中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

一切为了人民健康——我们这十年

  • 人乳头瘤病毒疫苗的研究现状及前景

    高飞;张姝玥;王致萍;夏宁邵;

    人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是目前通过性传播最广泛的病毒之一。人类感染HPV轻则可自愈,重则会导致宫颈癌等疾病,严重危害人类健康,而疫苗是预防宫颈癌最有效的武器。本文对HPV的病毒学特征及HPV疫苗的研究现状,包括HPV分子生物学和流行病学研究、国内外已上市和临床阶段疫苗的研究进展作一综述,并进一步探讨新型疫苗的研发策略及新型佐剂的应用潜力,为未来研发更广谱、更高效的HPV疫苗提供参考。

    2022年07期 v.35 769-779页 [查看摘要][在线阅读][下载 824K]
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疫苗研究

  • Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗去除2-苯氧乙醇对其质量的影响

    周振歆;易力;李亚东;赵勇;段男;胡云光;付晓旭;起李光程;董少忠;

    目的 探讨Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine made from Sabin Strains,sIPV)去除2-苯氧乙醇对其质量的影响。方法 对3批不含2-苯氧乙醇的sIPV(B1、B2、B3批)按照企业注册标准(简称企标)的要求进行全项检测和效力试验,全项检测结果与含2-苯氧乙醇的25批sIPV(P1~P25批)进行对比。将B1、B2、B3批sIPV置2~8℃储存24个月,评价其稳定性。结果 B1、B2、B3批sIPV的2-苯氧乙醇含量检测结果为0,其他项目检测结果均合格,趋势分析均在警戒限范围内波动;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒D抗原含量与P1~P25批差异均无统计学意义(P均> 0.05)。B1、B2、B3于2~8℃储存24个月,各时间点的项目检测结果均合格,其中D抗原含量均在企标上下限范围内波动,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型效力试验ED50均高于效力参考品的ED50。结论 去除2-苯氧乙醇对B1、B2、B3批sIPV产品质量无影响,本实验为sIPV去除2-苯氧乙醇的工艺变更提供了实验依据。

    2022年07期 v.35 780-784+789页 [查看摘要][在线阅读][下载 1013K]
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  • 狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上适应株的建立

    廖辉;吴琼;焦龙;甄祖刚;杨文腰;周荔葆;

    目的 建立狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上的适应株,为狂犬病疫苗研究提供生产用毒株。方法 将狂犬病病毒固定株PV2061接种于MRC-5细胞并进行连续性传代,通过对感染剂量(1∶100、1∶200、1∶300、1∶400、1∶500)、收获天数(4、7、10、13、16 d)及感染方式(混种感染、吸附感染、带毒传代)的优化,确定在MRC-5细胞上的培养条件,并分析不同层析介质(Sepharose 4FF、Sepharose 6FF)对狂犬病病毒分离纯化效果的影响。结果 狂犬病病毒固定株PV2061能较好地适应MRC-5细胞,通过连续性传代,在第4代病毒滴度可达6.0 lgLD50/mL以上,11~19代病毒滴度稳定在6.5 lgLD50/mL。感染剂量在1∶100~1∶500范围内,病毒滴度均能达6.0 lgLD50/mL以上;病毒峰值主要集中在8~13 d;混种感染和带毒传代优于吸附感染,病毒滴度均在5.5 lgLD50/mL以上。与Sepharose 6FF相比,Sepharose 4FF能有效去除总蛋白质,两种介质对抗原回收率均在85%~120%范围内,牛血清白蛋白残留量均低于50 ng/mL。结论 建立了MRC-5细胞传代适应的狂犬病病毒适应株MPV2061,为后续人用狂犬病疫苗生产工艺的研究提供了数据支持。

    2022年07期 v.35 785-789页 [查看摘要][在线阅读][下载 861K]
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  • 堆型艾美耳球虫重组亚单位疫苗的制备及其免疫效果评价

    毕天奇;肇英池;马丹;程淑琴;王晓岑;李新;李建华;张西臣;宫鹏涛;张楠;张媛媛;

