中国生物制品学杂志

2016, v.29(05) 503-506+510

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甲型副伤寒细菌单克隆抗体的制备及其初步应用
Preparation and preliminary application of monoclonal antibodies against Salmonella paratyphi A

代云波;李生迪;钱雯;黄微;王志慧;江曼;台晓媛;樊会兰;吴俊波;吴凯;马波;李刚山;李作生;

摘要(Abstract):

目的制备甲型副伤寒特异性多糖(O-specific polysaccharide,O-SP)单克隆抗体,建立鉴定甲型副伤寒沙门血清型细菌的全菌体ELISA和O-SP的竞争ELISA定量检测方法。方法用甲型副伤寒全菌体免疫小鼠,通过常规方法融合,以破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)为载体偶联的O-SP为筛选检测抗原,间接ELISA法筛选分泌抗甲型副伤寒O-SP的特异性抗体杂交瘤细胞株;分别以甲型和乙型副伤寒的O-SP-TT及伤寒Vi-TT为包被抗原,检测制备的单克隆抗体与不同血清型细菌多糖的交叉反应;以不同沙门菌菌体为包被抗原,用制备的1株甲型副伤寒O-SP特异性单克隆抗体进行菌体间接ELISA,检测细菌血清型;用该株单克隆抗体为竞争抗体,建立定量检测样品中O-SP的竞争ELISA方法。结果筛选出6株分泌抗甲型副伤寒O-SP抗体的杂交瘤阳性细胞株;其中2株仅与甲型副伤寒O-SP呈特异性反应,其余4株与乙型副伤寒O-SP呈交叉反应;用其中1株单克隆抗体进行的菌体间接ELISA显示,该株单克隆抗体仅与甲型副伤寒沙门菌反应,而不与伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌和肠炎沙门菌反应;竞争ELISA定量检测O-SP的检测范围在0.4~0.003 2μg/ml最准确。结论制备的特异性抗甲型副伤寒O-SP的单克隆抗体可用于甲型副伤寒细菌血清型快速鉴定和O-SP的竞争ELISA定量检测。

关键词(KeyWords): 甲型副伤寒;单克隆抗体;酶联免疫吸附试验

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 云南省科技厅重点新产品开发计划“预防伤寒疾病生物制品一类新药临床前研究”(2014BC003)

作者(Author): 代云波;李生迪;钱雯;黄微;王志慧;江曼;台晓媛;樊会兰;吴俊波;吴凯;马波;李刚山;李作生;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001326

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