中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 单纯疱疹病毒Ⅰ型基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒减毒活疫苗Oka株感染小鼠的生物学特性比较

    柳蕾;徐兴丽;冯敏;何玉凤;王丽春;张莹;李琦涵;

    目的比较单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus typeⅠ,HSV-Ⅰ)基因突变株M3株与水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)减毒活疫苗Oka株感染BALB/c小鼠的生物学特性。方法用不同剂量(103、104、105 PFU/只)的HSV-ⅠM3株及疫苗剂量的VZV Oka株以不同方式(腹腔、肌肉、鼻腔、足垫)感染小鼠后,对小鼠的急性临床反应、体重变化、病毒增殖、组织病理损伤及病毒重激活等生物学特性进行比较。结果 HSV-ⅠM3及VZV Oka组小鼠均未见弓背、倒毛、单侧眼失明等急性临床症状,体重均呈逐渐上升趋势;器官组织中病毒拷贝数均处于较低水平,且两组差异无统计学意义(P> 0. 05);小鼠脑组织出现轻微局部炎症细胞浸润、出血、胶质小结或无异常,两组差异较小,脊髓组织均未出现明显异常;神经组织与Vero细胞共培养,均未观察到细胞病变(CPE)。结论 HSV-ⅠM3株与VZV Oka株感染小鼠后的生物学特征无明显差异。

    2019年03期 v.32 249-254页 [查看摘要][在线阅读][下载 515K]
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基础研究

  • 肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白在人支气管上皮细胞中对天然免疫相关信号分子的表达及T细胞免疫反应的影响

    李好;张莹;王丽春;姜莉;范胜涛;杨二霞;董承红;蒋国润;张小龙;廉亚茹;李琦涵;

    目的探讨肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A组16型(coxsakievirus A 16,CA16)VP1蛋白在人支气管上皮细胞中对天然免疫相关信号分子的表达及T细胞免疫反应的影响。方法经RT-PCR法扩增EV71和CA16的VP1序列,插入至载体pcDNA3. 1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1。分别转染人支气管上皮细胞16HBE,于转染后24、48和72 h收集样本,进行细胞内天然免疫相关信号分子表达的检测和刺激T细胞增殖的检测。结果经双酶切及测序鉴定,重组真核表达质粒pcDNA-EV71-VP1和pcDNA-CA16-VP1构建正确。与阴性对照组比较,EV71-VP1组IFNγ、OX40L、RANKL、TNF-α和IL-2的水平上调,而CA16-VP1组的上调幅度较小。EV71-VP1及CA16-VP1组16HBE细胞的胞内外提取物均可明显刺激分泌IFNγ的T细胞增殖(P <0. 05)。结论 EV71和CA16 VP1蛋白在人上皮细胞16HBE中表达后,可差异性诱导细胞中天然免疫信号分子表达及相似的非特异性刺激T细胞增殖能力。

    2019年03期 v.32 255-260+264页 [查看摘要][在线阅读][下载 382K]
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  • 诺如病毒GⅡ.13P蛋白的糖结合特征

    丛鑫;李涵博;王鹏飞;靳淼;李丹地;段招军;

    目的分析诺如病毒(norovirus,NoV)GⅡ.13毒株09N3145与组织血型抗原(histo-blood groups antigens,HBGAs)的结合特性。方法表达并纯化GⅡ.13 09N3145的P区蛋白,通过唾液及寡糖结合试验确定其与多种不同寡糖的结合特征,并以GⅡ.13/2010 P区蛋白与Lea寡糖复合物结构为模板,对GⅡ.13 09N3145 P蛋白进行同源模拟。结果 GⅡ.13 09N3145的P区蛋白可以与A、B、O+和非分泌型O-发生结合;可以与Lec双糖抗原和乳糖发生结合,而与A、B、H、Lewis型等寡糖无明显结合。分子模拟显示P蛋白使用一个可能的结合位点与半乳糖环结合。结论确定了GⅡ.13 09N3145 P蛋白与HBGAs的结合特征,为NoV宿主相互作用、人诺如病毒(human norovirus,huNoV)进化、流行以及天然抗病毒策略的提出奠定基础。

    2019年03期 v.32 261-264页 [查看摘要][在线阅读][下载 225K]
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  • 复合诱变选育新型高产细菌素植物乳杆菌

    安宇;王颖;佐兆杭;易华西;张东杰;

