中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 短期异常低温对重组乙型肝炎疫苗效力相关因素的影响

    方鑫;邱少辉;童海青;屈旭成;曹崴;饶洪冲;朱征宇;何鹏;胡忠玉;

    目的模拟重组乙型肝炎(简称乙肝)疫苗在冷藏存储过程中发生的异常低温情况,探讨短期异常低温储存对乙肝疫苗效力相关因素的影响。方法选取3个不同表达系统(酿酒酵母、汉逊酵母、CHO细胞)来源的乙肝疫苗,分别于0、-7、-20℃储存1或7 d,检测疫苗的吸附完全性、上清中铝离子含量、效价和体外相对效力,比较乙肝疫苗经短期异常低温储存后与2~8℃正常储存条件下的差异。结果经短期异常低温储存后,疫苗的吸附完全性、疫苗上清中铝离子含量未发生变化;3种乙肝疫苗的ED50在0. 16~0. 68μg之间波动;汉逊酵母乙肝疫苗体外相对效力的变化幅度不超过10%,酿酒酵母乙肝疫苗在-20℃冻存7 d后相对效力较2~8℃储存下降21. 8%。结论短期异常低温储存后,乙肝疫苗仍能保持较好的吸附完全性,非胶体状态铝含量未发生变化,疫苗效价和体外相对效力在部分异常储存条件下出现下降,但仍符合质量标准要求。

    2020年04期 v.33 361-365页 [查看摘要][在线阅读][下载 704K]
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  • 脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株C抗原和D抗原的分离及特性分析

    刘硕;陈书辰;喻刚;曾智坤;郝鹏亮;郭长福;王继麟;陈晓琦;

    目的分离脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株(sPVⅢ)C抗原和D抗原,并分析其部分特性。方法采用CsCl密度梯度离心法分离sPVⅢ的C抗原和D抗原,电镜观察病毒形态;SDS-PAGE检测病毒结构蛋白组成;微量BCA法检测蛋白浓度,计算每种抗原所占比例;细胞病变法检测病毒滴度。同时检测上样浓度及超离次数对C抗原纯度的影响。结果 sPVⅢC抗原和D抗原在透射电镜下均呈球形,C抗原病毒颗粒密度较小,外壳大多较为松散,D抗原病毒颗粒密度较大,结构更稳固;C抗原由VP0、VP1、VP3蛋白组成,D抗原由VP1、VP2、VP3和VP4蛋白组成;C抗原和D抗原分别约占总蛋白含量的10%和90%,部分C抗原在分离前及分离过程中易产生聚集;D抗原的病毒滴度高于C抗原。降低上样浓度及进行二次超离可提高C抗原纯度。结论采用CsCl密度梯度离心法成功分离了sPVⅢ的C抗原和D抗原,C抗原滴度远低于D抗原,且部分易产生聚集,较难达到较高纯度。

    2020年04期 v.33 366-370+377页 [查看摘要][在线阅读][下载 1734K]
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基础研究

  • 糖原合成酶激酶-3β介导低氧诱导因子-1α抗心肌缺血/再灌注损伤的作用

    张妞妞;曾先燕;王文香;吉晔楠;贺忠梅;

    目的通过稳定低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达,探讨其是否通过糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤。方法将雄性SD大鼠随机分为5组:假手术组(Sham组)、心肌缺血/再灌组(I/R组)、HIF-1α稳定剂二甲氧乙二酰甘氨酸(dimethyloxalyl glycine,DMOG)+心肌缺血/再灌注组(DMOG+I/R组)、HIF-1α抑制剂YC-1+I/R组(YC-1+I/R组)、DMOG+GSK-3β抑制剂SB216763+I/R组(DMOG+SB216763+I/R组)。各组进行相应处理后,处死大鼠并采集样本,Western blot法检测心肌组织中HIF-1α、总GSK-3β、p-GSK-3β(Ser9)、UCP3蛋白表达量;Real-time PCR法检测心肌组织中VEGF、HO-1、Bcl2基因mRNA转录水平;HE染色法检测心肌损伤情况;免疫组化法检测心肌细胞炎性浸润情况;TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡情况。结果与I/R组相比,DMOG预处理组可上调I/R大鼠心肌组织中HIF-1α蛋白及其下游因子VEGF、HO-1、Bcl2 mRNA表达水平,并引起线粒体内膜UCP3蛋白及mRNA表达水平升高,同时明显上调p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达,并减轻心肌损伤、炎性细胞浸润及降低心肌细胞凋亡率(P <0. 05);与DMOG预处理组相比,给予GSK-3β抑制剂SB216763后,HIF-1α的心肌保护效应明显下降(P <0. 05)。结论 HIF-1α可减轻心肌缺血/再灌注损伤,其心脏保护作用应与GSK-3β的介导有关。

