中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • H1N1型流感病毒血凝素蛋白胞外段的真核表达及免疫原性分析

    刘京;年悬悬;龚铮;吕传硕;邓涛;马宁;周蓉;张国梅;乐洋;张哲罡;刘博;张家友;李妍玲;王鹏飞;杨晓明;

    目的真核表达H1N1型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白胞外段,并分析其免疫原性。方法以H1N1型流感毒株基因组为参考序列,将H1N1 HA的胞外段氨基酸序列进行密码子优化后基因合成,将合成的目的基因片段与KS001载体连接,构建重组质粒KS001/HA,转染至Expi293F真核细胞,收集表达产物,进行12%SDSPAGE、Western blot及N-糖基化鉴定;将表达产物经Capto Q离子交换层析柱纯化,收集纯化产物进行12%SDSPAGE鉴定,BCA法测定蛋白浓度;用不同浓度的HA胞外段蛋白辅以佐剂免疫小鼠,通过病毒微量中和试验(microneutralization test,MNT)检测小鼠血清抗体效价。结果经菌液PCR、双酶切及测序鉴定证明质粒构建正确;表达的重组蛋白以单体形式存在,相对分子质量约70 000,N-糖基化丰富;重组蛋白与佐剂配伍后的各剂量组均产生针对H1N1型病毒特异性抗体,且阳转率≥90%。结论成功构建了重组质粒KS001/HA,并于真核细胞中表达,表达产物联合佐剂免疫小鼠后具有较好的免疫原性。

    2021年12期 v.34 1401-1405+1411页 [查看摘要][在线阅读][下载 768K]
    [下载次数:91 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:94 ]
  • 人肠道病毒71型病毒样颗粒的制备及免疫原性评价

    王文伟;胡海涛;蔡蓓蓓;仝光杰;何成;楼觉人;

    目的利用巴斯德毕赤酵母制备重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并评价其免疫原性。方法将EV71的P1和3CD基因插入巴斯德毕赤酵母基因组中,构建EV71 VLPs表达质粒,转化巴斯德毕赤酵母KM71感受态细胞,Western blot法筛选高表达克隆,5 L发酵罐发酵,阳离子交换层析和凝胶体积排阻层析纯化EV71 VLPs。用不同剂量(0.05、0.5、5μg)的纯化EV71 VLPs免疫小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗体滴度。结果 EV71 VLPs表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确。纯化的EV71 VLPs在电镜下可见大小均一、直径约为30 nm的典型VLPs;动态光散射分析显示,EV71 VLPs的流体力学直径为35.82 nm;经0.05、0.5和5μg EV71 VLPs免疫后,小鼠血清ELISA抗体的几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)分别为119、800和3 200,差异有统计学意义(P <0.01)。结论 EV71 VLPs在巴斯德毕赤酵母中成功表达,且具有良好的免疫原性。

    2021年12期 v.34 1406-1411页 [查看摘要][在线阅读][下载 773K]
    [下载次数:71 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:90 ]
  • 冻干甲型肝炎减毒活疫苗除菌过滤前后产品质量分析

    周振歆;易力;常亚军;杨家方;汪启兵;马忠飞;董少忠;

    目的研究冻干甲型肝炎减毒活疫苗增加除菌过滤工艺对疫苗产品质量的影响。方法选取2020年已完成生产的32批未经除菌过滤的冻干甲型肝炎减毒活疫苗和18批经除菌过滤的冻干甲型肝炎减毒活疫苗,按照企业注册标准的要求进行全项检测,并对除菌过滤前后冻干甲型肝炎减毒活疫苗的有效物质(病毒感染性滴度和热稳定性)及残留物质(牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量和三氯甲烷残留量)进行独立样本t检验。结果增加除菌过滤工艺前后,所有批次的产品质量均符合企业注册标准的要求;经过独立样本t检验,冻干甲型肝炎减毒活疫苗的病毒感染性滴度、热稳定性、牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量和三氯甲烷残留量在除菌过滤前后差异均无统计学意义(P均> 0.05)。结论除菌过滤工艺对冻干甲型肝炎减毒活疫苗产品质量无影响。

