中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 流感病毒疫苗株在MDCK细胞中增殖条件的优化

    李兴航;刘琛;张家友;闫璐瑶;韩天;刘博;李芳;宋颖丽;杨晓明;

    目的优化四价流感裂解疫苗中H1N1(IVR-180)、H3N2(IVR-186)、BV(NYMC BX-69A)、BY(B/Phuket/3073/2013)亚型疫苗株在MDCK细胞中的增殖条件。方法以血凝滴度和半数组织感染剂量(median tissue culture infective dose,TCID_(50))为指标,通过棋盘法对4种亚型流感病毒疫苗株在MDCK细胞上种毒的MOI(0.1、0.01、0.001、0.000 1)、TPCK胰酶终浓度(0.5、1、1.5、2、3、4μg/mL)及收毒时间(0、24、48、72、96 h)进行优化,并检测各条件下MDCK细胞的葡萄糖和乳酸代谢情况。结果 H1N1(IVR-180)、H3N2(IVR-186)、BV(NYMC BX-69A)、BY(B/Phuket/3073/2013)4种亚型流感病毒疫苗株的最适MOI分别为0.000 1、0.001、0.000 1和0.001,TPCK胰酶终浓度分别为1、2、1和2μg/mL,收毒时间分别为72、48、48和48 h。各条件下MDCK细胞的葡萄糖和乳酸代谢水平呈整体上升趋势。结论成功优化了4种亚型流感病毒疫苗株在MDCK细胞上的增殖条件,为以MDCK细胞为基质流感疫苗的研发奠定了基础。

    2021年03期 v.34 249-254页 [查看摘要][在线阅读][下载 2119K]
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  • 不同佐剂联合抗原表位融合蛋白对流感疫苗免疫原性的影响

    周云;方超;王丽;祁碧玉;金香玉;杨世龙;谭小东;

    目的观察不同佐剂与抗原表位融合蛋白配伍后对季节性流感疫苗在小鼠体内免疫原性的影响。方法流感病毒抗原表位融合蛋白(FP)分别辅以氢氧化铝、聚肌胞(PolyIC)+氢氧化铝以及阳离子佐剂免疫小鼠,再以四价流感病毒裂解疫苗(QIV)加强免疫,通过检测血凝抑制(hemagglutination inhibition,HI)效价和血凝素(hemagglutinin,HA)IgG抗体评价免疫原性。结果佐剂和融合蛋白本身并不能产生针对任何型别的HI抗体;QIV加强免疫后,阳离子佐剂配伍组显著提高了QIV同源株H1N1和H3N2型HI效价或阳转率,且提高了非同源株H3N2型HA IgG抗体水平。结论阳离子佐剂辅助流感病毒抗原表位融合蛋白免疫小鼠后,可显著增强季节性流感疫苗甲型毒株在小鼠体内的免疫原性。

    2021年03期 v.34 255-259页 [查看摘要][在线阅读][下载 240K]
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快讯

  • 《中国生物制品学杂志》入编2020年版《中文核心期刊要目总览》

    <正>2021年3月10日,《中国生物制品学杂志》接到《中文核心期刊要目总览》2020年版编委会通知:依据文献计量学的原理和方法,经研究人员对相关文献的检索、统计和分析,以及学科专家评审,《中国生物制品学杂志》入编《中文核心期刊要目总览》2020年版(即第9版)基础医学类的核心期刊。

    2021年03期 v.34 259页 [查看摘要][在线阅读][下载 35K]
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  • 《中国生物制品学杂志》稿约

    <正>《中国生物制品学杂志》于1988年创刊,主要报道我国生物制品科技成果及相关行业国内外研究现状和发展动态。本刊为月刊,由国家卫生健康委员会主管,中华预防医学会和长春生物制品研究所主办。1刊载内容和设置栏目本刊主要刊载生物制品和生物技术产品相关领域,如预防医学、免疫学、微生物学、生物化学、流行病学、临床医学等方面的研究、生产、使用及质控类学术文章,并兼顾重大学术交流活动的报道。在选择来稿时注重学术性、前沿性和实用性。本刊主要设有疫苗研究、基础研究、治疗制剂、诊断制剂、临床研究、技术方法、综述及专题报道等栏目。

    2021年03期 v.34 376页 [查看摘要][在线阅读][下载 44K]
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基础研究

  • 氢氧化铝佐剂对百日咳菌毛抗原的吸附特性分析

    杨柏峰;朱德武;陈雯;周以斯;王丽;龚贝哲;方习静;霍梦颖;胡源;杨晓明;

