶(mtsAC)基因,并检测其活性,为后续研究提供技术平台。方法Trizol法提取小鼠睾丸组织总RNA,RT-PCR法扩增mtsAC基因,经测序正确后,克隆至真核表达载体pcDNA4-V5,转染HEK293T细胞,Western blot及免疫荧光染色法检测目的蛋白的表达,并检测HEK293T细胞中cAMP的水平。结果所构建的重组表达质粒pcDNA4-V5-mtsAC经酶切和测序证明构建正确,插入的mtsAC基因长度为1549bp;表达的重组mtsAC蛋白相对分子质量为48000,在胞浆及胞核中呈均一性表达;转染质粒pcDNA4-V5-mtsAC的HEK293T细胞中cAMP的水平较未转染的HEK293T细胞升高约17倍,并可被NaHCO3和CaCl2激活。结论已成功克隆了mtsAC基因,并在HEK293T细胞中表达了具有活性的重组mtsAC蛋白,建立了可用于mtsAC特性研究及男性不育药物筛选的技术平台。

关键词(KeyWords): 可溶性腺苷酸环化酶;克隆;表达;cAMP

Abstract:

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基金项目(Foundation):

作者(Author): 王文;戚中田;

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参考文献(References):

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