    2021年12期 v.34 1412-1417页 [查看摘要][在线阅读][下载 955K]
    [下载次数:53 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:79 ]

基础研究

  • 严重急性呼吸道综合征冠状病毒2全长cDNA的构建新途径

    安欢欢;钱莎莎;于代冠;申硕;

    目的构建严重急性呼吸道综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus-2,SARS-CoV-2)全长cDNA,为SARS-CoV-2基因功能、药物筛选和安全减毒灭活疫苗株的研究提供重要工具,也为大基因组RNA病毒cDNA的构建提供新的方法。方法结合In-Fusion、Gibson Assembly以及Recombineering技术对SARS-CoV-2基因组进行全长cDNA克隆的从头合成。首先将SARS-CoV-2全长基因组分17个片段进行扩增,利用In-Fusion试剂盒将这些小片段连接、克隆,以获得插入序列约5 000 bp的6个pUC19重组质粒;然后利用Gibson Assembly试剂盒将30 000 bp SARS-CoV-2全长基因组分3次逐步连接至pBR322载体,每次连接10 000 bp,得到含30 000 bp SARSCoV-2全长cDNA的重组质粒;最后利用Recombineering技术修复逐步连接过程中通过NotⅠ位点引入的两处多余GC碱基。结果构建了SARS-CoV-2 WIV04株的全长cDNA,插入基因组的重组质粒经酶切和测序鉴定正确。为区别于野生型毒株SARS-CoV-2 WIV04,分别在全长cDNA的8 791 nt和12 655 nt进行了同义突变,引入了两处BglⅠ酶切位点,以此作为遗传标记。结论成功构建了SARS-CoV-2全长cDNA,为SARS-CoV-2基础研究和应用研究提供了技术平台。

    2021年12期 v.34 1418-1426页 [查看摘要][在线阅读][下载 1083K]
    [下载次数:40 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:80 ]
  • EphA4受体对大鼠海马脑区神经元脑源性神经营养因子蛋白质和转录本表达的影响

    马娜;陈静;史晋朝;张倩;李建国;

    目的探讨EphA4受体对大鼠海马脑区神经元脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)蛋白质和转录本表达的影响。方法将原代培养的大鼠海马脑区神经元随机分为正常对照组和EphA4-Fc组,EphA4-Fc组给予EphA4受体拮抗剂EphA4-Fc,培养7 d后,Western blot法检测大鼠海马脑区BDNF蛋白的表达,qPCR检测BDNF mRNA的表达。结果与正常对照组相比,EphA4-Fc组大鼠海马脑区神经元BDNF蛋白表达明显升高(P <0.01),mRNA转录本Ⅱc的表达明显升高(P <0.001)。结论给予EphA4-Fc后,大鼠海马脑区神经元BDNF蛋白翻译增加与mRNA转录本Ⅱc表达升高相关。本研究为临床上脑卒中的治疗以及神经元保护提供了新的思路。

    2021年12期 v.34 1427-1430+1442页 [查看摘要][在线阅读][下载 988K]
    [下载次数:41 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:77 ]
  • miR-124对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡的影响

    杨璐瑜;陆辉志;廖友霞;谭赟;董辉;付守芝;