    目的探索氢氧化铝[Al(OH)_3]佐剂对百日咳菌毛(fimbriae,Fim)抗原的吸附特性及在组分百日咳疫苗制备中的应用。方法通过Zeta电位确定Fim抗原和Al(OH)_3佐剂的等电点(pI);朗格缪尔(Langmuir)吸附方程计算不同氯化钠(NaCl)浓度下,Fim抗原在Al(OH)_3佐剂表面的最大吸附量,根据最大吸附量随NaCl浓度的变化趋势判断吸附作用力种类,分析不同浓度磷酸盐和pH对Fim抗原吸附率的影响。采用间接ELISA法检测不同磷酸盐浓度下配制的Fim-Al(OH)_3复合物免疫小鼠后的血清抗体效价。结果 Fim抗原的pI为5.5,其最大吸附量随离子强度(NaCl)增加而基本保持不变,吸附率随磷酸盐浓度增加而缓慢降低,但仍保持在90%以上。先加磷酸盐后吸附的复合物免疫小鼠后血清抗体滴度高于其他组。结论 Fim抗原与Al(OH)_3佐剂的吸附作用除了静电吸引外,还存在配基交换方式,不同配制方式获得的Fim-佐剂复合物免疫小鼠产生的血清抗体滴度不同,为百日咳疫苗配制中加入Fim抗原提供了数据支持。

    2021年03期 v.34 260-265+271页 [查看摘要][在线阅读][下载 542K]
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  • 1例犊牛腹泻大肠埃希菌的分离鉴定及毒力基因检测

    史量全;赵志炎;郑佳玮;王永强;李偲;刘锴;马德慧;

    目的对1例犊牛腹泻大肠埃希菌进行分离鉴定及毒力基因检测。方法无菌采集发病牛肝脏、脾脏、肾脏及十二指肠等脏器,制备肝脾组织切片,HE染色后观察组织病理学变化,并对分离菌株进行动物试验、生化试验、药敏试验、16S rRNA的PCR鉴定、系统进化树分析、毒力基因检测及O抗原鉴定。结果心脏、肝脏病理学组织切片有明显坏死及淋巴细胞浸润;16S rRNA基因序列与大肠埃希菌达99%以上,并将该序列命名为S(牛病料分离);检测到iroN、ompT、hlyF、Iss-F1、iutA、phoA、luxS、pfs、fimC、Stx2、tsh、iucD、cvac、Iss-F2、ompA、hlyE 16种毒力基因,生化鉴定该菌株为大肠埃希菌的置信度为99%;血清型为O79,并对小白鼠有很强的致病性。该菌株对庆大霉素、新霉素、卡那霉素、氧氟沙星高度敏感,对红霉素、丁胺卡那敏感,对诺氟沙星、青霉素不敏感;该菌基因序列(S)进化树分析显示,与人粪便分离大肠埃希菌(KJ803896.1)的亲源性达99%。结论该例犊牛腹泻由大肠埃希菌O79型导致,携带16种毒力基因。

    2021年03期 v.34 266-271页 [查看摘要][在线阅读][下载 1810K]
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  • 表达rhGH-Fc融合蛋白的CHO工程细胞的传代稳定性分析

    许佳慧;俞露;薛毅勇;梁久佳;富锐丽;王莹;李利;刘涵;

    目的分析表达重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc融合蛋白的CHO工程细胞的传代稳定性,确定细胞的生产稳定代次。方法取表达rhGH-fc融合蛋白的CHO细胞(35代),连续传代建立50、70、90代细胞库。复苏各代次细胞并进行培养表达,绘制不同代次的细胞生长曲线,比较不同代次细胞在对数生长期的比生长速率;培养结束,对不同代次细胞表达的蛋白进行亲和层析纯化,比较其表达量,Western blot法对表达蛋白进行鉴定,通过对目的基因mRNA测序比较目的基因的稳定性。结果 50和70代细胞与35代相比,生长曲线基本重合,90代细胞曲线出现差异;50、70、90代细胞在对数生长期的比生长速率与35代相比,差异均无统计学意义(P>0.05),但90代的P值已明显降低;50和70代细胞重组蛋白表达量与35代相比,差异均无统计学意义(P> 0.05),但90代细胞重组蛋白的表达量下降比例达42%;各代次细胞rhGH-Fc基因序列保持稳定,与理论一致。结论表达rhGH-Fc融合蛋白的CHO工程细胞的生产稳定代次为70代,可满足后续研究和生产需要。

    2021年03期 v.34 272-275页 [查看摘要][在线阅读][下载 322K]
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  • 过表达脑红蛋白对大鼠脊髓损伤的神经保护作用及其机制