    2020年04期 v.33 371-377页 [查看摘要][在线阅读][下载 1446K]
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  • MDCK细胞库的建立、检定及其生物学特性

    郭骐源;郭占龙;贾玉强;李可新;李爽;徐军;席莉;赵大鹏;吴业红;姚为民;

    目的建立MDCK细胞的主细胞库及工作细胞库,并进行检定,同时评价其生物学特性。方法从欧洲细胞保藏中心(European Collection of Authenticated Cell Culture,ECACC)引进1株MDCK细胞,经传代扩大培养后,分别建立主库及工作细胞库。按照《中国药典》三部(2015版)规定的方法对细胞库进行细胞活力、细胞形态、无菌、支原体及细胞内外源病毒因子检查,并对细胞生长状况、传代稳定性、流感病毒敏感性进行检测。结果建立的MDCK细胞主种子库及工作种子库细胞形态呈不规则的上皮样细胞状,生长状态良好,细胞活率分别为96. 0%和95. 5%,无菌、支原体及细胞内外源病毒因子检查结果均合格。MDCK细胞生长曲线均呈S型,培养48~96 h进入对数生长期,随后进入平台期。连续传10代48 h细胞活率在93. 0%~95. 5%之间,较稳定。MDCK细胞对流感病毒较敏感,对B型流感病毒的敏感性高于A型流感病毒。结论建立的主细胞库及工作细胞库各项检测结果均符合《中国药典》规定,具有良好的传代稳定性及流感病毒敏感性。

    2020年04期 v.33 378-381页 [查看摘要][在线阅读][下载 905K]
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  • 小鼠Sca-1~+干细胞对心肌梗死模型小鼠的疗效及其基因调控机制

    马秀霞;李端端;申晶;陈思宇;李燕楠;颉丽英;高尔和;左琳;

    目的探讨小鼠干细胞抗原-1阳性(stem cell antigen-1-positive,Sca-1+)干细胞(stem cells,SCs)对心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型小鼠的疗效及其基因调控机制。方法采用免疫磁珠分选法急性分离2日龄及3、6、9、12月龄小鼠心脏Sca-1+SCs;通过结扎8周龄小鼠心脏冠状动脉左主降支,建立小鼠急性MI模型,于心梗边缘区分别注射PBS和Sca-1+SCs悬液。术后行超声心动图测定心功能,Masson三色染色、心重/体重比(HW/BW)用于评价各组Sca-1+SCs对心脏结构的影响。将各组小鼠心脏Sca-1+SCs进行全基因组测序,通过STEM软件对转录组基因表达水平进行聚类及GO富集分析,筛选出乳鼠和成年鼠差异表达的基因类型,并采用qRT-PCR法进一步验证目的基因的表达情况。结果 MI术后,与PBS组比较,乳鼠心脏Sca-1+SCs治疗组小鼠左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)和左室短轴缩短率(left ventricular fraction shortening,LVFS)均明显升高(P <0. 05),HW/BW明显降低(P <0. 05),左室舒张末内径(left ventricular diastolic internal diameter,LVIDd)明显减小(P <0. 05);与成年鼠比较,乳鼠心脏Sca-1+SCs移植治疗可降低心肌梗死面积,缓解心腔扩大。在乳鼠心脏Sca-1+SCs中高表达,而成年鼠表达降低的基因共185个,regulation of developmental process条目上富集基因有38个,其中肌球蛋白重链6(myosin heavy chain6 cardiac muscle alpha,Myh6)、胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,Igf2)、成骨细胞特异性因子(periostin,Postn)、神经元再生相关蛋白(neuronal regeneration related protein,Nrep)基因在乳鼠心脏Sca-1+SCs中具有较高转录水平。与乳鼠比较,成年小鼠心脏Sca-1+SCs中Myh6、Igf2、Postn、Nrep基因m RNA的表达水平均显著下调(P <0. 05)。结论乳鼠心脏Sca-1+SCs移植对MI的疗效优于成年小鼠,其原因可能是乳鼠心脏Sca-1+SCs中Myh6、Igf2、Postn、Nrep等基因的表达水平高于成年小鼠。