    目的探讨miR-124对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法通过生物学软件TargetScan预测与miR-124结合的靶基因位点,利用含有结合位点的野生型(WT)和突变型(Mut)STAT3 3′-UTR基因序列构建miR-124靶基因的双荧光素酶报告载体,并检测荧光素酶活性变化,试验分为4组:携带WT STAT3报告基因组(WT Mimic组)、WT阴性对照组(WT NC组)、携带Mut STAT3报告基因组(Mut Mimic组)、Mut阴性对照组(Mut NC组)。建立大鼠H9c2心肌细胞H/R模型,用miR-124抑制剂(siRNA)转染H/R心肌细胞模型,试验分为4组:正常对照组、H/R模型组、H/R模型+miR-124抑制剂组、H/R模型+miR-124抑制剂+Stattic组(为miR-124靶基因的抑制剂)。Western blot法检测心肌细胞中miR-124靶基因STAT3表达水平;实时荧光定量PCR法检测心肌细胞中miR-124 mRNA水平;流式细胞术检测miR-124对心肌细胞凋亡的影响;Western blot法检测miR-124对促心肌细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果 STAT3是miR-124的1个靶基因;与WT NC组相比,WT Mimic组细胞荧光素酶活性明显降低(P <0.05),而Mut Mimic组与Mut NC组无明显差异(P> 0.05)。与正常心肌细胞组相比,H/R模型组心肌细胞STAT3蛋白表达水平明显降低,miR-124 mRNA水平明显升高(P均<0.05),而转染miR-124抑制剂后,STAT3蛋白的表达部分恢复。与H/R模型组相比,H/R模型+miR-124抑制剂组心肌细胞凋亡水平及凋亡蛋白(Caspase-3、Bax)表达均明显降低(P均<0.05);而与H/R模型+miR-124抑制剂组相比,H/R模型+miR-124抑制剂+Stattic组心肌细胞凋亡水平明显升高(P <0.05)。结论 miR-124能够促进H/R诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与降低STAT3蛋白的表达有关。

    2021年12期 v.34 1431-1436页 [查看摘要][在线阅读][下载 1029K]
    [下载次数:110 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:83 ]
  • Ddit4 3′UTR双荧光素酶报告基因质粒的构建及调控microRNA的鉴定

    孙雨晴;王宇飞;宋美燕;张娟;张丽;李美宁;白云;刘志贞;

    目的构建Ddit4基因双荧光素酶报告基因质粒,并验证miR-222-3p与Ddit4的靶向调控关系。方法利用生物信息学软件预测miR-222-3p与Ddit4的结合位点;PCR扩增Ddit4 3′UTR序列,将其克隆至双荧光素酶GPmiRGLO报告基因载体中,同时构建Ddit4 3′UTR突变载体;将miR-222-3p、双荧光素酶报告质粒野生型和突变型mmu-Ddit4 3′UTR共转染至HT-22细胞中,酶标仪检测双荧光素酶荧光值。结果生物信息数据库预测结果显示,miR-222-3p与Ddit4基因3′UTR存在互补结合位点,载体测序证实双荧光素酶Ddit4报告载体构建成功;双荧光素酶试验表明,miR-222-3p mimics能够与野生型Ddit4基因3′UTR靶向结合并降低其荧光值,将靶位点进行突变后,其荧光值有所上升。结论 miR-222-3p与Ddit4基因3′UTR互补结合实现了其对Ddit4靶向调控的作用;miR-222-3p可能通过调控Ddit4进而参与NTDs的发生发展。

    2021年12期 v.34 1437-1442页 [查看摘要][在线阅读][下载 1274K]
    [下载次数:196 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:79 ]

治疗制剂

  • 白介素-1受体1胞外域的原核表达及鉴定

    周永飞;韩顺子;赵丹莹;张健锋;常军亮;刘玉林;曹玉锋;刘景会;

    目的原核表达白介素-1受体1(interleukin-1 receptor 1,IL-1R1)胞外域,并进行鉴定。方法从A375·S2细胞中扩增IL-1R1胞外域基因片段,克隆至载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-IL-1R1,转化入感受态OverExpress(DE3),经IPTG诱导表达,并进行亲和层析纯化。将纯化产物与弗氏佐剂充分乳化,免疫小鼠,分离血清,ELISA法检测血清抗体效价,Western blot和间接免疫荧光法检测抗体结合活性。结果菌落PCR及测序结果证明,重组表达质粒pET-28a-IL-1R1构建正确。表达产物的相对分子质量约34 000,表达量为18%,纯化后纯度达93%,且可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合。免疫小鼠血清效价约达1∶100 000,且可与重组IL-1R1蛋白及A375·S2细胞中受体蛋白发生特异性结合。结论成功原核表达了IL-1R1胞外域,且免疫小鼠后可产生IL-1R1特异性抗体,本实验为后续IL-1R1单克隆抗体的制备及细胞受体功能的研究奠定了基础。