    王浩;张雄;唐宁曼;王晓林;

    目的观察过表达脑红蛋白(neuroglobin,NGB)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经功能的影响,并探讨其可能的机制。方法将90只SD大鼠随机分为5组:假手术组、SCI模型组(SCI)、阴性对照组(NC)、AAV-Ngb组(Ngb)和AAV-Ngb+LY249002组(Ngb+LY),每组18只。采用改良Allen′s法制备SCI模型,假手术组大鼠仅暴露T10脊髓背侧面,其余各组依次用微量注射器将生理盐水、AAV-Con、AAV-Ngb溶液和AAV-Ngb+LY294002液(5μmol/L)注入损伤脊髓T10所在节段的中点以及头尾两侧,于术后1、3、7、14、21、28 d,采用BBB(Basso Beattie Bresnaha)评分法评估各组大鼠的后肢运动能力;Tunel染色观察各组大鼠脊髓组织细胞的凋亡;caspase-3和caspase-9酶活性检测试剂盒检测各组大鼠脊髓组织中caspase-3和caspase-9的酶活性;Western blot检测各组大鼠脊髓组织中caspase-3、caspase-9、T(p)-Akt蛋白的表达。结果与假手术组比较,SCI和NC组大鼠的BBB后肢运动功能评分均显著降低(P <0.01),细胞凋亡数明显增多(P <0.01),而与凋亡密切相关的caspase-3和caspase-9酶活性以及蛋白表达水平也显著升高(P <0.01),而p-Akt的蛋白表达水平明显降低(P <0.01);注射Ngb后,BBB评分在术后7、14、21、28 d明显升高(P <0.01),凋亡细胞数和caspase-3、caspase-9的酶活性、蛋白表达水平均明显下降(P <0.01),p-Akt的表达也显著升高(P <0.01),且呈时间依赖性(P <0.01);而注射Akt抑制剂LY249002后,Ngb的作用部分被显著抑制(P <0.05)。结论过表达Ngb可通过激活PI3K/Akt通路抑制大鼠脊髓神经细胞的凋亡,从而对SCI发挥神经保护作用。

    2021年03期 v.34 276-281页 [查看摘要][在线阅读][下载 1513K]
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  • 马疱疹病毒1型XJ2015株的增殖、纯化及鉴定

    贾钦瑞;鲍子磊;车传忠;郑学功;翟少华;冉多良;

    目的评价蔗糖密度梯度离心法对马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1,EHV-1)XJ2015株的纯化效果。方法病毒增殖后,收获病毒液,经硫酸铵浓缩、蔗糖密度梯度离心法纯化EHV-1,电镜下观察病毒形态,SDS-PAGE、Western blot、BCA及马体致病性试验鉴定病毒纯化效果。结果纯化后的EHV-1电镜下可见完整的病毒颗粒且形态典型,直径约120 nm,效价可达10~(10.02) TCID_(50)/0.1 mL,回收率为61.7%;SDS-PAGE及Western blot分析显示,纯化病毒杂蛋白显著减少且具有良好的反应原性;纯化后病毒感染马匹出现原发性感染临床症状并出现排毒现象。结论利用蔗糖密度梯度离心法可获得高纯度的纯化病毒株EHV-1-XJ-2015,为进一步研究EHV-1的致病机理及减毒、灭活疫苗的研发提供了参考。

    2021年03期 v.34 282-285页 [查看摘要][在线阅读][下载 758K]
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  • 蔗糖异构酶PalⅠ-Cu~(2+)纳米花固定化酶的制备及其结构、性能分析

    孟虹;赵怡;李宪臻;李蓉;

    目的制备蔗糖异构酶PalⅠ-Cu~(2+)纳米花固定化酶(简称蔗糖异构酶PalⅠ-Cu~(2+)纳米花),并分析其结构及性能。方法用0.5 mmol/L IPTG诱导重组菌pET28a-PalⅠE. coli BL21(DE3)表达蔗糖异构酶PalⅠ,纯化后结合Cu~(2+)制备杂化蔗糖异构酶PalⅠ-Cu~(2+)纳米花,优化制备条件[磷酸盐缓冲溶液pH(6.0、7.4、8.0及9.0)、制备温度(4及25℃)及制备时间(12、24、48、72及120 h)]。通过扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)及透射电子显微镜(tran-smission electron microscope,TEM)观察蔗糖异构酶PalⅠ-Cu~(2+)纳米花的形态结构,并分析其稳定性及循环利用性。结果经SDS-PAGE分析,纯化的蔗糖异构酶PalⅠ表达正确,其在pH 7.4的磷酸缓冲液中4℃反应48 h制备的蔗糖异构酶PalⅠ-Cu~(2+)纳米花具有最高酶活性。经SEM及TEM观察,蔗糖异构酶PalⅠ-Cu~(2+)纳米花结构为众多花瓣紧密排列的单一球状。游离的蔗糖异构酶PalⅠ于4℃保存9 d后基本失活,蔗糖异构酶PalⅠ-Cu~(2+)纳米花于4℃保存15 d后酶活性仍保留80%的初始活性,其循环利用6次后,酶活性仍余40%。结论成功制备了蔗糖异构酶PalⅠ-Cu~(2+)纳米花,其固定化结构明显提高了酶的稳定性,且具有较好的循环性能。

