薛刚;程莹;曹永宽;刘然义;田伏洲;黄文林;

• 1:成都军区总医院全军普通外科中心
• 2:成都军区总医院内分泌科
• 3:成都军区总医院全军普通外科中心
• 4:中山大学肿瘤防治中心肿瘤学国家重点实验室

摘要(Abstract)：

目的构建携带人次级淋巴组织趋化因子(6Ckine)和γ-干扰素(IFNγ)融合基因的重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNγ,并在真核细胞中表达。方法RT-PCR法分别从人淋巴结和外周血单个核细胞中扩增人6Ckine cDNA和IFNγ cDNA,分两步先后将6Ckine cDNA和IFNγ cDNA连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,二者之间以XbaⅠ酶切位点相连,应用AdMax腺病毒包装系统在HEK293细胞内同源重组,构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNγ,经扩增和纯化后感染真核细胞HepG2,并检测6Ckine/IFNγ融合蛋白的表达。结果所构建的重组腺病毒Ad-6Ckine/IFNγ经扩增和纯化后,滴度为1.26×1010IFU/ml。PCR法鉴定无野生型腺病毒的污染,所携带的6Ckine/IFNγ融合基因能在真核细胞中得到表达,表达形式为分泌型。结论已成功构建重组腺病毒载体Ad-6Ckine/IFNγ,并在真核细胞中表达,为进一步研究肿瘤的基因和免疫治疗奠定了基础。

关键词(KeyWords)： 次级淋巴组织趋化因子;γ-干扰素;融合基因;腺病毒载体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家基础研究计划(973计划,2004CB518801);; 广东省科委重大攻关项目(2003A10902)

作者(Authors): 薛刚;程莹;曹永宽;刘然义;田伏洲;黄文林;

DOI: 10.13200/j.cjb.2008.04.10.xueg.008

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