中国生物制品学杂志

2020, v.33(01) 61-65

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大鼠血清中抗轮状病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立及验证
Development and validation of an indirect ELISA for IgG against rotavirus in sera of rats

程满荣;徐葛林;李庆亮;杨露;李望华;孙营;彭瑾;

摘要(Abstract):

目的建立大鼠血清中抗轮状病毒(rotavirus,RV)IgG抗体的间接ELISA检测方法,并进行验证。方法以兔抗RV多抗血清作为包被抗体,RV作为检测抗原,建立抗RV IgG抗体间接ELISA检测方法。棋盘滴定法优化包被抗体浓度(1∶1 000~1∶1 024 000)和血清浓度(1∶20~1∶2 560),直接ELISA法优化生物素标记的羊抗大鼠IgG工作浓度(1∶1 000~1∶128 000稀释)。采用优化的间接ELISA法检测39份RV抗体阴性大鼠血清样品,样品A_(450)均值加上3倍标准差作为该检测条件的阴阳性判定界值。同时对该方法的专属性、检测限、耐用性进行验证。分别采用建立的方法及荧光灶形成单位(fluorescent focus-forming unit,FFU)方法检测96份临床前安全性评价试验样品,评价二者的符合率。结果建立的间接ELISA法的最适反应条件为:包被抗体稀释倍数为1∶8 000,血清稀释倍数为1∶80,生物素标记的羊抗大鼠IgG工作浓度为1∶4 000,阴阳性判定界值为0. 105。方法检测限为0. 031,且具有良好的专属性及耐用性。建立的方法与FFU方法检测结果的符合率达95. 8%。结论成功建立了抗RV IgG抗体的间接ELISA检测方法,且方法准确可靠,为临床前安全性评价试验提供了一种简便的血清学诊断方法。

关键词(KeyWords): 轮状病毒;IgG抗体;间接ELISA法

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 科技部863项目(2012AA02A401);; 湖北省技术创新专项重大项目(2018ACA120)

作者(Author): 程满荣;徐葛林;李庆亮;杨露;李望华;孙营;彭瑾;

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