    目的从东北传统发酵肉制品中分离和再诱变选育广谱高产细菌素的植物乳酸菌,并对其进行鉴定。方法四轮复合诱变[微波诱变、亚硝基胍(nitroso-guanidin,NTG)诱变、常压室温等离子体(atmospheric room temperatureplasma,ARTP)诱变、紫外诱变突]具有降胆固醇能力的的植物乳杆菌M1株,获得还可产生广谱细菌素的植物乳杆菌。对其进行稳定性、微生物形态特征、生理生化特征及PCR鉴定。结果原始菌株经四轮复合诱变后获得1株高产细菌素菌株,该菌株兼具遗传稳定性、优良发酵特性和抑菌功效。鉴定该菌株为植物乳杆菌,命名为M1-UVs300,其分泌的细菌素命名为M1-UVs301;菌株保藏号为CGMCC No. 7972。结论通过四轮复合诱变获得的植物乳杆菌M1-UVs300抑菌谱较宽,且兼具降胆固醇和防腐的优良加工特性,工业化推广前景广泛。

    2019年03期 v.32 265-271+285页 [查看摘要][在线阅读][下载 410K]
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  • 人羊膜上皮细胞旁分泌作用及其对糖尿病大鼠创面血管再生的影响

    刘春香;付寅生;孙沛颖;芦慧颖;时玉峥;张怡;

    目的研究人羊膜上皮细胞(human amnioticepithelial cells,hAECs)旁分泌情况及其在糖尿病皮肤损伤大鼠模型中皮肤愈合及血管再生的作用。方法采用流式细胞术对hAECs表型进行分析;ELISA方法检测hAECs培养上清中旁分泌因子含量;划痕试验检测hAECs条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical veinendothelial cells,HUVECs)划痕的愈合作用,确定旁分泌作用对其迁移能力的影响;对糖尿病大鼠进行皮肤损伤造模,检测经h AECs治疗后,皮肤中CD34表达及Cyclin D1基因mRNA转录水平。结果 hAECs表面高表达间充质干细胞表面标志CD29、CD73、CD105及胚胎干细胞表面标志SSEA4,低表达间充质干细胞表面标志CD44、CD90及造血干细胞表面标志CD45、CD34、HLA-DR;可大量分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),72 h时表达量显著高于24和48 h及培养基对照组(P <0. 05);HUVECs划痕后24和48 h,两种浓度条件培养基组对细胞的愈合作用均较基础培养基对照组强,差异有统计学意义(P <0. 01),且两种浓度条件培养基组细胞迁移率差异无统计学意义(P> 0. 05);hAECs治疗后糖尿病大鼠皮肤中CD34表达及Cyclin D1基因mRNA转录水平均显著高于相同取材时间条件下的未治疗组,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 hAECs可大量分泌VEGF,并能够通过旁分泌作用促进体外HUVECs迁移、增殖及糖尿病大鼠皮肤血管再生。

    2019年03期 v.32 272-278页 [查看摘要][在线阅读][下载 588K]
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  • 牛病毒性腹泻病毒感染MDBK细胞后差异表达基因分析

    马莉莉;陈月季;翟军军;倪宏波;

    目的利用高通量测序技术(Illumina平台)对感染牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的MDBK细胞进行转录组学分析,并对筛选出的差异表达基因进行功能归类及相关分子机制研究。方法用BVDV感染MDBK细胞,分别在12、24、48和72 h收集细胞,提取总RNA进行转录组学分析。通过信号通路数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)及基因功能(Gene Ontology,GO)对差异基因进行功能的注释和富集分析。结果与未接毒的细胞相比,在0~12、13~24、25~48、49~72 h分别共有差异基因56、390、487、164个。感染病毒后12与24 h、24与48 h、48与72 h分别有9、55、270个相同差异基因;经KEGG和GO分析,在感染病毒24、48、72 h后,差异基因主要富集到P53、FoxO、NF-kB和PI3K-AKT信号通路等;筛选出感染后与免疫等相关的差异基因P21、FOXO1、GABARAPL1等,主要集中在细胞周期复制、凋亡和免疫等相关信号通路上。结论本研究通过对筛选出的差异表达基因初步归类分析,为后续BVDV感染MDBK细胞并在细胞内复制的相关分子机制研究奠定了基础。

    2019年03期 v.32 279-285页 [查看摘要][在线阅读][下载 415K]
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  • 重组人生长激素Fc融合蛋白工程细胞染色体核型分析