    2020年04期 v.33 382-389页 [查看摘要][在线阅读][下载 1959K]
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  • 重组人淋巴细胞活化基因-3蛋白胞外段的真核表达及鉴定

    熊镇越;张坤明;潘勇兵;李策生;

    目的真核表达重组人淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3)蛋白胞外段,并进行鉴定。方法用植物血球凝集素(phytohaemagg lutinin,PHA)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测Jurkat细胞中LAG-3蛋白的表达;提取Jurkat细胞总mRNA,RT-PCR法扩增人LAG-3蛋白胞外段基因片段,同时在蛋白C-末端引入His标签,将其克隆入载体pcDNA3. 1+,构建重组质粒,转染Expi293F真核细胞,当细胞活率低于50%时收获细胞上清,经镍柱亲合层析纯化。纯化产物进行4%~20%SDS-PAGE、HPLC及Western blot分析,BCA法测定浓度。结果经菌液PCR、双酶切及测序鉴定,表明质粒构建正确。重组表达蛋白的相对分子质量约60 000,纯化后纯度达95%以上,与鼠抗LAG-3单克隆抗体可发生特异性结合,浓度为2. 4 mg/mL。结论成功构建了重组真核表达质粒LAG-3/pcDNA3. 1+,并于Expi293F细胞中表达,纯化获得了纯度较高的LAG-3蛋白,为后期LAG-3蛋白的相关研究及其单抗的制备奠定了基础。

    2020年04期 v.33 390-394页 [查看摘要][在线阅读][下载 1308K]
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  • 人HMG盒转录因子1基因shRNA质粒的构建及其功能鉴定

    汪军梅;裴晋红;黄燕;栗学清;张晓伟;

    目的构建人HMG盒转录因子1(HMG-box transcription factor 1,HBP1)基因shRNA质粒,并探讨该基因的相关功能。方法合成HBP1基因干扰序列,将其插入至慢病毒表达载体pLL3. 7中,构建重组质粒pLL3. 7-shHBP1,经TurboFectTM脂质体介导转染HEK293T细胞,收集含病毒的培养基,分别感染HeLa及HepG2细胞,经puromycin持续筛选,获得稳定转染细胞株。Real-time PCR及Western blot法分别检测HeLa及HepG2细胞中HBP1基因m RNA转录及蛋白表达水平,MTT及流式细胞术分别检测HBP1基因抑制对HeLa细胞增殖及凋亡的影响。结果经测序鉴定,重组质粒pLL3. 7-shHBP1构建正确。HeLa及HepG2细胞中HBP1基因mRNA转录及蛋白表达水平均明显下调(P <0. 01);HBP1基因抑制后,HeLa细胞的增殖速度明显加快(P <0. 01),细胞凋亡明显减少(P <0. 01)。结论成功构建了HBP1基因shRNA质粒,抑制HBP1表达后可使HeLa细胞的增殖速度加快,细胞凋亡减少。本实验为HBP1基因相关功能的进一步研究奠定了基础。

    2020年04期 v.33 395-398页 [查看摘要][在线阅读][下载 1142K]
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  • 用于人凝血因子Ⅷ生产的DEAE 650M层析凝胶使用寿命的评价

    吴佳君;谢一舟;范林;罗超;黄琰;牟蕾;余伟;

    目的评价用于人凝血因子Ⅷ生产的DEAE 650M层析凝胶的使用寿命。方法在人凝血因子Ⅷ生产用DEAE 650M凝胶层析系统基础上,将柱体积缩小353倍,建立DEAE 650M凝胶层析柱缩小模型。采用该模型连续层析10批次人凝血因子Ⅷ样品,每次层析前均用1 mol/mL的NaCl上样,检测理论塔板数和对称系数,以确认柱效;同时分析样品比活性、层析收率、层析纯化倍数、层析上样比例。结果 DEAE 650M凝胶层析缩小模型每次层析人凝血因子Ⅷ样品前,理论塔板数均> 2 000,对称系数均在1. 0~1. 4范围内;纯化后样品比活性均高于20 IU/mg,层析收率均高于40%,层析纯化倍数均大于20倍,层析上样比例均大于25 IU/mL。结论 DEAE 650M凝胶用于人凝血因子Ⅷ生产至少可循环使用10次。

