中国生物制品学杂志

2016, v.29(05) 469-472

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A型肉毒毒素轻链蛋白的表达及纯化
Expression and purification of light chain protein of botulinus neurotoxin serotype A

徐艳玲;岳玉环;张国利;吴广谋;田园;张培培;付玉和;赵鑫;侯天全;

摘要(Abstract):

目的构建A型肉毒毒素轻链表达载体重组质粒,在大肠埃希菌中表达后,利用金属螯合层析柱纯化。方法以p GEM-Bo NT/AL轻链质粒为模板,PCR扩增Bo NT/AL基因,克隆至表达载体p ET-28(a)中,构建重组质粒p ET-28(a)-Bo NT/AL,转化E.coli BL21(DE3),分别于37、30、25℃IPTG诱导表达,表达产物经Chelating Sepharose 4Fast Flow(Cu~(2+))层析柱纯化,纯化产物经尿素梯度复性。结果质粒p ET-28(a)-Bo NT/AL经酶切鉴定及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约52 000,主要以包涵体形式存在,37℃诱导表达量最高,占菌体沉淀总蛋白的41%;包涵体经2%Trition-X100和2 mol/L尿素洗涤后,可去除部分杂蛋白,8 mol/L尿素能溶解大部分包涵体;经再次浓缩后,蛋白浓度可达89μg/ml,纯度达90%。结论成功克隆及表达了Bo NT/A轻链基因,为制备抗Bo NT/A轻链单链抗体以及研究肉毒中毒机制和治疗方案奠定了基础。

关键词(KeyWords): A型肉毒毒素轻链;大肠埃希菌;基因表达;纯化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 徐艳玲;岳玉环;张国利;吴广谋;田园;张培培;付玉和;赵鑫;侯天全;

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DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.001318

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