    张宇;俞露;郑全莉;刘涵;刘云南;刘玉林;郭胜苍;许佳慧;王宇;

    目的分析重组人生长激素Fc融合蛋白工程细胞(rhGH-CHO细胞)染色体核型。方法采用0. 1μg/m L秋水仙碱处理分裂中期的细胞,经固定、染色,制片观察,选取染色体形态及分散度较好的视野拍照。应用Image-ProPlus 6. 0(IPP)软件打开图片,利用手动测量工具(manual measurements)随机测量50个2n=22的CHO-k1和rhGH-CHO细胞中染色体长臂和短臂长度,计算各染色体的相对长度(各染色体与最长染色体长度的比值)及短臂/长臂的比值,并绘制染色体核型的B-Spline特征曲线。结果 rhGH-CHO和CHO-k1细胞的染色体数目均为22条,且染色体核型特征曲线一致。结论 rhGH-CHO细胞来源于CHO-k1细胞,且未受其他细胞污染。

    2019年03期 v.32 286-288页 [查看摘要][在线阅读][下载 177K]
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  • 不同来源奇异变形杆菌对小鼠致病力及其毒力基因携带情况的比较

    尹有勤;韩春华;崔一龙;石芸;霍晓伟;马德慧;

    目的比较通辽地区不同来源奇异变形杆菌对小鼠致病力及其毒力基因携带情况。方法取4株(SPM、GPM、BPM-1和BPM-2)不同来源的奇异变形杆菌,进行生化鉴定、药物敏感性测试及动物致病性试验,对4株菌株的8种毒力基因(ureC、zapA、mrpA、ucaA、rsbA、pmfA、atfA、atfC)进行PCR检测,对其16S r RNA基因序列进行同源性和系统进化树分析。结果 4株菌株均被鉴定为奇异变形杆菌;对4株病原菌均高度敏感的药物有丁胺卡那、美罗培南、头孢他啶、头孢噻肟、头孢吡肟、他巴克坦和氨曲南7种,均不敏感的药物有庆大霉素、亚胺培南、头孢唑啉、氨苄西林、克拉维酸、黏菌素、磺胺甲恶唑、氯霉素、环丙沙星和四环素10种;4株菌株的半数致死量(LD50)按BPM-2、BPM-1、SPM、GPM依次降低,鹅源的毒力最高;奇异变形杆菌具有不同的毒力基因谱,8种毒力基因在菌株SPM、GPM、BPM-2中均被检出,菌株BPM-2未检出ucaA基因。BPM-2和BPM-1处于同一分支,但分处于不同的末支;SPM和GPM分处于不同的小分支。结论不同来源的奇异变形杆菌对小鼠的致病力存在较小的差异,且对小鼠有致病力的基因表型与该毒力基因的分布可能存在一定的相关性。

    2019年03期 v.32 289-294页 [查看摘要][在线阅读][下载 291K]
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治疗制剂

  • 青蒿素对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制

    范聪丽;王华;张道玉;张胜;安星兰;李子义;

    目的探究青蒿素(artemisinin,ART)对乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7)增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法实验分为对照组(加入1μL/mL DMSO)和ART处理组(加入终浓度为300μmol/L的ART)。ART作用48 h后,采用平板克隆试验检测乳腺癌细胞与乳腺上皮细胞(MCF-10A)的克隆形成能力,免疫荧光染色法检测细胞增殖标记Ki-67蛋白的表达,流式细胞术分析3种细胞的凋亡变化,RT-qPCR检测乳腺癌细胞中DNMTs家族与抑癌基因FHIT、CDH1、PTEN等的表达变化,Western blot分析BAX、BCL-2、DNMT1和DNMT3A蛋白的表达水平,亚硫酸氢盐测序法分析FHIT和CDH1基因的甲基化水平。结果 ART显著抑制乳腺癌细胞的增殖,并诱导乳腺癌细胞的凋亡(P <0. 01),同时对正常人上皮细胞有明显的诱导凋亡作用(P <0. 01);ART抑制DNMT1的表达,促进DNMT3A的表达(P <0. 05);ART处理乳腺癌细胞后,抑癌基因FHIT和CDH1的甲基化水平降低,表达水平增加。结论 ART通过改变DNMT1和DNMT3A的表达,降低某些抑癌基因如FHIT、CDH1的甲基化水平,促进这些抑癌基因的表达,从而发挥抑制乳腺癌细胞增殖与诱导凋亡的作用。此外,ART用于乳腺癌治疗的安全性需进一步评估。

