中国生物制品学杂志

2003, (03) 147-150

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应用pET系统表达rhIFN-α2b基因的研究
Expression of rhIFN-α2b Gene in pET System

张一折,刘照惠,吴隼,关晓峰

摘要(Abstract):

目的 以构建的pET28a为表达载体,探讨人 IFN-α2b基因在pET系统中的表达。方法 合成引物,通过PCR扩增人 IFN-α2b基因并引入点突变,在不改变天然 IFN-α2b氨基酸序列的前提下,使原 IFN-α2b基因4个大肠杆菌稀有密码子改变为偏爱密码子,在起始密码子后,编码前16个氨基酸的碱基序列均成为大肠杆菌的偏爱密码子。将PCR产物次级克隆人pET28a载体,构建重组表达载pET28a-IFN-α2b。筛选正确的重组表达质粒pET28a-IFN-α2b转入感受态表达菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,粗提并检测 IFN-α2b活性。结果 重组质粒pET28a-IFN-α2b在宿主菌 BL21(DE3)中表达出的rhIFN-α2b以可溶性蛋白形式存在于粗提上清液中,与原来 pBV889系统表达的干扰素相比,具有更高的生物学活性。结论 应用pET表达系统可表达出具有更高生物学活性的rhIFN-α2b蛋白。

关键词(KeyWords): rhlFN-α2b;pET28a载体;点突变;偏爱密码子

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Author): 张一折,刘照惠,吴隼,关晓峰

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DOI: 10.13200/j.cjb.2003.03.22.zhangyzh.008

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