中国生物制品学杂志

2019, v.32(08) 870-873+879

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地高辛标记Nkx2.1基因RNA探针的制备及应用
Preparation and application of digoxin-labeled Nkx2.1 gene RNA probe

张凯丽;孙雨晴;王宇飞;赵虹;郝宇卉;杨丽红;白云;刘志贞;

摘要(Abstract):

目的制备地高辛(digoxigenin,DIG)标记的Nkx2. 1基因RNA探针,用于小鼠胚胎早期神经管发育关键时期Nkx2. 1基因表达的检测。方法巢式PCR法扩增Nkx2. 1基因,将其克隆至pGEM-T载体;以其为模板,通过Nkx2. 1特异性引物,PCR扩增RNA探针转录模板;采用T7 RNA聚合酶,制备DIG标记的正义、反义Nkx2. 1 RNA原位杂交探针。经全胚胎原位杂交(whole-mount in situ hybridization,WM-ISH)技术分析胚胎8. 5、9. 5、10. 5 d小鼠体内Nkx2. 1基因的表达情况。结果制备的探针浓度为1 521. 986 ng/mL,纯度A260/280=2. 39。Nkx2. 1基因反义探针能高效检测到Nkx2. 1基因在胚胎8. 5、9. 5及10. 5 d小鼠神经系统中表达,正义探针未能检测到表达信号。结论成功制备了特异高效的DIG标记的Nkx2. 1基因RNA原位杂交探针,为进一步研究Nkx2. 1基因在小鼠胚胎组织中的表达,探索其在神经管发育中的作用机制奠定了基础。

关键词(KeyWords): Nkx2. 1基因;RNA探针;全胚胎原位杂交

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(81300487);; 山西省回国留学人员科研资助项目(2016-051);山西省回国留学人员科研资助项目(2012-048);; 山西省重点研发计划(指南)项目(201703D421022)

作者(Author): 张凯丽;孙雨晴;王宇飞;赵虹;郝宇卉;杨丽红;白云;刘志贞;

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