    2019年03期 v.32 295-302+310页 [查看摘要][在线阅读][下载 677K]
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诊断制剂

  • 艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的原核表达及其胶体金免疫层析检测方法的建立

    任永鑫;孙斌;徐广贤;

    目的原核表达艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH),并建立GDH胶体金免疫层析检测方法。方法以艰难梭菌(ATCC BAA-1382)全基因组为模板,PCR法扩增GDH基因,并克隆至载体pET-30a(+),将重组质粒转染至E. coli BL21(DE3),诱导表达重组GDH,并优化IPTG终浓度(0、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0 mmol/L)、诱导时间(0、2、4、6 h)及诱导温度(31、34、37℃),表达产物采用Ni-NTA purificationSystem进行纯化。用纯化蛋白免疫家兔,以获得的多克隆抗体作为金标抗体,制备胶体金试纸条,并验证其灵敏性、特异性、精密性及稳定性。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒p ET-30a-GDH构建正确。最适诱导表达条件为:于37℃,IPTG终浓度为0. 8 mmol/L诱导4 h。获得的免疫血清效价达1∶51 200,制备的胶体金试纸条灵敏性为60 ng/mL,与其他肠道菌无交叉反应,批内、批间结果无差异,且具有良好的稳定性。结论原核表达了重组GDH,成功建立了GDH胶体金试纸条检测方法,且灵敏性、特异性、精密性及稳定性均良好,具有临床应用价值。

    2019年03期 v.32 303-310页 [查看摘要][在线阅读][下载 561K]
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临床研究

  • 大连市二价脊髓灰质炎减毒活疫苗安全性分析

    杨月;韩一楠;孙博语;周令;

    目的分析二价脊髓灰质炎减毒活疫苗(bivalent oral live attenuated poliomyelitis vaccine,bOPV)、三价脊髓灰质炎减毒活疫苗(trivalent oral live attenuated poliomyelitis vaccine,t OPV)及脊髓灰质炎灭活疫苗(inactivated polio-virus vaccine,IPV)疑似预防接种异常反应(Adverse Events Following Immunization,AEFI)发生情况,评价bOPV安全性。方法收集大连市2009~2017年所有疫苗(包括第一类和第二类疫苗)的AEFI报告病例数和疫苗接种剂次,采用描述性流行病学方法进行统计分析。结果 bOPV发生AEFI 19例(男性8例,女性11例,男女发病比例为0. 73∶1),报告发生率为6. 88/10万,低于全部疫苗的平均报告发生率,高于t OPV,差异均有统计学意义(P <0. 05),与IPV-Salk相比,差异无统计学意义(P> 0. 05);11例发生在接种1 d内,7例发生在接种1 d后,1例发生在接种15 d后,其中一般反应18例,异常反应1例,发生严重异常反应的报告发生率为0. 36/10万,与全部疫苗和t OPV发生严重异常反应的报告发生率相比,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 b OPV的AEFI发生率高于t OPV,低于全部疫苗,疫苗有较高的安全性。

    2019年03期 v.32 311-314+318页 [查看摘要][在线阅读][下载 189K]
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  • 辽宁省扩大国家免疫规划前后流行性腮腺炎流行病学特征变化分析

    方兴;常琳;姚文清;

    目的分析辽宁省扩大国家免疫规划实施前后流行性腮腺炎流行病学特征变化趋势,评价麻腮风疫苗纳入国家免疫规划实施效果,为流行性腮腺炎的防控提出建议。方法采用流行病学方法,对扩大国家免疫规划实施前后(2005~2010和2011~2016年),辽宁省流行性腮腺炎流行病学特征进行分析比较。结果扩大国家免疫规划实施前后,流行性腮腺炎年平均发病率分别为24. 83/10万和18. 38/10万,差异有统计学意义(P <0. 05);2005~2016年每年各月份均有流行性腮腺炎病例报告,1、5、6和12月为高发月,扩大国家免疫规划实施前后,高发月病例数占比分别为45. 76%和44. 30%;全省有10个地级市(占71. 43%)扩大国家免疫规划实施后流行性腮腺炎年平均发病率较实施前有一定程度的下降;扩大国家免疫规划实施前后,发病前三位的职业均为学生、幼托儿童和散居儿童,占比分别为90. 08%和84. 63%,差异有统计学意义(P <0. 05);扩大国家免疫实施前后,15岁以下病例数占比分别为78. 25%和73. 30%,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论扩大国家免疫规划实施后,辽宁省流行性腮腺炎发病率下降显著,但持续下降的趋势不明显,且14岁以下儿童发病率仍维持在较高水平。建议对适龄儿童开展2剂次麻腮风疫苗接种,同时采取综合性措施,借消除麻疹的契机,进一步降低流行性腮腺炎发病率。

