中国生物制品学杂志

2020, v.33(01) 19-25

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不同硫代修饰CpG ODN佐剂活性的比较
Comparison of adjuvant activities of different phosphorothioate backbone modified CpG ODN

屈旭成;何鹏;邱少辉;方鑫;童海青;葛君;李建强;姜崴;胡忠玉;

摘要(Abstract):

目的评价相同序列不同硫代修饰CpG ODN佐剂联合重组乙型肝炎疫苗表面抗原(rHBsAg)在BALB/c小鼠中的免疫原性,及在HEK-Blue~(TM) hTLR9细胞上的活性。方法将4种(全硫代修饰的QCX1、部分硫代修饰的HS1和HS2及非硫代修饰的NS)CpG ODN及其阳性对照(全硫代修饰的CpG7909)按照相同配比分别与rHBsAg混合,使CpG ODN和rHBsAg终浓度均为20μg/mL,同时设等剂量抗原对照组(rHBsAg)及空白对照组(生理盐水)。分别肌肉免疫BALB/c小鼠,每只100μL,于免疫后1、2、4周摘眼球采血后处死小鼠,分离血清,应用化学发光微粒子免疫分析技术检测乙型肝炎病毒表面抗体(antibody to hepatitis B virus surface antigen,Anti-HBs)水平;取小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,分离脾单个核细胞(mononuclear cell,MNCs),应用ELISPOT技术检测抗原特异性IFNγ、IL-2的分泌水平。体外应用HEK-Blue~(TM) hTLR9细胞,检测4种CpG ODN及阳性对照CpG7909在该细胞上的活性,以及血清中放置不同时间后在该细胞上的活性。结果免疫后1、2、4周,各组小鼠血清Anti-HBs水平逐渐升高,其中免后2、4周,QCX1组小鼠血清抗体水平高于抗原对照、HS1、HS2、NS组;QCX1组小鼠MNCs在rHBsAg刺激下,分泌IFNγ和IL-2的能力显著高于HS1、HS2、NS和抗原对照组(P均<0. 01);QCX1和HS2组刺激HEK-Blue~(TM) hTLR9细胞活性的半数有效浓度(EC_(50))分别为5. 94和6. 52μg/m L,明显低于HS1(46. 54μg/m L)和NS组(49. 10μg/m L);随着不同硫代修饰CpG ODN在血清中放置时间的延长,仅全硫代修饰QCX1和CpG7909组细胞培养物A_(655)基本不变,其他组均出现不同程度降低。结论全硫代修饰组QCX1佐剂增强小鼠细胞和体液免疫的能力与CpG7909相当,且在HEK-Blue~(TM) hTLR9细胞上呈现较好的活性,在血清中也具有较好的稳定性。

关键词(KeyWords): CpG ODN;佐剂;硫代修饰;乙型肝炎疫苗;活性

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家“十三五”新药创制科技重大专项“创新生物技术药评价及标准化关键技术研究”(2018zx09101001)

作者(Author): 屈旭成;何鹏;邱少辉;方鑫;童海青;葛君;李建强;姜崴;胡忠玉;

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