    目的 制备堆型艾美耳球虫(Eimeria acervulina)重组亚单位疫苗,并评价其免疫效果。方法 将堆型艾美耳球虫的保护性抗原基因cSZ1克隆至酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-cSZ1,转化毕赤酵母菌株GS115,构建重组菌GS115-pPICZαA-c SZ1,经甲醇诱导表达重组蛋白cSZ1。按20、40、60μg/只(低、中、高剂量)经雏鸡肌肉注射重组蛋白,7 d后进行加强免疫,加强免疫7 d后经口感染E. acervulina孢子化卵囊,剂量为1×104个/只,同时设阳性对照组(未免疫仅攻虫)和阴性对照组(未免疫未攻虫)。攻虫后7 d检测雏鸡的抗球虫指数(anticoccidial index,ACI);初次免疫后7 d及加强免疫后7 d,经雏鸡心脏采血,分离血清,间接ELISA法检测血清抗体水平;攻虫后7 d,无菌取雏鸡脾脏,CCK-8法检测T淋巴细胞增殖情况。结果 经双酶切及测序鉴定,证明重组表达质粒构建正确;经菌落PCR及测序鉴定,证明重组菌构建正确。重组蛋白cSZ1的相对分子质量约19 000,可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合。低、中、高剂量免疫组的ACI分别为171.25、176.42、174.33;与阴性对照组比较,低、中、高剂量免疫组雏鸡于初次免疫后7 d及加强免疫后7 d,血清抗体水平明显升高(P <0.01),攻虫后7 d,T淋巴细胞增殖率显著升高(P <0.01)。结论 制备的堆型艾美耳球虫重组亚单位疫苗对雏鸡有较好的免疫效果。

    2022年07期 v.35 790-794+801页 [查看摘要][在线阅读][下载 1047K]
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基础研究

  • 基于点突变库研究丝切蛋白在烟曲霉抗逆性和致病力中的作用

    房凌旭;卢中一;

    目的 通过构建点突变库探讨丝切蛋白(Cofilin)的氨基酸位点在烟曲霉抗逆性和致病力中的作用。方法 构建并筛选烟曲霉Cofilin点突变株;通过应激试验分析Cofilin点突变对烟曲霉抗氧化、抗高渗透压和抗细胞壁干扰等方面的影响;利用FITC偶联的伴刀豆蛋白荧光标记分析Cofilin点突变对烟曲霉细胞壁甘露糖合成及分布的影响;通过大蜡螟幼虫感染试验分析Cofilin点突变对烟曲霉致病力的影响。结果 构建的烟曲霉Cofilin点突变库包括单突变K26A、E56A和双突变D11A-E12A、K41A-K42A和R59A-R61A;D11A-E12A、K26A、E56A和R59A-R61A导致烟曲霉菌丝生长能力减弱;D19A-R21A和K36A导致烟曲霉对过氧化氢(H_2O_2)的耐受能力增强,而K36E使菌株对H_2O_2的耐受能力显著减弱;此外,K36A和E56A引起烟曲霉菌丝顶端的甘露糖聚集;D19A-R21A、K36A和K26A使烟曲霉对大蜡螟幼虫的致病力显著增强,而E56A和R59A-R61A导致菌株对大蜡螟幼虫的致病力显著减弱。结论Cofilin及其氨基酸位点在烟曲霉抗逆性和致病力等方面具有重要作用。

    2022年07期 v.35 795-801页 [查看摘要][在线阅读][下载 1466K]
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  • 人脐带间充质干细胞对异体人外周血单个核细胞的免疫调节作用

    陈耐寒;赵仁彬;孙鷖;李丽;郑永钦;左荣霞;张进萍;赵倩;沈涛;撒亚莲;