    2019年03期 v.32 315-318页 [查看摘要][在线阅读][下载 188K]
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技术方法

  • 巢湖蓝藻藻蓝蛋白纯化工艺的优化

    何涛;苏雨;张发宇;余金卫;武康;汪家权;

    目的优化巢湖蓝藻藻蓝蛋白的纯化工艺。方法将新鲜蓝藻藻泥经冻融破壁处理,获得藻蓝蛋白粗提液。采取两步盐析及Cellfine A-500阴离子交换层析结合法进行纯化,并以纯度和回收率为检测指标,对一步盐析摩尔浓度(0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 mol/L)及二步盐析摩尔浓度(1.6、1.8、2.0、2.2、2.4 mol/L)、阴离子交换层析缓冲液pH(6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)、进样浓度(0.418、0.726、1.044、1.288、2.090 mg/L)、洗脱速度(0.5、1、1.5、2、2.5、3.0 cm/min)及洗脱液盐梯度浓度[(0.08、0.10、1.0)、(0.08、0.15、1.0)、(0.08、0.20、1.0)、(0.08、0.25、1.0)、(0.08、0.30、1.0)mol/L]进行优化。同时采用最适条件纯化3批藻蓝蛋白。结果两步盐析的最适摩尔浓度分别为1.0和1.8 mol/L,阴离子交换层析最适条件为缓冲液p H 7.0,进样浓度为1.0~2.0 mol/L,洗脱流速为2 cm/min,洗脱液盐梯度浓度为0.08、0.20、1.0 mol/L。最适条件纯化的3批藻蓝蛋白纯度可达4.0以上,回收率达11%以上。结论成功优化了巢湖蓝藻藻蓝蛋白的纯化工艺,纯化出了试剂级(纯度4.0以上)的藻蓝蛋白。

    2019年03期 v.32 319-323页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K]
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  • 牛乳中蜡样芽孢杆菌荧光定量PCR检测方法的建立及验证

    杨健;侯婷婷;佐兆杭;郭瑜;姚笛;

    目的建立一种快速检测牛乳中蜡样芽孢杆菌的荧光定量PCR方法,并进行验证。方法根据GenBank中登录的蜡样芽孢杆菌gyrB基因序列及荧光定量PCR要求,设计合适的特异性引物,提取菌体DNA,对目的基因进行扩增及克隆;以重组质粒为模板进行荧光定量PCR扩增,绘制标准曲线;以蜡样芽孢杆菌DNA为模板进行荧光定量PCR扩增,确定其扩增条件。对建立的方法进行特异性及灵敏性验证。结果建立的方法检测其他3种牛乳中常见致病菌(大肠埃希菌、志贺菌、沙门菌)未见特异性扩增,即无交叉反应;最低检出限为1×10~(-7) ng/μL。以掺入蜡样芽孢杆菌的牛乳为样品,可检测到牛乳中10. 4 CFU/mL的蜡样芽孢杆菌,优于国标方法(GB 4789. 14-2014)检测含有相同菌落数的蜡样芽孢杆菌(仅能检测到1. 04×10~2 CFU/mL)。结论建立的方法特异性强,灵敏性高,适用于快速、准确检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌,为实验室快速检测致病菌提供了参考。

    2019年03期 v.32 324-327+332页 [查看摘要][在线阅读][下载 322K]
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  • 大菱鲆鳗弧菌灭活疫苗生产工艺条件的优化

    孙承文;李杰;赖迎迢;江小燕;莫照兰;黄志斌;陶家发;

