中国生物制品学杂志

2012, v.25(08) 967-972

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α-甘露糖苷酶Ⅱ基因沉默对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响
Effect of Golgi α-mannosidaseⅡ gene silence on proliferation and apoptosis of human gastric carcinoma BGC-823 cells

杨雅莹;易永芬;

摘要(Abstract):

目的探讨沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)基因的表达对人胃癌BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。方法根据GenBank中登录的人GMⅡ基因mRNA序列及siRNA设计原则,设计了4条siRNA,并构建4个针对靶点的重组表达质粒pGPU6/GFP/Neo-1140、pGPU6/GFP/Neo-1303、pGPU6/GFP/Neo-1406和pGPU6/GFP/Neo-1817,同时合成阴性对照质粒pGPU6/GFP/Neo-shNC,经Lipofectamine 2000分别转染BGC-823细胞,通过RT-PCR及Western blot检测转染细胞中GMⅡ基因mRNA和蛋白的表达,筛选沉默效果最佳的质粒;经MTT试验、细胞周期分布分析、Hoechst33258和Annexin V-FITC/PI双染试验分别检测沉默GMⅡ基因对人BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。结果 pGPU6/GFP/Neo-1303组GMⅡ基因mRNA和蛋白的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),表明pGPU6/GFP/Neo-1303组沉默效果最好;与空白对照组和阴性对照组相比,pGPU6/GFP/Neo-1303组BGC-823细胞增殖抑制率明显升高(P<0.01),G1期细胞比例明显上升(P<0.05),S期细胞比例明显下降(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论已成功沉默BGC-823细胞中GMⅡ基因的表达,从而抑制BGC-823细胞的增殖并促进其凋亡,GMⅡ可能成为防治胃癌的新靶点。

关键词(KeyWords): RNA干扰;高尔基体;α甘露糖苷酶;胃癌;基因沉默;细胞增殖;细胞凋亡

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金资助项目(30672431);; 教育部博士点基金(20060631006);; 重庆市自然科学基金项目(2010BB5361)

作者(Author): 杨雅莹;易永芬;

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