    目的 探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,hUC-MSCs)对异体人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)增殖及其调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)亚群的影响。方法 用组织块贴壁法培养原代hUC-MSCs,经消化酶传代培养扩增细胞,获得第4代hUC-MSCs;经Ficoll密度梯度离心法获取PBMCs。将hUC-MSCs与PBMCs以1∶5和1∶10的比例共培养,设单独培养的PBMCs为对照组,在培养体系中添加25 ng/mL植物血凝素(phytohaemagglutinin,PHA),培养5 d;采用全自动血液分析仪检测PHA活化PBMCs数量,流式细胞仪检测CD4+CD25+CD127ddim/-Treg细胞表达水平。结果 hUC-MSCs为贴壁生长的梭形细胞,具有分化为成脂肪样细胞、成骨样细胞和成软骨样细胞的潜能。hUC-MSCs与PBMCs以1∶5和1∶10比例共培养5 d,悬浮细胞数均少于单独培养组,hUC-MSCs抑制PBMCs增殖率分别为(81.54±5.10)%和(43.37±3.35)%;hUC-MSCs促进CD4+CD25+CD127ddim/-Treg细胞亚群增殖,上调效率分别为(41.73±4.66)%和(19.39±5.62)%,高于单独培养组。结论 h UC-MSCs在体外对PHA活化的异体人PBMCs有免疫负调节作用。

    2022年07期 v.35 802-807页 [查看摘要][在线阅读][下载 1239K]
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  • 环状RNA hsa_circ_0004771基因干扰对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

    李德珍;冯翎;余洛潇;常国栋;

    目的 探讨环状RNA(circRNA)hsa_circ_0004771基因干扰对骨肉瘤MG63细胞增殖和凋亡的影响。方法 用hsa_circ_0004771基因干扰序列(shRNA)及阴性对照序列(shRNA-NC)分别转染MG63细胞,同时设空白对照组(不转染)。EdU染色法检测细胞增殖情况;流式细胞术及Hoechst染色法检测细胞凋亡情况;流式分选法检测线粒体膜电位;相应试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量;Western blot法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、cleaved Caspase-3、c-Myc、蛋白表达水平。结果 与空白对照组比较,shRNA组EdU阳性细胞数明显降低(P <0.05),细胞凋亡率明显升高(P <0.05),线粒体膜电位明显降低(P <0.05),MDA及LDH含量显著升高(P均<0.05),Bax/Bcl-2及cleaved Caspase-3/Caspase-3比值明显升高(P均<0.05),c-Myc蛋白表达水平显著降低(P <0.05)。结论 circRNA hsa_circ_0004771基因干扰可抑制骨肉瘤细胞MG63增殖,并诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位。

    2022年07期 v.35 808-812页 [查看摘要][在线阅读][下载 1171K]
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  • 1株柯萨奇病毒A组10型毒株在KMB17细胞上的遗传稳定性分析

    许丹菡;张捷;丛山日;张名;冯昌增;黄小琴;孙浩;杨昭庆;马绍辉;

    目的 分析柯萨奇病毒A组10型毒株在人胚肺二倍体细胞(KMB17)上增殖的遗传稳定性。方法 将V6-19/XY/CHN/2017毒株适应于KMB17细胞,并连续传代培养至15代。分别提取适应前及适应后第5、10、15代病毒RNA,分段对全基因组序列进行RT-PCR扩增、测序及拼接,利用Maga 7.0、Geneious 6.1. 4等软件进行系统进化及同源性分析。结果 命名该KMB17细胞适应株为K6-19/XY/CHN/2017,各子代病毒感染性滴度为7.25~7.75 lgCCID50/mL。适应前后4个子代病毒的全基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.99%~100%和99.95%~100%。适应前与适应后第5、10代毒株均无核苷酸和氨基酸序列突变,第15代毒株VP4区域发生1个核苷酸突变(VP4 172 A→G)及1个氨基酸突变(VP4 58 Ile→Val)。结论 CV-A10能较好地适应KMB17细胞,K6-19/XY/CHN/2017在KMB17细胞上适应后可保持较高的病毒滴度和遗传稳定性,为后续疫苗研发奠定了实验基础。

    2022年07期 v.35 813-817页 [查看摘要][在线阅读][下载 1215K]
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  • 层析介质Capto Core400和Sephacryl S-1000纯化乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒效果的比较