    目的优化大菱鲆鳗弧菌VAM003株灭活疫苗的生产工艺条件。方法通过对大菱鲆鳗弧菌VAM003株培养基(TSB和LB)、培养基盐度(1. 5%、2. 0%、2. 5%、3. 0%、3. 5%NaCl)、接种量(5%、10%、15%)、发酵时间(6~12 h)进行筛选,采用最适发酵条件制备大菱鲆鳗弧菌VAM003株发酵菌液,分别加入不同终浓度的甲醛(0. 1%、0. 2%、0. 3%、0. 4%)灭活24、48、72 h,确定最适灭活条件。采用最适生产工艺制备2批大菱鲆鳗弧菌VAM003株灭活疫苗,并进行安全性及效力试验。结果大菱鲆鳗弧菌VAM003株最适发酵培养条件为:用含2. 5%NaCl的TSB培养基,在接种量10%条件下发酵培养10~12 h,活菌量达5×109 CFU/m L以上;最适灭活条件为:甲醛终浓度0. 2%灭活24 h。大菱鲆注射灭活疫苗后,全部健活,未出现临床症状,摄食、游姿及体色均正常,注射部位无红肿,内脏器官无病变;疫苗的免疫保护率达90%以上。结论成功优化了大菱鲆鳗弧菌VAM003株灭活疫苗规模化生产工艺条件,制备的灭活疫苗具有良好的安全性及效力,可用于大菱鲆鳗弧菌病的预防。

    2019年03期 v.32 328-332页 [查看摘要][在线阅读][下载 227K]
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  • 重组人溶菌酶的分离纯化及鉴定

    邓晗;史瑾;郝东;王维;赵金礼;

    目的建立重组人溶菌酶(human lysozyme,h LYZ)的分离纯化方法,并对纯化产物进行鉴定。方法采用固液分离、膜过滤、疏水层析及离子交换层析对hLYZ进行分离纯化;SDS-PAGE及HPLC法检测hLYZ纯度;按《中国药典》二部(2015版)蛋清溶菌酶效价检查法检测其效价;Western blot法检测其特异性;基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF)测定其相对分子质量。结果该分离方法可获得单一组分的重组hLYZ;SDS-PAGE检测纯度达99%,HPLC分析纯度达98. 8%;纯化后的hLYZ可与抗人LYZ抗体特异性结合,活性为1. 2×105 U/mg,相对分子质量为14 697。结论建立的分离纯化方法易操作,成本低,得到的hLYZ纯度大于98%,该分离方法可用于hLYZ的规模化生产。

    2019年03期 v.32 333-337页 [查看摘要][在线阅读][下载 235K]
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  • 高效液相色谱外标法测定人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量

    张晓杰;郑霞;张洁;王宇;赵奇;

    目的建立高效液相色谱外标法检测人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量,并对方法进行验证及初步应用。方法色谱柱:氨基键合柱(250 mm×4. 6 mm×5μm);流动相:乙腈-磷酸盐缓冲液(1∶1);流速:1. 0 m L/min;紫外检测波长:205 nm;柱温:40℃;进样量:20μL,采用面积外标法计算盐酸精氨酸含量,并验证方法的系统适应性、线性范围、重复性、稳定性、准确度及定量限(LOQ)。应用建立的方法测定3批人纤维蛋白原中盐酸精氨酸的含量,并与《中国药典》三部(2015版)规定方法进行比较。结果该方法色谱峰型单一,且无其他干扰,盐酸精氨酸与甘氨酸的分离度为10. 54;盐酸精氨酸浓度在0. 116 2~0. 536 1 mg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,线性方程为:y=7 476. 695 68 x+72. 418 815,相关系数(R)为0. 999 24;同一人纤维蛋白原样品重复6次检测盐酸精氨酸含量的相对标准偏差(relativestandard deviation,RSD)为0. 22%;人纤维蛋白原样品于4℃放置0、4、8、12、16、20 h,盐酸精氨酸检测结果 RSD为0. 57%;高、中、低3个浓度加样样品检测结果平均回收率为(101. 36±1. 53)%,RSD为1. 51%;LOQ为0. 581μg/mL。两种方法检测3批样品盐酸精氨酸含量为25. 9~26. 3 g/L,两者差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论高效液相色谱外标法操作简便,重复性、稳定性、准确度良好,可用于人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量的测定。

    2019年03期 v.32 338-341页 [查看摘要][在线阅读][下载 182K]
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综述

  • 大分子拥挤对酶蛋白及DNA的影响

    秦娅蓝;童瑾;

