中国生物制品学杂志

2008, (03) 181-184

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重组猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白的原核表达及鉴定
Prokaryotic Expression and Identification of Recombinant Swine Hepatitis E Virus Capsid Protein

屈勇刚;朱光泽;金宁一;孙中锋;于芳;刘玉生;胡宁宁;陆民;夏志平;

摘要(Abstract):

目的原核表达猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白,并对其反应原性进行分析。方法通过PCR从已构建的猪源戊型肝炎病毒全基因克隆扩增ORF2编码382~674位氨基酸序列的基因片段,将扩增产物插入到pMD18-T载体中,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET28a-293表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA层析柱纯化后,进行SDS-PAGE、Western blot及ELISA鉴定。结果成功扩增到904bp的目的基因。重组载体pET28a-293经双酶切鉴定及序列测定,证实构建正确。SDS-PAGE分析表明表达产物的相对分子质量与预期相符,表达量可占菌体总蛋白的66.15%。Western blot分析表明目的蛋白具有较好的反应原性。ELISA试验证实目的蛋白能与阳性猪源和标准HEV血清发生反应。结论已成功构建了猪源戊型肝炎病毒衣壳蛋白的pET28a-293原核表达载体,并得到了有效表达,为进一步建立猪源戊型肝炎的诊断方法奠定基础。

关键词(KeyWords): 猪源戊型肝炎病毒;衣壳蛋白;原核表达;反应原性

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家“973”计划资助项目(2005CB523005);; 国家自然科学基金资助项目(30771609)

作者(Author): 屈勇刚;朱光泽;金宁一;孙中锋;于芳;刘玉生;胡宁宁;陆民;夏志平;

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