    郎艺洁;王云龙;李玉林;王继创;王旭东;王晓军;周丽;钱鹏;

    目的 比较层析介质Capto Core400和Sephacryl S-1000纯化乙型肝炎病毒核心蛋白(hepatitis B virus core protein,HBc)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的效果。方法 采用两种层析介质纯化相同3批HBc VLPs蛋白粗提液,BCA法检测纯化样品的蛋白浓度,计算蛋白回收率;体积排阻色谱法检测纯度;马尔文粒径仪检测HBc VLPs粒径;透射电子显微镜观察HBc VLPs形态。结果 层析介质Sephacryl S-1000和Capto Core400纯化HBc VLPs的蛋白回收率分别为75.5%和70.5%,蛋白纯度分别为87%和99%,粒径大小均为(30±4)nm,均一性良好;与Sephacryl S-1000比较,经Capto Core400纯化的HBc VLPs分布更均匀。结论 Capto Core400纯化HBc VLPs的纯度及颗粒分布均匀性更佳,且该层析介质装量小,纯化时间短,更适用于HBc VLPs的规模化生产。

    2022年07期 v.35 818-821页 [查看摘要][在线阅读][下载 1188K]
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  • 鸟苷酸结合蛋白2对人脐带来源间充质干细胞成骨分化的调控作用

    白海涛;刘伟江;袁福临;李雪;王洋;刘元林;王振山;张毅;

    目的 探讨鸟苷酸结合蛋白2(guanylate binding protein 2,GBP2)对人脐带来源间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cell,hUC-MSC)成骨分化的调控作用。方法 培养hUC-MSC,采用吉姆萨染色、流式细胞术及体外诱导分化等方法对hUC-MSC生物学特性进行鉴定;构建过表达GBP2的慢病毒载体,转染hUCMSC,荧光显微镜及流式细胞术检测转染效率,实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,q-PCR)法检测转染后hUC-MSC中GBP2的表达,获得稳定过表达GBP2的hUC-MSC(GBP2~(high)hUC-MSC);采用流式细胞术和体外诱导分化试验检测GBP2~(high)hUC-MSC的生物学特性,油红O染色评价体外成脂分化能力,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色评估成骨分化能力,q-PCR法检测成脂和成骨分化相关转录因子的表达。结果 培养的hUCMSC的细胞形态、细胞表型和诱导分化均符合MSC国际金标准。经GBP2慢病毒载体转染的hUC-MSC中GBP2的表达显著增加,获得稳定过表达GBP2的hUC-MSC(GBP2~(high)hUC-MSC)。GBP2~(high)hUC-MSC的细胞形态和细胞表型以及体外成脂分化能力均未发生变化,但成骨分化能力发生改变,GBP2~(high)hUC-MSC组ALP染色明显高于hUC-MSC组,成骨分化关键转录因子OPN和ALP的表达也显著高于hUC-MSC组(P均<0.05)。结论 GBP2可促进hUCMSC的成骨分化,并上调成骨标志基因OPN和ALP的表达。

    2022年07期 v.35 822-828+835页 [查看摘要][在线阅读][下载 1637K]
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治疗制剂

  • NLRP3抑制剂MCC950对中性粒细胞性哮喘气道炎症的影响及其作用机制

    陈凌;茅松;朱若尘;徐敏;吴良霞;石文静;