    2021年12期 v.34 1443-1448页 [查看摘要][在线阅读][下载 1147K]
    [下载次数:89 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:73 ]

诊断制剂

  • 百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品的研制

    夏德菊;周海卫;王薇;许四宏;

    目的研制百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对21份病原体培养物的复核、确证,关键抗原位点等位基因分析、红霉素耐药位点测序分析,组成百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品,经多家实验室协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品由12份阴性、10份阳性、1份检出限和1份精密度样品组成。质量标准为12份阴性参考品应均检出阴性;10份阳性参考品应均检出阳性,若为百日咳杆菌红霉素耐药位点检测试剂盒,P1、P3、P6、P7和P9需检出耐药位点阳性;精密度参考品重复检测10次,要求均为百日咳杆菌阳性,且其检测值的变异系数(CV)应不大于5.0%,若为百日咳杆菌红霉素耐药位点检测试剂盒,重复检测10次,要求均为耐药位点阳性,且其检测值的CV不大于5.0%;最低检出限参考品要求对于选择IS481靶区的试剂,浓度为100cfu/mL及以上时,检测结果应为百日咳杆菌阳性;其他靶区试剂要求浓度为1×10~4cfu/mL及以上时,检测结果应为百日咳杆菌阳性,若为百日咳杆菌红霉素耐药位点检测试剂盒,要求浓度为1×10~4cfu/mL及以上时,需检出耐药位点阳性。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论研制的百日咳杆菌核酸检测试剂国家参考品可用于百日咳杆菌核酸检测试剂的质量控制及评价。

    2021年12期 v.34 1449-1455+1462页 [查看摘要][在线阅读][下载 1193K]
    [下载次数:39 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:80 ]

临床研究

  • 冻干甲型肝炎减毒活疫苗在18~24月龄儿童中接种的免疫原性及安全性评价

    董媛媛;王辰皓;徐艳玲;赵淑洁;夏强;姜崴;胡伟军;郭雪;

    目的评价工艺优化后的冻干甲型肝炎减毒活疫苗在18~24月龄儿童中接种的免疫原性及安全性。方法采用单中心、随机、平行对照的非劣效试验,在陕西省勉县和洋县选择18~24月龄的儿童450名,按照1∶1∶1分别接种1剂试验疫苗(长春生物制品研究所有限责任公司生产的冻干甲型肝炎减毒活疫苗)或两种对照疫苗(其他厂家生产的冻干甲型肝炎减毒活疫苗)。所有受试者于免疫前、免疫后30 d采集静脉血,分离血清,检测甲型肝炎病毒总抗体,并计算抗体阳性率、阳转率。观察并记录所有受试者免疫后30 min、0~7 d、8~30 d内的不良事件(adverse events,AEs),并随访至免疫后6个月。结果接种1剂试验疫苗或对照疫苗后,试验组免疫后抗体阳性率和阳转率非劣效于两个对照组。试验组、对照组1、对照组2总AE发生率分别为20.00%、22.15%和24.00%,全身反应发生率分别为12.00%、14.09%和16.00%,局部反应发生率分别为1.33%、1.34%和0.67%。试验组和两个对照组AE发生率差异无统计学意义(P> 0.05)。结论长春生物制品研究所有限责任公司工艺优化后生产的冻干甲型肝炎减毒活疫苗在18~24月龄儿童中免疫效果和安全性良好,适合推广使用。

    2021年12期 v.34 1456-1462页 [查看摘要][在线阅读][下载 1117K]
    [下载次数:44 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:78 ]
  • 肺炎球菌疫苗联合流感疫苗接种对老年人保护效果的Meta分析

    梁亚琼;夏志武;徐鹭;陈敏;