    2021年03期 v.34 286-289+293页 [查看摘要][在线阅读][下载 698K]
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治疗制剂

  • 重组人粒细胞刺激因子生物学活性国家标准品的制备及协作标定

    刘兰;于雷;丁有学;郭莹;史新昌;饶春明;

    目的制备重组人粒细胞刺激因子(recombinant humna granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)生物学活性国家标准品,并进行协作标定。方法 rhG-CSF原液中加入冻干保护剂制备待标品,进行外观、无菌检查及水分、生物学活性检测。将待标品置-20、4、25、37℃分别保存1、2和3个月,取样,检测相对生物学活性,评价热加速稳定性。组织国内5家实验室对待标品进行协作标定。结果制备的待标品灌装变异度<1%,其外观、水分、无菌、生物学活性检查结果均符合相关要求;热加速稳定性试验结果拟合Eyring方程为:ln{k(t)}=18.49-7 853/T+ln(T),R~2=0.880,预测待标品于-20℃贮存时,生物学活性衰减10%约需111个月;于-30℃贮存时,生物学活性衰减10%约需417个月。5家实验室协作标定制备的待标品赋值为4.2×10~6 IU/支。结论制备的rhG-CSF生物学活性国家标准品具有良好的稳定性,可用于rhG-CSF制品的质量评价。

    2021年03期 v.34 290-293页 [查看摘要][在线阅读][下载 159K]
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  • 二十二碳六烯酸诱导小鼠宫颈癌相关肿瘤细胞免疫原性死亡的作用

    陈永俊;孙文佳;何金蓉;马雁冰;

    目的建立诱导小鼠宫颈癌相关肿瘤细胞TC-1发生免疫原性死亡(immunogenic cell death,ICD)的优化策略并揭示其特点。方法在体外分别用花青素、二甲双胍和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)处理TC-1细胞,显微镜观察细胞死亡情况及形态特征,筛选性价比较高的药物探讨其毒力学特征;通过不同浓度的药物处理同一时间和同一浓度的药物处理不同时间两种方案处理TC-1细胞,显微镜观察及LDH试剂盒检测细胞死亡情况;ATP试剂盒、ELISA检测细胞死亡的免疫介质释放,Western blot检测自噬相关分子表达。结果 DHA在诱导细胞死亡效果和成本上优于花青素及二甲双胍。160μmol/L DHA诱导TC-1细胞8 h是诱导ICD的最优条件,且TC-1细胞死亡呈现肿胀的细胞焦亡形态。DHA处理促进了TC-1细胞ICD物质ATP及IL-6、IL-1β、TNF-α的释放;DHA诱导的ICD可能与细胞自噬相关。结论 DHA能够有效诱导TC-1细胞ICD,本研究为探讨肿瘤细胞焦亡以及基于小鼠模型开展宫颈癌免疫治疗奠定了基础。

    2021年03期 v.34 294-299+306页 [查看摘要][在线阅读][下载 1593K]
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诊断制剂

  • 柯萨奇病毒A组6型通用抗原检测试剂盒的建立

    刘思远;卞莲莲;高帆;刘佩;霍雅倩;王泽鋆;张中洋;李雅静;戈小琴;顾美荣;安超强;李克雷;毛群颖;姜崴;

