中国生物制品学杂志

2016, v.29(05) 528-532+537

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牛血清IgG双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立及应用
Development and application of double antibody sandwich ELISA method for quantitative determination of bovine serum immunoglobulin G

赵风强;张明祥;韩金乐;苏玉坡;谢鹤;胡腾月;贾继宗;叶祥忠;

摘要(Abstract):

目的建立牛血清Ig G(bovine immunoglobulin G,BIg G)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法。方法用BIg G-Fc免疫BALB/c小鼠,制备抗BIg G单抗,确定包被抗体及酶标抗体后,建立定量检测BIg G抗原的双抗体夹心ELISA方法,并验证该方法的准确度、精密度、稳定性、特异性,确定该方法的线性范围和定量限度。应用建立的方法检测不同厂家、不同批次牛血清及纯化EV71样品中BIg G抗原残留量。结果建立了以3E12D2为包被单抗(8.0μg/ml,100μl/孔),4A2G1B1-HRP为酶标抗体(1∶1 000稀释,100μl/孔)定量检测BIg G的双抗体夹心ELISA方法,该方法的线性范围为0.3~9.6 ng/ml,R~2>0.99,定量限度为0.3 ng/ml;回收率在94.1%~108.5%之间,同一实验者重复检测和不同实验者检测的变异系数均<10%;37℃放置3和6 d的稳定性均>90%;该试剂样品与BIg G可发生特异性反应,与其他动物源血清无交叉反应。9批牛血清中BIg G含量均存在差异;精纯样品较粗纯样品BSA和BIg G均明显去除,但BIg G占牛血清残留量(BSA+BIg G)的比例却明显上升。结论建立的BIg G抗原的双抗体夹心ELISA方法符合定量检测需要,可用于牛血清的质量质控及残留量检测。

关键词(KeyWords): 牛血清IgG;单克隆抗体;双抗体夹心ELISA

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 赵风强;张明祥;韩金乐;苏玉坡;谢鹤;胡腾月;贾继宗;叶祥忠;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001332

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