    目的对23价肺炎球菌疫苗联合流感疫苗接种对老年人的保护效果进行Meta分析。方法电子检索中国知网(CNKI)、中国生物医学文献服务系统(Sniomed)、万方数据库、Medline、Science Direct和Cochrane Library数据库,纳入研究文献的试验组为联合接种23价肺炎球菌疫苗和流感疫苗的老年人,对照组为基线特征与试验组一致的不接种这两种疫苗的老年人,研究类型仅包括干预性研究,采用RevMan 5.4软件进行Meta分析。结果共检索到文献346篇,最后纳入8篇,包含样本911人。应用疫苗干预后,流感病毒感染次数(MD=-125.82,95%CI:-168.95~-82.69,P <0.001)、肺炎球菌肺炎发生次数(MD=-117.63,95%CI:-153.83~-95.03,P <0.001)、继发肺部真菌感染次数(MD=-15.20,95%CI:-16.46~-13.94,P <0.001)和真菌耐药次数均显著降低(MD=-19.91,95%CI:-22.05~-17.77,P <0.001);症状发作次数(MD=-4.19,95%CI:-5.70~-2.68,P <0.001)和症状发作持续时间(MD=-19.64,95%CI:-25.95~-13.33,P <0.003)大幅缩短,症状发作间隔时间显著延长(MD=150.43,95%CI:101.14~199.71,P <0.001);住院次数显著降低(MD=-1.31,95%CI:-1.61~-1.01,P <0.001),住院时间明显缩短(MD=-10.54,95%CI:-12.21~-8.87,P <0.001);两组死亡率差异无统计学意义(P> 0.05)。结论联合接种23价肺炎球菌疫苗和流感疫苗对老年人具有很好的保护效果。

    2021年12期 v.34 1463-1468+1472页 [查看摘要][在线阅读][下载 1672K]
    [下载次数:141 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:77 ]
  • 重组人干扰素α2a栓剂治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒感染的疗效

    陈庆;白小英;张小斌;王燕;樊晓君;张欣;谢秀英;

    目的评价重组人干扰素α2a(recombinant human interferonα2a,rhIFNα2a)栓剂治疗宫颈高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的疗效。方法以200例确诊高危型HPV阳性患者作为研究对象,随机分为观察组(患者阴道局部用rhIFNα2a栓剂,隔日1次,10次为1个疗程,连续使用3个疗程)和对照组(不使用药物),每组100例。疗程结束后6个月采用第二代杂交捕获法检测HPV病毒载量,并计算两组患者的转阴率和总有效率。结果观察组患者的转阴率和总有效率(分别为89%和94%)明显高于对照组(分别为63%和65%),且差异均有统计学意义(P <0.01)。结论 rhIFNα2a栓剂局部给药治疗宫颈高危型HPV感染具有较好的疗效。

    2021年12期 v.34 1469-1472页 [查看摘要][在线阅读][下载 1138K]
    [下载次数:97 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:74 ]
  • 四价流感病毒裂解疫苗上市后安全性及免疫原性评价

    肖艳慧;郭雪;韩莎莎;王圣怡;张岷;王辰皓;阮杰为;罗林云;刘小琴;陈海平;

    目的评价四价流感病毒裂解疫苗[influenza vaccine(split virion),inactivated,quadrivalent,IIV4]上市后的安全性和免疫原性。方法选择2020年9月—2021年6月于贵州、福建及湖南省接种1剂IIV4、年龄≥3岁的人群为研究对象,受试者分别于接种前和接种后30 d静脉采血5.0 mL,分离血清,采用血凝抑制试验(hemmagglution inhibition test,HI)检测4种(H1N1、H3N2、BY和BV)血清抗体水平,主动监测接种后0~7 d的不良事件。结果 410人完成入组及接种纳入安全性分析,研究期间脱落9人,401人纳入免疫原性分析。H1N1、H3N2、BY和BV抗体阳转率的95%可信区间(CI)下限均超过40%,接种后保护率的95%CI下限均超过70%,抗体几何平均增长倍数(GMI)的95%CI下限均超过2.5。研究期间共发生103例不良事件,不良事件总发生率为25.12%,局部不良事件以接种部位疼痛、硬结、红、肿胀为主,全身不良事件以发热、腹泻、嗜睡为主,严重程度以1级(轻度)为主。结论 IIV4上市后具有良好的安全性和免疫原性。