    目的 探讨NLRP3抑制剂MCC950对中性粒细胞性哮喘气道炎症的影响及其作用机制。方法 将BALB/C小鼠随机分为中性粒细胞性哮喘组(NA组)、干预组(MCC950组)和PBS对照组,NA组经皮下注射20μg卵清蛋白(ovalbumin,OVA)、75μL完全弗氏佐剂(complete Freund adjuvant,CFA)、25μL PBS的混合液,第21及22天均以1%OVA混悬液雾化吸入激发10 min;MCC950组处理同NA组,于雾化吸入前连续3 d经腹腔注射MCC950,50μg/g体重;PBS对照组于相同时间点给予相同剂量PBS经皮下/腹腔注射或雾化吸入。末次雾化后测定小鼠气道高反应性;末次雾化24 h后,制备小鼠肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),Wright-Giemsa染色法进行细胞分类计数,ELISA法测定IL-17A、IL-18和IL-1β的表达水平,比色法检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活力;取小鼠肺组织,实时荧光定量PCR法检测NLRP3、caspase-1、IL-1β及RORγt mRNA的相对表达水平,并进行组织病理分析。结果 与PBS对照组比较,NA组小鼠气道反应性明显增强(P <0.05);BALF中炎性细胞总数、中性粒细胞数量、巨噬细胞数量、IL-1β、IL-17A、IL-18的表达水平、MPO活力及肺组织NLRP3、IL-1β、RORγt mRNA相对表达量均显著升高(P均<0.01);支气管及小血管周围炎症细胞浸润明显增多,炎症指数明显升高(P <0.001)。与NA组比较,MCC950组小鼠气道阻力明显降低(P <0.05);BALF中炎性细胞总数、中性粒细胞数量、巨噬细胞数量、IL-1β、IL-17A及IL-18表达水平、MPO活力及肺组织IL-1β、RORγt mRNA相对表达量显著降低(P均<0.01),肺组织NLRP3、caspase-1 m RNA的相对表达量差异无统计学意义(P均> 0.05);肺组织内炎性细胞渗出明显减轻,炎症指数明显降低(P <0.05)。结论 MCC950可减轻中性粒细胞性哮喘气道炎症反应,其通过抑制NLRP3/IL-1β/IL-17A信号通路,减少下游炎症因子产生,降低气道高反应性而发挥作用。本实验为MCC950用于该类型哮喘的治疗提供了实验依据。

    2022年07期 v.35 829-835页 [查看摘要][在线阅读][下载 1372K]
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临床研究

  • 2017—2019年北京市东城区流感流行病学特征分析

    李姗姗;李艳宇;孙冰洁;杜嘉鑫;

    目的 分析2017—2019年北京市东城区流感流行病学特征。方法 对2017—2019年北京市东城区流感样病例的咽拭子样本进行流感病毒核酸检测。选取核酸阳性样本进行细胞分离培养;核酸检测CT <28的样本进行鸡胚分离培养。采用描述性流行病学方法对监测数据进行分析。结果 共采集3 420份流感样病例咽拭子样本,核酸检测获得阳性样本465份,其中甲型H1N1 203份,甲型H3N2 133份,乙型BV 13份,乙型BY 116份。2017—2018流感季甲型H1N1、甲型H3N2和乙型BY的检出率较高,分别为5.56%、4.27%和5.79%,2018—2019流感季甲型H1N1检出率较高,为6.34%。不同年龄组间阳性率差异有统计学意义(P <0.001),> 59岁年龄组阳性率最高,为17.05%,0~4岁年龄组最低,为6.71%;不同性别样本的阳性率差异无统计学意义(P> 0.05)。核酸阳性样本经细胞分离培养获得阳性毒株203株,集中分布于流感病毒核酸阳性样本分布的高峰期。CT <28的核酸阳性样本经鸡胚分离法获得甲型H1N1阳性毒株19株,BY阳性毒株1株。结论 北京市东城区冬春季是流感高发季节,60岁以上的老人是流感病毒感染的高发人群,今后应将高发季节对易感人群的保护及健康教育工作作为防控重点,提高预防流感的意识。

    2022年07期 v.35 836-839+843页 [查看摘要][在线阅读][下载 1281K]
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  • 2010—2020年湖南省宁乡市布鲁菌病的流行特征分析

    李玉枝;蒋惊涛;张鹏;龚赛花;