    目的建立柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)疫苗抗原定量检测试剂盒,用于CV-A6疫苗以及含有CV-A6的手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)多价疫苗的研发及质量控制。方法分别采用多个CV-A6毒株与多家企业的CV-A6抗原,通过结合能力和中和能力比较,从6个单克隆抗体(9H1、3D9、10F4、5A6、6D12和10G8)中筛选出具有广谱高结合能力及高中和能力的单克隆抗体,建立ELISA法CV-A6抗原定量检测试剂盒。对试剂盒进行线性、专属性、准确度、精密度、耐用性等验证。将试剂盒分发国内主要CV-A6疫苗研发企业,由各企业分别采用该试剂盒对各自制备的CV-A6疫苗原液以及生产工艺各中间环节制品进行CV-A6抗原含量检测,考核试剂盒适用性。结果以多克隆抗体CV-A6-3I作为包被抗体,最佳浓度为1∶8 000,以5A6单克隆抗体作为酶标抗体,最佳浓度为1∶8 000;包被条件为4℃过夜;封闭液为10%FBS+PBST+5%蔗糖,37℃封闭2 h;抗体稀释液为ED-33,酶标抗体作用条件为37℃1 h;显色条件为37℃10 min。建立的CV-A6抗原检测试剂盒线性范围为11~178 ng/mL,线性良好,定量检出限为11 ng/mL;与同为小RNA病毒科的CV-A16、甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)、CV-A10、EV-A71以及MEM、DMEM和PBS缓冲液等均无交叉反应,专属性良好;检测回收率在83%~114%之间,单个实验员和2个实验员重复检测CV均小于15%,准确度、重复性和中间精密度均良好;抗原或酶标抗体孵育时间上下浮动5 min或反应温度上下浮动2℃,回收率在83%~107%之间,耐用性良好。该试剂盒检测4个企业制备的CV-A6疫苗原液和疫苗制备过程中的中间制品均具有良好的线性和平行性,提示该试剂盒对国内主要CVA6疫苗及中间制品均具有良好的适用性。结论本研究采用具有高效价、广谱中和活性的单克隆抗体和多克隆抗体,建立了双抗体夹心ELISA法CV-A6疫苗抗原定量检测试剂盒。经方法验证和适用性研究,证明该试剂盒各项指标良好,可作为CV-A6疫苗通用试剂盒用于CV-A6抗原含量检测,为CV-A6疫苗和HFMD多价疫苗研发及质量控制提供了可靠的检测手段。

    2021年03期 v.34 300-306页 [查看摘要][在线阅读][下载 393K]
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  • 鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒国家参考品的研制

    徐潇;石继春;王春娥;李康;黄洋;李江姣;梁丽;陈驰;叶强;

    目的研制鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒国家参考品,用于该试剂盒的质量评价。方法收集10株鲍氏不动杆菌和10株阴性参考菌株(同属不同种的不动杆菌及与鲍氏不动杆菌感染部位相同或感染症状相似的病原菌)新鲜培养物,进行灭活、分装。并对参考品进行均匀性及稳定性评估,同时验证其准确性、特异性、重复性、最低检出限。组织7家实验室对制备的参考品开展协作标定。结果成功制备了鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒国家参考品,包括10个阳性参考品、10个阴性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品。阳性参考品、最低检出限参考品和重复性参考品Ct值的CV均<2.5%;与-20℃保存的参考品比较,于2~8、25、37℃分别放置3、7、14 d及冻融3、5次后参考品Ct值的差异均无统计学意义(P> 0.05)。制备的参考品具有良好的准确性、特异性、重复性,最低检出限为1.0×10~3个/mL。参加协作标定的7家实验室中,除1家出现假阳性结果,其他实验室的准确性、特异性和重复性验证均符合规定;有1家实验室的最低检出限高于1.0×10~3个/mL。结论本实验研制的参考品可用于鲍氏不动杆菌核酸检测试剂盒的质量评价。

    2021年03期 v.34 307-312+318页 [查看摘要][在线阅读][下载 631K]
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临床研究

  • 2015—2018年宁波市23价肺炎球菌多糖疫苗疑似预防接种异常反应监测分析

    林立志;叶莉霞;马瑞;方挺;董红军;许国章;

    目的分析2015—2018年宁波市23价肺炎球菌多糖疫苗(23-valent pneumococcal polysaccharide vaccine,PPV23)疑似预防接种异常反应(adverse event following immunization,AEFI)的发生情况。方法通过全国AEFI监测管理信息系统及宁波市免疫规划信息管理系统分别收集2015—2018年宁波市接种PPV23后发生AEFI的病例资料及PPV23接种数据,采用描述性流行病学方法进行分析。结果 2015—2018年宁波市共报告PPV23 AEFI个案242例,发生率为221.71/10万剂。48 h及时报告率、48 h及时调查率、个案调查表3 d内及时报告率、个案调查表完整率、调查报告7 d内上传率和AEFI分类率等各项国家监测指标均符合要求。242例AEFI中,一般反应235例,异常反应3例,偶合症4例。男女性别比为1.37∶1,年龄主要分布在2~3岁儿童(占80.99%),季节分布以夏季和冬季为主,城区报告例数高于农村。与流行性乙型脑炎(乙脑)减毒活疫苗同时接种报告AEFI数目最多。临床诊断主要以发热、局部红肿和局部硬结为主,预后良好。98.35%的接种反应发生在接种后1 d。结论 PPV23具有良好的安全性,2015—2018年宁波市AEFI监测敏感性较高。

