中国生物制品学杂志

2017, v.30(08) 855-859

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牛副流感病毒3型TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立
Development of real-time fluorescent quantitative PCR based on Taqman-MGB probe for determination of bovine parainfluenza virus type 3

闻晓波;张玲玲;张峣;刘阳阳;倪宏波;冉旭华;

摘要(Abstract):

目的建立检测牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)的Taq Man荧光定量PCR方法。方法根据GenBank中公布的BPIV3序列,选取P基因上保守区域设计特异性引物及TaqMan-MGB探针。优化反应体系,建立实时荧光定量PCR方法,并对方法的特异性、重复性和敏感性进行验证。结果标准曲线在104~108copies/μl范围内具有良好的线性关系,R~2达到0.999,斜率为-3.203,扩增效率为105.2%。利用该方法对BPIV3a及BPIV3c进行检测,结果为阳性,对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(infectioils bovine rhinotraeheitis virus,IBRV)进行检测,结果呈阴性。3个浓度质粒标准品,重复3次检测,CV均小于1.5%。建立的方法对质粒的最小检出量为1.0×10~2 copies/μl。结论建立了能够检测BPIV3a及BPIV3c的TaqMan-MGB探针实时定量PCR方法,该方法特异性较强,重复性及敏感性良好,为早期诊断及定量分析提供了更快速、稳定、可靠的方法。

关键词(KeyWords): 牛副流感病毒3型;TaqMan-MGB探针;荧光定量PCR

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 黑龙江省农垦总局攻关课题(HNK125B-11-08A);; “十二五”农村领域国家科技计划课题(2012BAD12B03-3);; 黑龙江八一农垦大学研究生创新科研项目(YJSCX2016-Y27)

作者(Author): 闻晓波;张玲玲;张峣;刘阳阳;倪宏波;冉旭华;

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参考文献(References):

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