    目的 分析2010—2020年湖南省宁乡市布鲁菌病(简称布病)的流行特征。方法 收集宁乡市2010—2020年报告的布病确诊数据,进行描述性流行病学分析。结果 2010—2020年宁乡市累计报告50例布病病例,无死亡病例,年平均发病率为0.37/10万。宁乡市29个乡镇(街道)中有15个乡镇出现病例,超过3例及3例以上的乡镇有7个;1—12月份发病率差异有统计学意义(P <0.001),3—8月份是布病的高发月份;病例年龄范围为0~83岁,高发年龄段为40~49岁,不同年龄组之间发病率差异有统计学意义(P <0.05);男女发病率比例为4.6∶1,差异有统计学意义(P <0.001);病例主要集中在从事养殖业的人员,96%的病例有与羊的接触史。主要临床表现为发热,乏力、关节痛、腰痛等。结论 近年,宁乡市发病率虽有所降低,但防控形势仍较严峻,染病的羊群是布病的主要传染源,应加强疫情监测、养殖业的管理及布病疫苗接种等综合性防控措施。

    2022年07期 v.35 840-843页 [查看摘要][在线阅读][下载 1184K]
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技术方法

  • 重组人干扰素α2b单克隆抗体亲和层析介质的制备及其纯化效果评价

    顾建阳;王宇;孙子琪;张雯雯;常军亮;

    目的 制备重组人干扰素α2b(recombinant human interferon α2b,rhIFNα2b)单克隆抗体的亲和层析介质,并评价其纯化效果。方法 采用小鼠杂交瘤细胞融合技术及小鼠体内诱生法筛选并制备rhIFNα2b单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),经AT Protein A亲和层析纯化,12%还原型SDS-PAGE鉴定纯度,Western blot法鉴定McAb与rhIFNα2b原液及其聚合蛋白(rhIFNα2b原液于56℃热加速处理)的特异性反应。用筛选的McAb与CNBr-activated BestaroseTM4FF偶联1~4 h,紫外-可见分光光度法监测偶联液上清McAb蛋白浓度,12%还原型SDS-PAGE验证偶联介质抗体蛋白饱和程度,确定最佳偶联时间。将制备的McAb亲和层析介质装柱后,上样rhIFNα2b原液及经56℃热加速24 h的样品,15%非还原SDS-PAGE验证其纯化效果。结果 经杂交瘤制备和筛选,确定以4E2抗体作为偶联McAb,纯度> 95%。McAb 4E2与CNBr-activated BestaroseTM4FF偶联3 h后抗体蛋白浓度趋于平稳,预活化凝胶介质抗体蛋白吸附率约为30 mg/mL,凝胶介质偶联抗体蛋白量趋于饱和,为使偶联更加充分,确定最佳偶联时间为4 h。rhIFNα2b原液及其56℃热加速24 h样品可由McAb亲和柱层析有效吸附洗脱,并保持与McAb的结合活性。结论 本实验制备的rhIFNα2b单克隆抗体亲和层析介质,具有良好的纯化效果,为rhIFNα2b不同剂型比对样品的前处理提供了高效方法。

    2022年07期 v.35 844-847+852页 [查看摘要][在线阅读][下载 1338K]
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  • 一种经济高效的酵母菌落PCR模板DNA制备方法的建立

    刘微;戴凌燕;苗青;彭辉;张东杰;李志江;

    目的 建立一种经济高效、结果稳定的酵母菌落PCR模板DNA制备方法。方法 将乙酸乙酯处理与高温破壁相结合,建立乙酸乙酯-高温破壁法制备酵母菌落PCR模板DNA,并以此方法对酵母进行目的基因扩增与阳性转化子的筛选。同时,以酵母基因组DNA及高温破壁法制备的模板作为对照。结果 乙酸乙酯-高温破壁法制取的模板可直接用于菌落PCR扩增目的基因片段以及筛选阳性转化子,与提取酵母基因组DNA相比,采用乙酸乙酯-高温破壁法制取模板的准确率可达90%以上,而高温破壁法制备模板结果不稳定。结论 本实验建立的方法简单高效,结果稳定,成本低廉,可满足大规模筛选阳性转化子。

    2022年07期 v.35 848-852页 [查看摘要][在线阅读][下载 1369K]
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  • 肠道病毒71型病毒样颗粒疫苗抗原检测方法的建立及验证