    2021年03期 v.34 313-318页 [查看摘要][在线阅读][下载 225K]
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  • 辽宁省鞍山市2019年手足口病月发病数预测模型分析

    张宪策;曹艳;尹晔;

    目的对2009—2018年辽宁省鞍山市手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)月发病数及病原学特征进行分析,并构建季节性自回归移动平均模型(autoregressive integrated moving average model,ARIMA model),为制定鞍山市HFMD预防控制措施提供依据。方法利用Excel 2010建立2009—2018年鞍山市HFMD月发病数的数据库,通过SPSS 19.0软件构建时间序列图和季节性ARIMA预测模型,利用预测模型对鞍山市2019年HFMD发病数作出预测。结果 2009—2018年鞍山市HFMD发病率呈隔年递减趋势,趋势性卡方比较差异有统计学意义(P <0.05)。2009—2018年HFMD不同型别阳性检出率比较,差异有统计学意义(P <0.05)。构建季节性ARIMA模型(1,0,1)(0,1,1)_(12)的拟合R~2=0.857,标准化BIC=2.979,平均相对误差为9.97%,残差为白噪声,模型回归系数有统计学意义,预测值和实际值拟合效果较好。结论季节性ARIMA模型能较好地拟合鞍山市2019年HFMD发病趋势,对鞍山市HFMD防控措施的制定具有指导意义。

    2021年03期 v.34 319-323页 [查看摘要][在线阅读][下载 590K]
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  • 多囊卵巢综合征中高雄激素诱导的颗粒细胞自噬激活作用

    孙东梅;柴蔚然;匡延平;王锋;

    目的探讨高雄激素睾酮(testosterone)对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者卵巢颗粒细胞自噬的影响。方法分离培养卵巢功能正常的不孕患者(对照组)及PCOS不孕患者(PCOS组)的卵巢颗粒细胞,分别用10μmol/L睾酮处理24 h;将人卵巢颗粒细胞株KGN培养至3×10~5个,分别进行小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)及小泛素样修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)特异肽酶3(SUMO specific peptidase 3,SENP3)质粒转染;RT-PCR法检测SENP3基因mRNA转录水平,Western blot法检测LC3Ⅱ/Ⅰ、P62及SENP3蛋白表达水平。结果与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著升高(P <0.01),P62蛋白表达水平显著降低(P <0.01);两组患者卵巢颗粒细胞经睾酮处理后,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著升高(P均<0.05),P62蛋白表达水平显著降低(P均<0.05)。与对照组比较,PCOS组卵巢颗粒细胞中SENP3 mRNA转录及蛋白表达水平均显著降低(P均<0.05)。KGN细胞经siRNA干扰,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平上调(P <0.01),P62蛋白表达水平下降(P <0.05);KGN细胞经SENP3质粒转染,LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平无明显变化(P> 0.05),P62蛋白表达水平上调(P <0.01)。PCOS组卵巢颗粒细胞经睾酮处理后,SENP3蛋白表达水平显著下降(P <0.05)。结论PCOS患者颗粒细胞有一定程度的自噬激活,且高雄激素参与了PCOS患者颗粒细胞的自噬激活过程,其作用机制可能与高雄激素抑制颗粒细胞中SENP3蛋白表达有关。

    2021年03期 v.34 324-329+334页 [查看摘要][在线阅读][下载 708K]
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技术方法

  • 人狂犬病病毒抗体ELISA定量检测方法的建立

    卞论;赵卉;贾庆钊;方浩霖;何春辉;叶珂;林冠峰;吴英松;