    2020年04期 v.33 399-401页 [查看摘要][在线阅读][下载 872K]
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治疗制剂

  • 贝伐珠单抗生物类似药临床前药代动力学的相似性评价

    王变珍;文勇;卢剑锋;袁云霞;陈方;董立厚;欧伦;徐静芝;李弯弯;吕晓龙;董菁;宋海峰;

    目的评价生物类似药重组抗人血管内皮生长因子人源化单克隆抗体(recombinant humanized anti vascular endothelial growth factor monoclonal antibody,rhuMab VEGF)ASK-B1202(简称T)及原研药贝伐珠单抗(Avastin,简称R)在食蟹猴体内药代动力学(pharmacokinetic,PK)的相似性。方法选取16只食蟹猴,随机分为2组:供试品(T)及参比品(R)组,每组8只,雌雄各半,分别给药5 mg/kg,于给药前(0 min)及给药后15 min、30 min、1 h、8 h、2 d、4 d、7 d、10 d、14 d、18 d、21 d、28 d和35 d采集血样,ELISA法检测T及R的血药浓度,并进行方法验证。应用WinNonlin软件生物等效模块计算进行T及R的PK参数的相似性评估。结果 T与R标准曲线比较,差异无统计学意义(P>0. 05),呈现一致的反应性;方法的灵敏度为39. 1 ng/mL,定量范围为39. 1~5 000 ng/mL;方法的精密度、准确度、稀释线性、选择性、平行性、稳定性、重现性良好,特异性强。T及R在食蟹猴体内主要PK统计参数从0至t时间曲线下面积[AUC(0-t)]及达峰浓度(Cmax)差异无统计学意义(P均> 0. 05);AUC(0-t)及Cmax90%置信区间分别为83. 86%~103. 53%和84. 22%~124. 28%。结论 T及R在食蟹猴体内PK符合生物等效性(bioequivalence,BE)的判定标准,呈现生物相似性。

    2020年04期 v.33 402-409页 [查看摘要][在线阅读][下载 1202K]
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  • 卡式瓶多剂量重组人干扰素α2b注射液模拟使用的稳定性

    王莹;俞露;杨红育;孙瑞欣;刘玉林;王江林;富锐丽;刘莹;刘琳琳;刘景会;邹勇;

    目的评价卡式瓶多剂量包装重组人干扰素α2b注射液使用过程中的稳定性。方法将3批重组人干扰素α2b注射液装入配套使用的多剂量可重复使用注射笔中,安装胰岛素针头,每天模拟注射过程后分别存放于2~8、(25±2)和(37±2)℃条件下,并分别于0、7、21、35 d,0、3、5、7 d,0、2、4 d取样,依据《中国药典》四部(2015版)和《重组人干扰素α2b注射液制造和检定规程(暂定)》规定,进行外观、可见异物、pH、生物学活性、渗透压、细菌内毒素、间甲酚、无菌检测。结果 3批重组人干扰素α2b注射液模拟使用过程中,于2~8、(25±2)和(37±2)℃分别放置35、7和4 d,外观、可见异物、pH、生物学活性、渗透压、细菌内毒素、间甲酚、无菌检测结果均符合本品相关质量标准规定,且各项检测指标的检测结果均与初始检测结果接近,几乎无变化。结论本品模拟使用过程中即使破坏包装,于2~8、(25±2)和(37±2)℃条件下仍可分别稳定存放至少35、7和4 d。本研究为本品使用过程中的存放条件及相应存放条件下的存放时限确定提供了数据支持。

    2020年04期 v.33 410-414+419页 [查看摘要][在线阅读][下载 1106K]
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  • 小鼠多能干细胞对小鼠肝脏电离辐射损伤的作用

    刘芳;张引红;高渊涛;李宵;王雅丽;王菲;田野;王春芳;