    施歌;石亮;王翠艳;白鹭;褚彦飞;史赫;谷铁军;刘大维;包小华;

    目的 建立定量检测肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗抗原含量的检测方法,并进行验证。方法 用EV71 VLP抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体,并进行Protein A亲和层析纯化。以纯化的抗EV71 VLP多克隆抗体为包被抗体,筛选最佳包被浓度及酶标抗体稀释倍数,建立定量检测EV71VLP抗原含量的双抗体夹心ELISA法,并对该方法进行准确度、精密度验证,确定方法的线性范围和定量限。结果抗EV71多克隆抗体包被浓度5μg/mL,酶标抗体稀释度1∶10 000条件下,建立了检测EV71 VLP抗原含量的双抗体夹心ELISA法。抗原标准品浓度在0.5~8 U/mL范围内,其对数值与对应的A450值对数值呈良好的线性关系,R2=0.992 7,定量限为2 ng/mL;准确度验证回收率为81%~106%;精密度验证相对标准偏差(RSD)为4.96%~12.04%。结论 建立了用于EV71 VLP抗原定量检测的双抗体夹心ELISA法,有望用于EV71 VLP疫苗抗原含量的初步检测。

    2022年07期 v.35 853-857页 [查看摘要][在线阅读][下载 1331K]
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  • 基于聚合物分析系统流感疫苗裂解效果检测方法的建立及验证

    郭晶晶;宋晓红;刘华擎;陈秋兰;张颖;王洁如;

    目的 建立一种基于聚合物分析系统(Aggregates Sizer)的流感疫苗裂解效果检测方法,并进行方法验证。方法将流感病毒裂解疫苗原液A(由裂解液制得,病毒颗粒已裂解)和B(由裂解前纯化液制得,病毒颗粒未裂解)按一定比例混合,配制成裂解程度为60%、70%、80%、90%和100%的系列工作液,经Aggregates Sizer检测样本中各粒径病毒颗粒的分布丰度和累积分布丰度,以流感病毒颗粒裂解程度为横坐标,颗粒累积分布丰度为纵坐标建立标准曲线,获得标准曲线方程,计算相关系数(r2)。另取60%、80%和100%裂解程度的工作液作为质量控制(quality control,QC)样本,重复检测3次,准确性以相对误差(relative error,RE)表示,精密性以相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)表示。结果 工作液在60%~100%裂解程度范围内与病毒颗粒累积分布丰度呈良好线性关系,标准曲线方程为y=-2 600 x+2 610,r2为0.995。不同裂解程度QC样本经3次检测的RE均<2%,RSD均<0.05%。结论 建立了基于Aggregates Sizer系统的流感疫苗裂解效果检测方法,该方法具有良好的准确性和精密性。

    2022年07期 v.35 858-860+866页 [查看摘要][在线阅读][下载 1335K]
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综述

  • 啮齿类动物模型在新型冠状病毒肺炎治疗中的应用

    孙凯丽;王如玉;李新国;

    新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019,COVID-19)是2019年底发现的新型呼吸道感染疾病,由严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)引起。截止2021年10月29日,全球已有215个国家暴发感染,且世界各地出现多种变异株,因此,迫切需要研发针对SARS-CoV-2的候选疫苗及相应的靶向药物。易感动物模型的建立对于阐明病毒的致病机制、确定新的治疗目标以及开发和测试有效治疗方法具有十分重要的意义,其中啮齿类动物具有繁殖快、经济、易于饲养等特点,是理想的实验动物模型。本文对SARS-CoV-2易感啮齿类动物模型的临床症状和病理特征及其在COVID-19治疗中的应用作一综述,以期为选择合适的易感实验动物及开发COVID-19候选疫苗和治疗药物提供参考。

    2022年07期 v.35 861-866页 [查看摘要][在线阅读][下载 1351K]
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  • 大气气溶胶微生物群落的分子生物学检测和监测方法的研究进展

    周小军;付莹莹;王红昌;贾锐;