    大分子拥挤是指在蛋白质、多肽、核酸和多聚糖共同形成的环境中,由于大分子的不可穿透性,使任何一个大分子的实际可及空间大幅缩小,所形成的生物大分子环境是一种由于空间排斥引起的纯物理性非特异性效应。酶在机体中发挥高效专一的催化作用,细胞内分子环境改变可能导致酶活性的改变,影响细胞及机体的稳态,同时大分子拥挤还可能影响DNA的合成。本文主要从大分子拥挤对酶(包括酶蛋白性质、酶活性、酶蛋白最适温度)和DNA的影响及其可能的作用机制等方面作一综述。

    2019年03期 v.32 342-346页 [查看摘要][在线阅读][下载 184K]
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  • CircRNA在自身免疫疾病中的研究进展

    雷波;玄秀云;樊卫平;

    Circular RNA(简称CircRNA)为一类新发现、长链非编码的内源性环状RNA分子,能够参与基因组转录及转录后水平的调节,竞争内源性RNA特异性结合miRNA,进而通过调控其活性影响下游靶基因的表达,参与发育、凋亡,影响诸多疾病的进程。最新的研究证实,CircRNA调控了类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)、多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)等自身免疫性疾病的发生,有望作为此类疾病诊断标志物或治疗靶标。本文就CircRNA的生物学特性及其在自身免疫性疾病中的研究状况作一综述。

    2019年03期 v.32 347-350页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K]
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  • 裂谷热研究进展

    毕津豪;闫飞虎;黄培;赵永坤;杨松涛;

    裂谷热(Rift Valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(Rift Valley fever virus,RVFV)引起的发热性人兽共患病,该病导致反刍动物的大面积死亡及人类的致命性出血热。RVF最初仅流行于非洲东部地区,现正在逐步扩大。2016年我国确诊首例输入性病例,提示非流行地区和国家正在面临威胁。RVF的流行不仅严重影响人类的健康及畜牧业的发展,更可能被用作潜在生物战剂,因此被世界动物卫生组织列为必须报告疫情。本文对RVF的流行病学、分子生物学、检测技术及疫苗研究进展等方面进行简要综述,为今后RVF的相关研究提供参考。

    2019年03期 v.32 351-356页 [查看摘要][在线阅读][下载 205K]
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  • Ⅲ型干扰素研究现状

    闫甲丽;王健;

    最早发现的细胞因子是干扰素(interferon,IFN),因能干扰病毒的复制和感染而得名。Ⅲ型干扰素是2003年发现的新类型,其具有IFN和白细胞介素的特点,称为IFNλs(包括IL-28A、IL-28B和IL-29)。Ⅲ型干扰素受体复合物是由IL-28Rα和IL10-Rβ组成的异源二聚体,通过Janus激酶/酪氨酸激酶(Janus kinase/signal transducer andactivator of tran-scription signaling pathway,JAK/STAT)等信号途径,发挥抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能。本文对Ⅲ型干扰素的研究进行综述,重点是其生物活性的最新进展。

    2019年03期 v.32 357-360页 [查看摘要][在线阅读][下载 175K]
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  • 不同基质流感疫苗的生产工艺及质量控制

    李光谱;张艳;张飞齐;白朋勋;

    全球每年有数百万人感染流感病毒,可导致严重症状,甚至引发死亡,接种疫苗是目前预防和控制流感最有效的方法。由于流感病毒具有较高的突变率,疫苗制造厂家必须每年更换新的疫苗病毒株,使制备的疫苗与流行毒株的血凝素和神经氨酸酶两种重要抗原相匹配,确保流感疫苗的有效性。本文主要对鸡胚及细胞为基质制备流感疫苗的上市情况、生产工艺及其质量控制的特点作一综述。

    2019年03期 v.32 361-364+368页 [查看摘要][在线阅读][下载 181K]
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专题报道

  • 关于冻干疫苗稀释剂包装形式及无菌保证措施的分析

    金苏;赵欣;李敏;

    <正>冻干剂型有利于疫苗在贮存过程中的稳定性,尤其是对于稳定性较差的抗原,而稀释剂作为冻干疫苗制剂的配套使用部分,其无菌保证及与疫苗的相容性等方面,对最终疫苗产品的安全及有效性至关重要。本文对目前我国冻干疫苗稀释剂存在的包装形式进行了概述,并基于国内外无菌保障要求,阐明各包装形式下采用终端灭菌的考虑及需开展的风险评价研究。

    2019年03期 v.32 365-368页 [查看摘要][在线阅读][下载 117K]
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