    2021年12期 v.34 1473-1476页 [查看摘要][在线阅读][下载 1136K]
    [下载次数:84 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:77 ]

技术方法

  • 两种高浓度静注人免疫球蛋白中IgA残留量检测方法的验证及比较

    刘勇;李泽秀;唐良玉;邓靖;张尧;余雨蓉;陈云华;赵学梅;

    目的对酶联免疫法与散射比浊法检测高浓度静注人免疫球蛋白(human immunoglobulin for intravenous injection,IVIG)中IgA残留量进行验证及比较。方法分别验证两种方法的线性范围、准确度、重复性、中间精密性、专属性,并对两种方法进行比对分析。用两种方法检测7批次高浓度IVIG中的IgA残留量,并与中国食品药品检定研究院检测结果进行比对。结果酶联免疫法IgA浓度在12.5~800 ng/mL范围内与A450呈良好的线性关系(r=0.999 96),散射比浊法IgA浓度在0.261~8.35 mg/L范围内标准曲线均值偏差为0.56%;两种方法的加样回收率分别为103.32%和89.82%;重复性和中间精密性的RSD均小于8%;甘氨酸辅料对两种方法测定IgA残留量干扰较小。两种方法测定3批IVIG中IgA残留量结果差异无统计学意义(P> 0.05);委外检测的7批次高浓度IVIG中IgA残留量略低于企业自检结果。结论酶联免疫法与散射比浊法均可快速、简便、准确地测定高浓度IVIG中IgA残留量,可用于产品质量控制。

    2021年12期 v.34 1477-1481页 [查看摘要][在线阅读][下载 1156K]
    [下载次数:38 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:77 ]
  • 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术在13价肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗生产用菌种质量控制中的作用

    张丽芝;李阿妮;张新庄;程新;白贵杰;任克明;郑明睿;罗树权;

    目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术在13价肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗生产用菌种质量控制中的作用。方法采用《中国药典》三部(2020版)中规定方法对13种血清型共24株肺炎球菌的经典表型进行鉴定,应用MALDI-TOF MS技术构建蛋白指纹图谱,根据质谱图的相似性进行聚类分析。同时采用MALDI-TOF MS技术检测不同荚膜丰度14型肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae serotype 14,FL14)、不同来源FL5菌种及不同批次FL5工作菌种的蛋白指纹图谱的差异。结果 13种血清型肺炎球菌均符合相关要求,蛋白指纹图谱存在差异,共分为3个聚类。不同荚膜丰度FL14的蛋白指纹图谱一致;FL5丹麦菌种及北京儿科医院菌种的指纹图谱有差异,且为不同聚类;不同批次FL5工作菌种的蛋白指纹谱图一致,均为同一个聚类。结论 MALDI-TOF MS技术可作为经典细菌表型鉴定外的补充方法,丰富肺炎球菌菌种信息,可应用于疫苗用生产菌种的质量控制。

    2021年12期 v.34 1482-1487页 [查看摘要][在线阅读][下载 1359K]
    [下载次数:69 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:77 ]
  • 制定疫苗生产过程中各类质量属性控制限的统计学方法分析

    刘东梅;杨雯娜;肖雪莉;吕玉婷;高晶晶;赵一欢;杨淼;刘晨鸣;刘晓凡;

    目的探讨制定疫苗生产过程中各类质量属性控制限的统计学分析方法。方法采用个体分布识别、正态概率检验及阈值法等统计分析方法,以2019年A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗多糖含量(A群多糖磷含量、C群多糖N-乙酰神经氨酸含量)及水分指标为例,应用Minitab数据分析软件对疫苗生产过程中制定各类质量属性控制限的统计学方法进行分析。结果对服从正态分布的质量属性,采用μ±2σ或μ±3σ制定其控制限;对不服从正态分布的质量属性,通过分布拟合的情况计算其概率函数,再根据其分布规律制定相应的警戒限或行动限,包括Johnson变换和Box-Cox变换;对于不能拟合任何分布的质量属性,利用阈值法或公差限制的方法制定其控制限度。结论采用科学规范的统计学分析方法制定疫苗生产过程中各类质量属性的控制限对持续生产符合预定质量标准的产品具有一定的指导意义。