    生物气溶胶能通过长距离水平和垂直方向的转运从而影响大气物理、化学组成及气候变化等过程。越来越多的证据显示,生物气溶胶暴露可能造成严重疾病等有害健康的影响。关于生物气溶胶的研究主要集中于其化学构成解析,而很大程度上忽略了其生物学组成及其对生态系统和人体健康的负面效果。本文对现行用于生物气溶胶鉴定、定性和分布研究的分子生物学方法及用于大气微生物时空分布高分辨率解析的最新环境微生物技术作一综述。

    2022年07期 v.35 867-873页 [查看摘要][在线阅读][下载 1450K]
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  • 人重组沙眼衣原体疫苗的研究进展

    尹晨亮;张庶民;徐颖华;倪现朴;

    沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)是一种革兰阴性、专性细胞内寄生的原核细胞型微生物,是引起性传播感染(sexually transmitted infection,STI)的重要病原体,可导致眼部、生殖道等多个系统疾病。疫苗是预防和控制CT感染最有效、最经济的方法,可实现对易感人群的长期保护,减少传播并抑制继发性感染。随着生物学技术的发展和抗CT感染免疫保护机制研究的深入,已发现一些具有潜在免疫保护性候选抗原蛋白,其中重组CT疫苗CTH522已进入Ⅰ期临床试验,并取得突破性进展。本文就近年对CT特异性免疫反应、重组疫苗候选抗原临床前研究和临床试验的研究进展及面临的挑战作一综述,以期为我国新CT疫苗的研发提供参考。

    2022年07期 v.35 874-878页 [查看摘要][在线阅读][下载 1445K]
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  • 麻疹病毒作为溶瘤病毒的研究进展

    党昱东;张欣;马雷钧;

    癌症是威胁人类健康的重要因素之一,现有的治疗方法包括手术治疗、放射治疗和化学药物治疗等,但存在如毒副作用大、对化疗药物的耐药性、肿瘤侵袭和复发等局限性,因此寻求更有效的新型肿瘤治疗方法十分必要。溶瘤病毒疗法是一种通过病毒选择性感染肿瘤细胞来杀伤肿瘤,并增强机体抗肿瘤免疫反应的新型肿瘤治疗方法,具有良好的应用前景。研究表明,麻疹病毒(measles virus,MV)是能展现出溶瘤效果的病毒之一,天然MV或经改造后用于肿瘤治疗,具有良好的抗肿瘤效应;也可与其他方法联合使用,提高治疗效果。本文就MV作为溶瘤病毒的作用机制和研究进展作一综述。

    2022年07期 v.35 879-884+891页 [查看摘要][在线阅读][下载 1576K]
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专题报道

  • WHO疫苗国家监管体系评估批签发板块指标解读

    江征;贺鹏飞;张洁;李长贵;徐苗;

    <正>科学有效权威的国家监管在保证疫苗安全性、有效性和质量方面发挥不可或缺的作用。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)自1997年开始,定期对各国疫苗监管机构(National Regulatory Authorities,NRA)的监管表现,依照特定的国际标准进行客观评估,识别优势和需要改进之处,促进制定机构改进计划(Institutional Development Plan,IDP),

    2022年07期 v.35 885-891页 [查看摘要][在线阅读][下载 1483K]
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  • 当前形势下我国疫苗临床试验研究SWOT分析

    陈俊虎;赵海彬;王燕燕;张吉凯;李苑;刘颜;刘晓强;

    <正>在人类抗击新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019,COVID-19,简称新冠肺炎)疫情期间,我国宣布将新冠疫苗作为全球公共产品。《中华人民共和国疫苗管理法》明确,疫苗关系人民群众生命健康,是国家战略性、公益性产品。疫苗试验研究作为疫苗上市前的重要决定环节,直接影响国家免疫政策制订,关系到国民健康及国家安全。目前,中国疫苗相关管理与政策正处于调整与变革过程中,

    2022年07期 v.35 892-896页 [查看摘要][在线阅读][下载 1438K]
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