    目的探讨小鼠多能干细胞(mouse pluripotent stem cells,miPS)对小鼠肝脏电离辐射损伤的作用。方法采用医用电子直线加速器进行单次全身性照射(电子辐射线源为6 MeV,照射总剂量为8 Gy,照射剂量率为1. 0 Gy/min)。辐射组于辐射后12和24 h,经小鼠尾静脉注射生理盐水(200μL/只);治疗组于照射后12和24 h,经尾静脉注射mi PS细胞悬浮液[3×106个/(200μL·只)];对照组小鼠不进行辐射,仅注射生理盐水(200μL/只)。末次注射后1、3、7、14 d,记录小鼠体重、计算肝脏指数,并检测小鼠肝脏中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;末次注射后14 d,观察小鼠状态,并采用组织病理学方法观察肝脏病理形态学变化。结果与对照组比较,辐射组小鼠精神状态和食欲状况均不佳,体重显著降低(P <0. 05),肝脏指数差异无统计学意义(P> 0. 05),肝脏中SOD活性显著降低(P <0. 01),MDA水平显著升高(P <0. 05);与辐射组比较,治疗组小鼠体重明显升高(P <0. 05),肝脏指数差异无统计学意义(P> 0. 05),肝脏中SOD活性显著升高(P <0. 05),MDA水平显著降低(P <0. 01)。对照组小鼠肝脏组织无明显病变;辐射组小鼠肝细胞发生明显肿胀及肝细胞索紊乱等明显病理变化;治疗组小鼠肝细胞索排列整齐,肝细胞轻度肿胀,病理变化得到改善。结论 miPS可通过其增殖分化减少小鼠体内氧化应激产生的细胞凋亡,对电离辐射造成的小鼠肝脏损害有明显的修复作用。

    2020年04期 v.33 415-419页 [查看摘要][在线阅读][下载 1321K]
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诊断制剂

  • 卡介菌纯蛋白衍生物的稳定性评价

    白家峰;王俊;刘蓉;吴先勇;南方;王玉英;秦黎静;屈戈;

    目的评价卡介菌纯蛋白衍生物(purified protein derivative of BCG,BCG-PPD)的稳定性。方法将3批BCGPPD样品置2~8℃存放30个月,分别于第0、3、6、9、12、18、24、30个月进行物理外观检查、pH和效价测定,第0、12、18、24、30个月同时进行鉴别试验、无菌试验、装量差异、异常毒性及苯酚含量检测;于(25±2)℃条件下存放12个月,第0、1、2、3、6、9、12个月进行物理外观检查、pH和效价测定;于(37±2)℃条件下存放12周,在第0、1、2、3、4、8、12个月进行外观检查、pH和效价测定。结果 3批BCG-PPD于2~8℃存放不同时间样品的鉴别试验、物理外观、装量差异、无菌试验及异常毒性检测结果均合格,pH为7. 12~7. 25,苯酚含量为2. 48~2. 72 g/L,效价为0. 92~1. 13,均呈稳定状态。3批BCG-PPD样品于(25±2)和(37±2)℃条件下保存,物理外观检查均合格,pH分别为7. 12~7. 32和7. 11~7. 20,效价分别为0. 93~1. 06和0. 91~1. 02,均符合要求。结论 BCG-PPD具有良好的稳定性,可满足将其有效期延长至24个月的要求。

    2020年04期 v.33 420-422页 [查看摘要][在线阅读][下载 1017K]
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临床研究

  • 2018年湖南省祁阳县96例登革热病例临床及实验室特征分析

    冯石军;管娇琼;陈珺;饶清;孙强明;

    目的分析2018年湖南省祁阳县96例登革热病例的临床及实验室特征。方法回顾性分析2018年9月湖南省永州市祁阳县各医院收治的96例登革热住院病例的流行病学特征、临床特点及实验室检查结果。结果流行病学调查显示,96例中无输入性病例。临床特征为发热(94. 79%)、乏力(76. 04%)、全身酸痛(48. 96%)、腹泻(32. 29%)、关节痛(32. 29%)、腰痛(30. 21%)、呕吐(28. 13%)、头痛(17. 71%)、皮疹(14. 58%)、皮肤发红(13. 54%)、出血(13. 54%)、眼眶痛(3. 13%),另外伴有畏寒、肌肉疼痛,恶心、喉痛、流鼻涕、鼻塞、纳差、咳嗽、头晕、食欲下降、口苦等症状。白细胞下降和血小板计数减少病例分别占78. 13%和55. 21%;患者均有不同程度的肝功能(54. 17%)、肾功能(20. 83%)和心肌(36. 45%)损伤。96例病例血清分型结果提示,均为DENV-2感染。结论2018年湖南省永州市祁阳县登革热病例均为本土病例,流行型别为DENV-2。部分登革热患者除了表现出典型的临床症状,还有不同程度的肝功能、肾功能或心肌受损,提示患者一旦出现上述情况,医疗部门应高度重视,防控病情进一步恶化,防止重症或死亡发生。