    2021年12期 v.34 1488-1496页 [查看摘要][在线阅读][下载 1722K]
    [下载次数:131 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:81 ]
  • 新型冠状病毒抗体水平检测方法的比较

    杜丽芳;侯亚楠;雷泽华;袁润余;梁宇;韩子泊;唐芳;李启明;

    目的分析新型冠状病毒抗体水平不同检测方法间的相关性和一致性。方法将重组新型冠状病毒疫苗免疫Wistar大鼠,采用ELISA法检测大鼠血清特异性IgG抗体水平,假病毒中和试验和野病毒中和试验检测大鼠血清中和抗体水平。对不同方法的检测结果进行相关性(Spearman秩相关)和一致性(kappa检验)分析。结果 3种方法的检测结果均具有良好的相关性(Spearman rs> 0.75,P <0.05)和一致性(kappa> 0.75)。结论新型冠状病毒抗体水平3种检测方法结果的相关性和一致性均良好,对疫苗早期研发中免疫效果的评价具有重要指导意义。

    2021年12期 v.34 1497-1500页 [查看摘要][在线阅读][下载 1232K]
    [下载次数:235 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:84 ]
  • 聚乙二醇化重组人干扰素α2b位置异构体比例离子交换高效液相色谱测定法的建立及修饰位点分析

    董世建;许培;章良弼;李增礼;程婷;王荣海;魏兆军;

    目的建立聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEGylated recombinant human interferonα2b,PEG-rhIFNα2b)位置异构体比例的离子交换高效液相色谱(ion exchange high performance liquid chromatography,IEC-HPLC)测定法,并对各异构体修饰位点进行分析。方法色谱柱采用Proteomix SCX-NP10(10.0 mm×250 mm,10μm);流动相A为:1.8 mmol/L一水合柠檬酸-3.3 mmol/L十二水合磷酸氢二钠(pH 5.3),流动相B为:30 mmol/L柠檬酸三钠-35 mmol/L二水合磷酸二氢钠(pH 6.0);线性梯度洗脱:0~180 min(0%B→12%B),180~220 min(12%B→15%B);流速为:0.4 mL/min;柱温为:25℃;进样量:不低于100μg。同时对IEC-HPLC法进行专属性及重复性验证。采用建立的方法测定3批PEG-rhIFNα2b的位置异构体比例,并通过SPSS 19.0软件进行分析,拟定5个位置异构体比例质量标准。采用建立的方法富集5个位置异构体的洗脱峰,进行修饰位点定位。结果空白对照和rhIFNα2b原液无色谱峰出现,对PEG-rhIFNα2b位置异构体测定无干扰,PEG-rhIFNα2b可见5个异构体峰,且分离度良好;同批PEG-rhIFNα2b连续测定3 d,峰1、2、3、4和5面积的总RSD分别为1.96%、2.53%、2.54%、1.05%和1.86%,均<3.0%。PEG-rhIFNα2b的5个位置异构体比例质量标准可拟定为:峰1为5%~9%、峰2为14%~21%、峰3为7%~10%、峰4为30%~34%、峰5为31%~39%。PEG-rhIFNα2b位置异构体峰1修饰位点主要为K31,峰2主要为K134,峰3主要为K131和K164,峰4主要为K83,峰5主要为K121,未检测到N-末端PEG修饰。结论建立了PEG-rhIFNα2b位置异构体比例的IEC-HPLC测定法,该方法具有良好的专属性及重复性,可用于PEG-rhIFNα2b位置异构体比例的测定。

    2021年12期 v.34 1501-1505+1510页 [查看摘要][在线阅读][下载 1340K]
    [下载次数:34 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:72 ]

综述

  • 脊髓灰质炎疫苗的研究进展

    刘悦越;赵荣荣;李长贵;