    目的建立人狂犬病病毒抗体ELISA定量检测方法,用于评价人用狂犬病疫苗的免疫效果。方法将抗狂犬病病毒单克隆抗体(S010)包被酶标板,加入1∶100稀释的狂犬病病毒灭活全病毒孵育1 h,加入标准品与HRP标记的抗人IgG孵育1.5 h,显色并检测,建立检测狂犬病病毒抗体的ELISA方法,确定该方法空白限,并进行准确度、精密度验证。用建立的ELISA方法及快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)对62份阳性血清进行检测,比较相关性。结果捕获抗体最佳包被浓度为3.5μg/mL,酶标抗体最佳稀释度为1∶10 000;样品浓度与信号值具有良好的线性关系,r~2> 0.99。该方法检测空白限为0.03 IU/mL;两个不同浓度(1.23和3.12 IU/mL)血清样本检测回收率分别为89.6%和92.6%;两个不同浓度(5和2.5 IU/mL)自制质控品分析内和分析间变异系数分别为13.9%、14.3%和11.5%、13.2%。建立的ELISA方法检测结果与RFFIT法检测结果相关性良好,R~2=0.712。结论建立的人狂犬病病毒抗体ELISA定量检测方法充实了人用狂犬病疫苗免疫效果的检测技术,有望用于疫苗免疫效果的初步评估。

    2021年03期 v.34 330-334页 [查看摘要][在线阅读][下载 256K]
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  • 宿主细胞残留DNA片段大小分布检测方法的建立及验证

    闫璐瑶;张家友;张青梅;张哲罡;夏志武;邱冉;刘京;杨晓明;

    目的建立宿主细胞残留DNA片段大小分布的检测方法,并进行验证,为监控疫苗生产过程提供依据。方法基于高灵敏的微型化芯片毛细管电泳法,用MDCK细胞基因组DNA作为阳性对照品,建立检测方法,并验证方法的检测范围、准确性及精密度。利用建立的方法分析MDCK细胞基质流感疫苗生产过程中间品(H1N1型流感病毒收获液、病毒微滤液、核酸酶处理收获液、浓缩病毒液、层析病毒液)残留DNA片段大小分布。结果 MDCK细胞基因组浓度为933.06 ng/μL,A_(260/280)值为2.079,可作为阳性对照。该方法检测范围为35~10 380 bp,精密度检测CV均小于10%。用该方法检测H1N1型流感病毒疫苗中间品,结果显示宿主细胞基因组大片段被核酸酶处理成小片段,层析病毒液300 bp以下片段占总外源DNA的84%。结论建立了一种测定MDCK细胞基质流感疫苗宿主细胞残留DNA片段大小分布的检测方法,该方法精密度良好,有望用于连续细胞系衍生生物制品的原液检定和质量控制。

    2021年03期 v.34 335-339+348页 [查看摘要][在线阅读][下载 680K]
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  • α-唾液淀粉酶胶体金免疫渗滤法的建立及其在中药酶学作用研究中的应用

    金旻逸;丁越;陈静雯;兰金帅;李俊松;钟高仁;张彤;

    目的建立α-唾液淀粉酶(salivary alpha-amylase,sAA)胶体金免疫渗滤法,制备胶体金免疫渗滤试纸,并将该试纸用于中药白术及葛根的酶学作用研究。方法采用胶体金标记技术,筛选最佳标记pH值和抗体标记量,制备金标抗体复合物,再利用纸基免疫渗滤技术,设计单因素试验,优化包被液种类、包被条件、封闭液种类、封闭条件、洗涤液种类、抗原抗体最佳工作浓度、包被抗原与金标抗体反应条件、待测样品与金标抗体反应条件共8个影响因素,建立胶体金免疫渗滤检测法,同时对免疫试纸的灵敏度和初步稳定性进行验证,并利用该试纸检测不同浓度中药白术和葛根提取液对sAA与其抗体特异性结合活性的促进或抑制作用。结果胶体金标记抗体的最佳pH值为8.5,最佳抗体稀释比例为1∶125,在此条件下制备的金标抗体复合物稳定性良好,活性效价为1∶384。sAA胶体金免疫渗滤法的最适反应条件为:以含8%甲醇的PBS缓冲液(0.01 mol/L,pH 7.4)为包被液稀释sAA至10μg/mL,37℃包被15 min;以含2%BSA的PBS缓冲液(0.01 mol/L,pH 7.4)为封闭液,37℃封闭15 min;以含0.4%Tween-20的PBS缓冲液(0.01 mol/L,pH 7.4)为洗涤液对NC膜进行洗涤;待测样品与稀释比例为1∶1的金标抗体于37℃下提前反应15 min,加入NC膜后25℃条件下再反应20 min,洗涤后根据斑点显色情况判断实验结果。制备的胶体金免疫渗滤试纸灵敏度为5μg/mL,稳定性良好。中药酶学作用研究结果显示,白术可促进sAA与其抗体的特异性结合,而葛根具有抑制作用,且两者作用程度与中药提取液的浓度呈正相关。结论建立的sAA胶体金免疫渗滤法操作简便、快速,成本低,灵敏度和稳定性良好,可为sAA的快速检测提供新方法。