    2020年04期 v.33 423-428+433页 [查看摘要][在线阅读][下载 3461K]
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  • 长春市2018~2019年婴幼儿口服轮状病毒减毒活疫苗不良反应分析

    陶育晖;王世申;胡芳芳;

    目的分析长春市2018~2019年婴幼儿口服轮状病毒减毒活疫苗(简称轮状病毒疫苗)不良反应。方法以2018年6月~2019年8月于长春市所有预防接种门诊口服轮状病毒疫苗的2~47月龄婴幼儿为研究对象,监测接种后30 min、3 d、30 d内发生的发热、乏力、烦躁、胃肠道反应及变态反应等情况,监测数据采用卡方检验进行统计分析。结果长春市2018年6月~2019年8月口服轮状病毒疫苗的2~47月龄婴幼儿共10 822人次,发生不良反应1 624例次,排在前5位不良反应依次为吐出疫苗、哭闹不止、发热、食欲下降及恶心呕吐,且未见变态反应等异常反应。月龄及疫苗复温情况是发生吐出疫苗的重要影响因素;月龄是发生哭闹不止的重要影响因素;性别、月龄及疫苗复温情况是发生发热重要影响因素;疫苗复温情况是发生食欲下降的重要影响因素。结论疫苗复温及降低接种年龄可缓解轮状病毒疫苗接种后的不良反应。

    2020年04期 v.33 429-433页 [查看摘要][在线阅读][下载 1177K]
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技术方法

  • 狂犬病病毒糖蛋白抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

    郭笑语;潘东;陈晓旭;韩丹丹;高一峰;沈艳杰;韩尚成;赵天罡;丁楠;张洁琼;袁若森;姜春来;

    目的建立可快速检测狂犬病病毒(rabies virus,RabV)糖蛋白抗原含量的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用。方法用抗RabV糖蛋白基因工程抗体建立双抗体夹心ELISA法,检测RabV糖蛋白抗原含量。对建立的方法进行特异性、线性、准确性、板内与板间精密性、灵敏度验证,对不同厂家(毒株分别为aG、PV、CTN、PM)生产的狂犬病疫苗与不同工艺阶段的狂犬病疫苗样品进行适用性检测。结果捕获抗体与酶标抗体最佳稀释度分别为1∶2 000和1∶4 000,最佳封闭剂为1. 5%BSA。该方法与其他人用疫苗和辅料成分无交叉反应;线性范围在0. 003 2~0. 103 1 IU/mL之间,R2> 0. 98;准确性验证的回收率在97. 0%~110. 1%之间;精密性验证的板内变异系数<8. 6%,板间变异系数<13. 9%;检测不同厂家的狂犬病疫苗和不同工艺阶段的疫苗样品呈良好的剂量依赖效应。结论建立了适用于人用狂犬病疫苗糖蛋白抗原含量检测的双抗体夹心ELISA方法,符合定量检测的需求,可用于aG、PV、CTN、PM等不同毒株生产的狂犬病疫苗检测;也可用于病毒收获液、浓缩液、灭活液及原液等不同工艺阶段样品检测。

    2020年04期 v.33 434-437+444页 [查看摘要][在线阅读][下载 1339K]
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  • O型口蹄疫病毒血清抗体竞争ELISA检测方法的建立及验证

    杨志元;白满元;张韵;闻晓波;孙世琪;郭慧琛;冉旭华;

