中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

基础研究

  • 浙江新分离狂犬病病毒街毒株与国内外疫苗株G基因的比较分析

    孟胜利;钱宝峰;章国平;周剑军;吴杰;严家新;徐葛林;

    目的对浙江新近分离的2株狂犬病病毒街毒株的G基因进行遗传学分析,并比较其与国内外使用的狂犬病疫苗株间的差异。方法以直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测伤人犬脑组织,乳鼠接种分离病毒,RT-PCR扩增G基因片段,直接测序后进行遗传学分析。结果在2份伤人犬脑组织(编号LH和ZJCA1)中均检出狂犬病病毒,与其他浙江街毒株相比,G基因核苷酸和氨基酸序列同源性均为98.7%~99.2%。与当前国内外使用的多种疫苗株相比,与CTN疫苗株同源性最高,G基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为79.5%~86.1%和86.8%~94.1%。结论浙江新分离的2株狂犬病病毒街毒株属于基因1型,与当前使用的多种疫苗株相比,与CTN疫苗株属于同一分支,二者的亲缘关系最近。

    2009年09期 v.22 841-844页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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  • 脑红蛋白在内毒素脑损伤过程中的表达上调

    刘超;孙善全;余剑波;徐瑲;杨美;张跃;李京;

    目的探讨内毒素脑损伤模型大鼠的额叶皮质、海马组织、脑脊液(CSF)和血浆中脑红蛋白(NGB)的表达变化及其意义。方法将SD大鼠随机分为内毒素干预组和对照组,内毒素干预组向大鼠第四脑室内注射内毒素0.1mg/kg,对照组注入等剂量的生理盐水。于注射后3、6、12、24、48和72h采血,分离血清,收集CSF,并处死大鼠,留取额叶皮质和海马组织,应用ELISA、Western blot检测NGB含量,免疫组织化学法检测NGB的表达,干燥法检测鼠脑含水量。结果注射6h后,内毒素干扰组鼠脑含水量明显高于对照组,48h达峰值;额叶皮质、海马组织、CSF和血浆中NGB含量显著高于对照组,48h达峰值。结论在内毒素所致脑损伤中,NGB表达上调,且与内毒素的注入时间相关,NGB表达上调是机体内源性神经保护机制之一。

    2009年09期 v.22 845-849页 [查看摘要][在线阅读][下载 343K]
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  • 结核病高危人群预防用无细胞耻垢分枝杆菌疫苗的研制

    陈保文;沈小兵;徐苗;苏城;王国治;

    目的研制结核病高危人群预防用无细胞耻垢分枝杆菌疫苗(MS疫苗)。方法耻垢分枝杆菌培养物经多次洗涤后,制备所需浓度的菌悬液,高压匀浆后,经高压灭菌、稀释、分装、冻干,制成MS疫苗。将结核杆菌感染的豚鼠随机分为A组(接种疫苗8.7μg/次)、B组(接种疫苗17.5μg/次)和C组(接种生理盐水),观察疫苗对结核杆菌感染豚鼠的保护作用。结果MS疫苗浓度确定为每支蛋白含量为17.5μg(0.25mg湿菌)。疫苗具有良好的安全性,且可有效抑制或杀死豚鼠体内的结核杆菌,减轻豚鼠各脏器的病变程度。结论已成功制备MS疫苗,其对结核杆菌感染动物有较好的预防效果,有望成为结核病高危人群预防用疫苗。

    2009年09期 v.22 850-852页 [查看摘要][在线阅读][下载 164K]
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  • siRNA介导NF-κB p65沉默联合5-Fu诱导胃癌细胞SGC7901凋亡

    李怡君;王立;

    目的运用siRNA抑制胃癌细胞株SGC7901中NF-κB p65基因的表达,探讨其对细胞增殖和凋亡的影响,并分析该基因对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药性的作用。方法将SGC7901细胞分为空白对照组、脂质体组、5-Fu组、siRNA组和联合组,除空白对照组外,各组分别给予相应的药物。Western blot法检测各组细胞NF-κBp65蛋白的表达;Annexin V-PI法检测细胞凋亡;MTT法检测各组细胞的增殖水平。结果NF-κBp65蛋白在空白对照组和脂质体组中高表达,在5-Fu组、siRNA组和联合组中低表达,其中以联合组表达量最低;各组细胞早期凋亡率分别为1.40%±0.20%、2.36%±0.58%、6.68%±0.34%、6.60%±0.64%和21.62%±1.12%,其中以联合组最高;细胞的增殖活性随着siRNA浓度的增加和作用时间的延长而下降。结论siRNA能有效抑制NF-κBp65基因的表达,从而抑制SGC7901细胞增殖,促进其凋亡,并增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。