    2021年03期 v.34 340-348页 [查看摘要][在线阅读][下载 3542K]
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  • 复合酶法制备紫花芸豆抗氧化肽

    李雪;左锋;王长远;

    目的采用复合酶法制备紫花芸豆蛋白抗氧化肽。方法以水解度为指标选定碱性蛋白酶和中性蛋白酶为复合酶组合,在单因素试验基础上,进行复合酶水解紫花芸豆蛋白的响应面优化。结果最适水解条件为:温度55℃,pH 10,酶添加比例为1∶2(碱性蛋白酶∶中性蛋白酶),酶添加量5 000 u/mL,在此条件下,紫花芸豆蛋白的水解度为42.2%,与理论值相差较小。对水解后的芸豆蛋白肽进行抗氧化性测定,羟自由基和DPPH清除率分别达37.5%和40.1%,具有较强的抗氧化性。结论复合酶法制备紫花芸豆蛋白抗氧化肽用时短、效率较高,为紫花芸豆抗氧化肽的制备提供参考,也为紫花芸豆蛋白肽在天然抗氧化剂开发方面提供技术支持。

    2021年03期 v.34 349-356页 [查看摘要][在线阅读][下载 722K]
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综述

  • 柯萨奇病毒A16型疫苗的研究进展

    冯骁;李琦涵;

    手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒引起的传染病,柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus type A 16,CA16)和肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引发HFMD流行和暴发的主要病原菌。HFMD在5岁以下的儿童中可引起口腔疼痛、厌食、低热及手、脚和口腔溃疡,大部分儿童约1周痊愈,少数儿童可出现心肌炎、肺水肿、无菌脑膜炎等并发症,甚至导致死亡。疫苗接种是预防HFMD的主要途径,目前,EV71灭活疫苗已上市,但CA16疫苗研究进展仍较缓慢。因此,本文对CA16的全病毒灭活疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、DNA疫苗、类病毒颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗的研究进展作一综述。

    2021年03期 v.34 357-361页 [查看摘要][在线阅读][下载 163K]
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  • 人用疫苗生产用细胞基质安全性评估现状

    王美皓;刘文凯;乔自林;王家敏;

    疫苗接种是保护机体免受疫病侵害的一种有效的防御机制。随着科技的进步以及疫苗需求量的日益上升,疫苗生产商通过不断探索,在疫苗生产工艺的上游融合细胞培养技术,利用细胞基质对病毒性疫苗进行大规模的生产。面对监管部门颁布的严格的安全生产条令,如何对细胞基质进行安全性评估已经成为疫苗生产商必须考虑的重点。本文将着重介绍疫苗生产用细胞基质的相关安全性问题,旨在为生产新型病毒性疫苗提供细胞基质安全性方面的相关参考。

    2021年03期 v.34 362-366+371页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K]
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  • 百日咳外膜囊泡的研究进展及其作为新型替代疫苗的可能性

    刘兆禄;潘超;朱力;王恒樑;

    百日咳由百日咳博德特菌感染引起,是一种具有高度传染性的呼吸道疾病,婴儿和儿童是发病的高危人群。目前,全球百日咳疫苗有全细胞疫苗(whole-cell pertussis vaccine,wP)和无细胞疫苗(acellular pertussis vaccine,aP)两种,虽然接种覆盖率较高,但控制效果不佳,百日咳仍是儿童死亡的主要病因之一。百日咳博德特菌的外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)是该菌表面分泌的一种具有球形双层膜、天然非复制性的囊泡结构,可诱导出较强的免疫应答,产生长期保护作用。因此,本文对百日咳OMVs的研究进展及其作为新型替代疫苗的可能性作一综述。

    2021年03期 v.34 367-371页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K]
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  • 口蹄疫病毒病毒样颗粒疫苗的研究进展

    李国秀;丁耀忠;刘磊;张杰;

    口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的一种烈性传染病,主要感染牛、猪、绵羊、山羊等偶蹄动物,我国将其列为一类传染病,注射疫苗是控制该疾病的有效措施。病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的形态结构与天然病毒高度相似,且不含病毒核酸,具有与完整病毒粒子相似的免疫原性,可有效诱导机体产生免疫应答,许多抗原可通过基因工程的方法在VLPs表面展示。FMDV的衣壳蛋白可自组装成VLPs,是一种理想的疫苗。本文主要对FMDV VLPs及其表达系统的研究进展作一综述。

    2021年03期 v.34 372-375页 [查看摘要][在线阅读][下载 144K]
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