    目的建立O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)血清抗体的竞争ELISA检测方法,并进行验证。方法采用O型FMDV病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)作为包被抗原,建立用于检测FMDV血清抗体的竞争ELISA方法。对方法的抗原包被浓度(0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7、0. 8、0. 9、1. 0μg/mL)、抗原包被温度及时间(4℃过夜、37℃1 h、37℃1.5 h、37℃2 h、37℃2. 5 h、37℃3 h)、血清稀释度(1∶2、1∶4、1∶8、1∶16稀释)、HRP-IgG稀释度(1∶10 000~1∶20 000稀释)、封闭液种类(不封闭、1%BSA封闭、2%BSA封闭、5%脱脂乳封闭)、封闭液作用时间(30、60、90、120 min)、血清与HRP-IgG作用时间(30、60、90、120、150 min)、底物TMB作用时间(10、15、20、25、30 min)进行优化。同时验证方法的交叉反应、特异性及敏感性、精密性。采用建立的方法及O型FMDV抗体液相阻断ELISA检测试剂盒分别检测未知血清背景的138份猪和牛血清,计算两者的符合率。结果方法最适检测条件为:抗原包被浓度0. 5μg/mL,抗原包被温度及时间为4℃过夜,血清稀释度为1∶4;HRP-IgG稀释度为1∶18 000;封闭液为1%BSA,封闭液作用时间为30 min;HRP-IgG与血清作用时间为30 min;底物作用时间为10 min。21份不同猪病的阳性血清中,除3份O型FMD阳性血清为阳性外,其他血清样品为阴性,该方法无交叉反应;敏感性为90. 4%,特异性为95. 7%;批内和批间精密性试验变异系数(CV)均<10%。该方法与口蹄疫O型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的符合率为97%。结论建立的方法具有良好的特异性及精密性,且操作简便,可用于O型FMDV血清抗体的检测。

    2020年04期 v.33 438-444页 [查看摘要][在线阅读][下载 1462K]
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  • 实验设计法优化高浓度静注人免疫球蛋白制剂的处方

    刘亚芳;李冠军;罗坚;张伦;张剑涛;梁雪爽;马小伟;张学成;

    目的通过实验设计法优化高浓度(10%)静注人免疫球蛋白(human immunoglobulin for intravenous injection,IVIG)的制剂处方。方法采用单因素试验(包括等电点、二级结构、分子大小分布,转变中点温度4个指标)确定IVIG(10%)的pH范围,同时经国外相关数据和产品质量指标选择IVIG的稳定剂甘氨酸和聚山梨酯80的浓度范围,再采用实验设计法优化IVIG的pH及稳定剂浓度。以转变中点温度为指标,通过单因素试验优化IVIG(10%)的离子强度。结果最佳IVIG(10%)制剂处方为聚山梨酯80:80 mg/L,pH:4. 5,甘氨酸:0. 25 mol/L。最适离子强度为0 mmol/L氯化钠。结论成功优化了IVIG(10%)的制剂处方,可确保制剂的稳定性,提高临床用药安全性。

    2020年04期 v.33 445-448+454页 [查看摘要][在线阅读][下载 1498K]
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综述

  • 内皮祖细胞在再生医学中的应用

    李欣;蒋如如;哈小琴;

    随着血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPC)研究的深入,EPC的分离、体外培养、鉴定及在血管相关性疾病(如缺血性疾病)和各种肿瘤发生发展中的作用及功能已成为新的研究热点。EPC具有分化功能,增殖能力极强,体外扩增培养速度快,主要存在于外周血、脐血、骨髓中,且容易获取,是干细胞移植疗法理想的种子细胞来源。目前,EPC在治疗心脑血管、肢体缺血性疾病等方面的研究十分活跃,并初步取得了肯定的成果。本文主要就EPC在再生医学中的细胞治疗及基因治疗上的应用作一综述。

    2020年04期 v.33 449-454页 [查看摘要][在线阅读][下载 1254K]
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  • 已上市人用预防疫苗佐剂的研究进展

    刘建东;张静飞;徐颖之;郑海发;

    疫苗免疫是预防各种传染病的最有效、最经济的方式。佐剂对于疫苗的研发具有十分重要的意义。目前已上市的疫苗佐剂包括铝盐佐剂、MF59、类病毒颗粒、AS04、AS03、AS01和CpG。本文对已上市人用预防疫苗佐剂的组成成分、作用机制、特点及安全性作一综述。

    2020年04期 v.33 455-460页 [查看摘要][在线阅读][下载 1306K]
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  • 菌影作为疫苗佐剂的潜力及其机制的研究进展

    赵丹;郑文浩;焦红梅;李国才;

    细菌菌影(bacterial ghosts,BGs)是革兰阴性菌的细菌空壳,含有天然的免疫刺激剂(如脂多糖、鞭毛蛋白等),是固有免疫和适应性免疫细胞的强效激活剂。体内外试验研究表明,BGs具有免疫佐剂效应,能够诱导多种细胞产生前炎症细胞因子,后者可招募T细胞和B细胞聚集淋巴结,进而激活一系列体液免疫、细胞免疫及黏膜免疫应答。本文总结了菌影作为疫苗佐剂的广泛应用及其诱导免疫应答的机制,以期为新型疫苗制剂的研制提供思路。