    2009年09期 v.22 853-856页 [查看摘要][在线阅读][下载 251K]
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  • 猪卵透明带3α重组腺病毒的构建及纯化

    陈敬;潘善培;熊亚明;黄丹;关艺青;

    目的构建猪卵透明带3α(pZP3α)重组腺病毒,并包装与纯化病毒,为研究猪ZP3α重组腺病毒避孕疫苗奠定基础。方法将pZP3α基因克隆至穿梭质粒pShuttle,重组穿梭质粒pSshuttle-pZP3α再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-5共转化大肠杆菌BJ5183,筛选重组腺病毒质粒pAd-pZP3α,脂质体法转染HEK293A细胞,包装并扩增病毒至第4代。收集重组病毒颗粒,经两轮氯化铯密度梯度离心纯化,紫外吸收法测定总病毒颗粒数(VP),并计算病毒的颗粒性滴度,空斑形成试验测定病毒的感染性滴度。以MOI为10的病毒剂量感染HeLa细胞,PCR鉴定插入病毒的目的基因,斑点免疫印迹法鉴定目的蛋白的表达。结果pZP3α基因成功插入病毒基因组,pZP3α蛋白能在病毒感染的HeLa细胞中正常表达。病毒的颗粒性滴度约为1.3×1011VP/ml,感染性滴度约为3×109PFU/ml。结论已成功构建猪ZP3α重组腺病毒质粒pAd-pZP3α,包装并纯化了重组pZP3α腺病毒颗粒。

    2009年09期 v.22 857-860页 [查看摘要][在线阅读][下载 201K]
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  • 抑癌基因WWOX对Lewis肺癌细胞c-jun蛋白表达及其转录活性的影响

    杨巍;王晓明;

    目的研究抑癌基因WWOX对Lewis肺癌细胞c-jun蛋白表达及其转录活性的影响,探讨WWOX基因的抑癌机制。方法采用脂质体转染法将WWOX基因重组真核表达质粒转染Lewis肺癌细胞,RT-PCR和Western blot法检测WWOX基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平;免疫组化法检测WWOX基因转染后Lewis细胞中c-jun蛋白的表达水平;半定量RT-PCR法检测c-jun调控的4种肿瘤相关基因p21、cyclinD1、FasL及VEGF mRNA的转录水平。结果重组真核表达质粒pcDNA4.0/Myc-His-WWOX转染Lewis细胞后,WWOX基因在mRNA和蛋白水平上均得到表达;与未转染细胞和空载体转染细胞相比,WWOX基因转染细胞胞浆中c-jun蛋白的表达量升高,而细胞核中c-jun蛋白的表达量未见明显差异;p21基因mRNA的转录水平升高,cyclinD1、FasL和VEGF基因mRNA的转录水平降低。结论WWOX基因可在Lewis细胞中表达,其转染Lewis肺癌细胞后,不直接调控c-jun蛋白的表达量,但可影响其转录活性。

    2009年09期 v.22 861-864页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K]
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  • 乌斯他丁和环磷酰胺对乳腺癌细胞增殖和侵袭及MMP-9表达的影响

    陈建生;孙治君;于涛;

    目的观察乌斯他丁(UTI)和环磷酰胺(CTX)对体外培养的乳腺癌细胞MCF-7(雌激素受体阳性)和乳腺癌细胞MDA-MB-231(雌激素受体阴性)增殖、侵袭及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法将体外培养的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231分别分为8组:对照组、UTI高、中、低剂量组、CTX组、CTX+UTI高、中、低剂量组,分别用相应药物处理。采用MTT法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR检测细胞MMP-9基因的表达;Boyden小室侵袭试验检测两种细胞的浸袭能力。结果UTI可明显抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G2/M期,并能使2株细胞中MMP-9基因的转录水平下降,细胞的增殖侵袭能力降低。CTX与UTI联合应用,其作用效果优于CTX单独使用。结论UTI能增强CTX诱导的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖抑制作用,二者具有协同效应。其机制可能与UTI降低细胞MMP-9基因的表达等有关。

    2009年09期 v.22 865-868+875页 [查