    使用脊髓灰质炎口服减毒活疫苗(oral poliomyelitis vaccine,OPV)和灭活疫苗(inactivated poliomyelitis vaccine,IPV)的全球疫苗接种计划显著降低了脊髓灰质炎(简称脊灰)的发病率,世界卫生组织(World Health Organization,WHO)已宣布根除Ⅱ型和Ⅲ型脊灰野病毒。但在根除脊灰的最后阶段和之后的无脊灰世界中,这些疫苗或其生产构成了重大风险。鉴于此,国内外学者针对新型安全有效的脊灰疫苗进行了研究。本文对脊灰疫苗的应用现状及研究进展作一综述,旨在为研发新型疫苗及接种策略提供参考。

    2021年12期 v.34 1506-1510页 [查看摘要][在线阅读][下载 1279K]
    [下载次数:170 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:78 ]
  • 单克隆抗体治疗系统性红斑狼疮的临床研究进展

    杨先远;王红胜;

    系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种累及全身的慢性自身免疫疾病,可对多器官造成损害。随着对SLE发生发展分子机制的深入研究,发现了许多与SLE发生发展相关的靶点分子,如B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)、B淋巴细胞表面的CD20受体及CD22受体、T淋巴细胞表面的CD80受体及CD86受体、干扰素α(interferonα,IFNα)及其受体、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-12、IL-23、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),其中一些相应单克隆抗体已进入临床试验阶段或已上市,用于治疗SLE。本文对已进行Ⅱ或Ⅲ期临床试验的SLE相关靶点分子单克隆抗体的部分试验结果作一综述。

    2021年12期 v.34 1511-1515页 [查看摘要][在线阅读][下载 1295K]
    [下载次数:292 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:72 ]
  • 腺苷酸环化酶毒素的生物特性及其在百日咳疫苗中的潜在应用

    张学;江文文;

    腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin,ACT)是百日咳杆菌分泌的重要毒力因子之一,可通过削弱吞噬细胞、中性粒细胞和T细胞等免疫细胞的杀菌能力来协助百日咳杆菌逃避宿主免疫系统的攻击。虽然ACT是一种具有腺苷酸环化酶活性和溶血素活性的毒性蛋白,但可通过基因技术方法去除其毒力因素,成为无细胞百日咳(acel-l ular pertussis,aP)疫苗的一种潜在保护性抗原和佐剂。本文就ACT的生物特性及其在aP疫苗中的潜在应用作一综述。

    2021年12期 v.34 1516-1519页 [查看摘要][在线阅读][下载 1257K]
    [下载次数:16 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:71 ]
  • Sestrin2在2型糖尿病血栓形成中的作用

    李萍;哈小琴;

    2型糖尿病(type 2 diabetes,T2D)现已成为全球性的公共卫生问题,患者多处于血液高凝状态或血栓前状态。在T2D死亡患者中,约80%死于血栓事件。为提高糖尿病患者的生存寿命和质量,对于血栓的防治就显得极其重要。Sestrin2作为近年来发现的新型高度保守的蛋白,具有突出的抗氧化能力,已成为多种疾病研究中的热点。同样在糖尿病血栓形成的各个环节中也有重要参与,具有潜在的抗血栓作用。但目前关于Sestrin2与糖尿病血栓形成关系的文章较少,相关的综述更是鲜有报道。因此,本文就Sestrin2在糖尿病血栓形成的关键环节发挥的作用作一综述,为其他学者的研究提供参考的同时,也为血栓的治疗提供新的思路和靶点。

    2021年12期 v.34 1520-1523+1528页 [查看摘要][在线阅读][下载 1379K]
    [下载次数:66 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:72 ]

专题报道

  • CpG ODN佐剂的研究进展及其药学研究的思考

    徐莉;李敏;

    <正>目前国外已有应用CpG ODN作为佐剂的预防性疫苗上市,且多个疫苗处于临床试验研究阶段,国内也有疫苗正在开展临床试验研究,成为目前疫苗研发的热点之一。本文拟对CpG ODN佐剂的相关研究进展作一报道,并从技术审评角度对其药学研究提出一些思考。

    2021年12期 v.34 1524-1528页 [查看摘要][在线阅读][下载 1426K]
    [下载次数:170 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:81 ]