    2020年04期 v.33 461-464页 [查看摘要][在线阅读][下载 1267K]
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  • 流感疫苗新型佐剂的研究进展

    李宗霖;廖国阳;

    每年流感在全球范围内引起约50万的死亡病例和超过300万的重症病例,流感疫苗是预防控制流感暴发和流行的最经济、有效的方法。将佐剂应用至流感疫苗中,不但能有效降低抗原用量,减轻经济负担,而且良好的佐剂能显著提高机体体液免疫应答及细胞免疫应答。因此研究和开发流感疫苗佐剂具有重要意义,国内外的研究者均进行了深入和广泛的研究。本文对流感疫苗佐剂的应用现状及研究进展进行综述,旨在为开发新型佐剂提供参考。

    2020年04期 v.33 465-469页 [查看摘要][在线阅读][下载 1343K]
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  • 戊肝疫苗临床研究的新进展

    王婉如;高雪峰;杨军;蒋琳;

    戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)可分为4个基因型,基因1型和2型仅在人体中存在,基因3型和4型为人畜共患型。戊型肝炎是由感染HEV导致的急性传染病,主要通过粪-口途径传播,人体普遍易感,各年龄段人群均有可能感染发病,主要感染15~40岁人群,是全球重要的公共卫生问题之一。戊型肝炎暂无有效治疗方法,接种疫苗是预防控制戊型肝炎的有效途径。本文对3种戊型肝炎疫苗[葛兰素史克公司的重组戊肝疫苗、中国长春生物制品研究所有限责任公司研发的HEV P179和厦门万泰沧海生物技术公司的HEV 239(Hecolin~?)]的临床研究进展作一综述。

    2020年04期 v.33 470-475页 [查看摘要][在线阅读][下载 1353K]
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  • 肿瘤相关巨噬细胞与肿瘤干细胞相互作用对肿瘤化疗耐药性影响的研究进展

    张秀美;崔家骏;

    肿瘤细胞对化疗药物产生耐药性是肿瘤化疗治疗失败的主要原因。目前研究普遍认为,在肿瘤治疗过程中,肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)可与肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)相互作用促进化疗耐药性的产生,即CSC能刺激TAM释放细胞因子,从而降低化疗对CSC的作用。本文就近年来二者相互作用对肿瘤化疗耐药性影响的相关研究进展作一综述。

    2020年04期 v.33 476-480页 [查看摘要][在线阅读][下载 1319K]
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  • 反刍动物内源抗菌肽的应用及发展前景

    刘干;姜宁;张爱忠;

    抗菌肽(microbial peptides,AMPs)又称为抗微生物肽,是在外界因素的诱导作用下,在动物免疫防御系统中生成的一类具有免疫活性的阳离子多肽物质,可抑制细菌、真菌和病毒的生长繁殖,也是防御病原体细菌的首道屏障。反刍动物AMPs可分为防御素及内源性抗菌肽(Cathelicidins),其中Cathelicidins稳定性高,水溶性好,抗菌机理独特,具有广谱抗菌能力,可增强机体免疫力,且不易产生耐药性。本文就反刍动物AMPs的分类、作用机制、生产和转基因的应用及未来发展存在的问题作一综述。

    2020年04期 v.33 481-485页 [查看摘要][在线阅读][下载 215K]
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专题报道

  • 新型冠状病毒预防性疫苗非临床研究评价的考虑

    尹华静;王寅;吴爽;戴学栋;孙涛;尹茂山;李峥;王庆利;胡晓敏;

    <正>随着新型冠状病毒(简称新冠)肺炎疫情在全球多点暴发快速蔓延,世界公共卫生安全面临严峻挑战,为应对来势汹汹的疫情,国内外疫苗研发企业迅速启动了新冠疫苗研发。目前在研的新冠疫苗类型多样,包括病毒灭活疫苗、基因工程重组疫苗、病毒载体类疫苗、核酸类疫苗(DNA疫苗和m RNA疫苗)等。从新冠疫情的致死率和导致感染者病情的严重程度,以及目前疫情控制手段和疾病转归情况,推动疫苗研发迫在眉睫。

    2020年04期 v.33 486-488页 [查看摘要][在线阅读][下载 81K]
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