中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 乙型流感病毒疫苗株全基因组序列测定及其在疫苗质量控制中的应用

    刘书珍;权娅茹;邵铭;李长贵;袁力勇;

    目的建立乙型流感疫苗生产用毒株全基因组序列测定方法,将其应用于2013~2017年流感季节乙型流感疫苗生产用毒株的质量控制,为全面监测流感疫苗质量提供依据。方法利用通用引物对不同企业的乙型流感疫苗工作种子批进行一步法RT-PCR,以获得乙型流感病毒全基因组,DNA序列测定后,采用Clustal软件进行比对,在GISAID数据库中进行同源序列分析。结果不同企业间的Yamagata谱系工作种子批毒株序列一致,其中HA和NA基因均来源于B/Massachusetts/02/2012,PB2等其他内部基因来源不同;Victoria谱系工作种子批毒株的HA和NA基因与B/Brisbane/60/2008一致,但PB2等基因不同企业间存在差异。结论建立的一步法RT-PCR可用于乙型流感疫苗生产用毒株全基因组序列分析,可从源头保证流感疫苗的安全性、有效性以及疫苗质量的一致性。

    2019年04期 v.32 369-374+385页 [查看摘要][在线阅读][下载 382K]
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  • 冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)蛋白结构特性分析

    匡志新;柴博雅;李春艳;孙宏亮;朱美宣;熊晋峰;谢冰丽;王帆;解辉;邹勇;

    目的分析冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)蛋白的结构特性。方法 SDS-PAGE电泳分离4批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液,电泳条带经nano LC-MS/MS进行蛋白鉴定,Native-PAGE分析病毒颗粒的完整性,并分析蛋白相对分子质量。同时进行N-末端氨基酸序列分析。结果 SDS-PAGE分析可见5个主条带,分别为狂犬病毒G、M、N、P蛋白及G蛋白二聚体(G-1),经nano LC-MS/MS鉴定,确定相对分子质量分别为74 000、21 885、57 287、40 934及141 067,各结构蛋白均包含在病毒颗粒中,M、N、P、G蛋白的N-末端起始氨基酸序列为分别为MNFLR、MDADR、MSKIF、MVPQA,与预期一致。结论 4批冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)原液所含结构蛋白源于狂犬病病毒。

    2019年04期 v.32 375-379页 [查看摘要][在线阅读][下载 369K]
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基础研究

  • 不同浓度脂多糖对小鼠免疫功能及小肠组织形态的影响

    王梦竹;贾军峰;乔新月;王秋菊;崔一喆;武瑞;

    目的探讨不同浓度脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对小鼠血液细胞因子水平及小肠组织形态的影响。方法将雄性ICR小鼠随机分为5组,对照组经腹腔注射生理盐水,4个试验组分别经腹腔注射2.5、5、10、20 mg/kg LPS,注射6 h后,经小鼠眼球采血,分离血清,ELISA法检测小鼠血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6和IL-8水平;同时采集小鼠十二指肠、空肠、回肠和盲肠组织样品,做组织切片后进行HE染色,测量小肠段绒毛高度(villus height,VH)和隐窝深度(crypt depth,CD)。结果试验组小鼠肠道碱性磷酸酶(intestinal alkaline phosphatase,IAP)及细胞因子水平在LPS浓度为5 mg/kg时达到高峰,随着LPS浓度的升高,细胞因子分泌受到抑制;与对照组相比,十二指肠、空肠和回肠组织VH值降低、VH/CD比值下降。结论小鼠在注射5 mg/kg LPS时,可诱导肠黏膜损伤,使得各细胞因子浓度达到最高,后续可作为炎症性肠炎模型适宜的诱导剂量。

    2019年04期 v.32 380-385页 [查看摘要][在线阅读][下载 419K]
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  • 二磷酸氯喹对THP-1细胞增殖及凋亡的影响

    洪珊;杨佳佳;文送娇;林垚;叶超;孙强明;

    目的探讨不同浓度二磷酸氯喹对急性单核细胞性白血病细胞THP-1增殖及凋亡的影响。方法分别用10、20、40、80、100μmol/L氯喹处理THP-1细胞,分别于处理12、24、48和72 h收集细胞,MTS法检测细胞增殖情况,同时采用Hoechst33342荧光染色法及流式细胞仪检测二磷酸氯喹对THP-1细胞凋亡的影响。结果处理细胞12、24 h时,10、20、40、80、100μmol/L二磷酸氯喹对细胞增殖无明显影响,各组间差异无统计学意义(P>0.05);处理细胞48、72 h时,各浓度二磷酸氯喹对细胞增殖均有抑制作用,细胞活力均明显下降,各组间差异有统计学意义(P<0.01),并具有剂量依赖性。不同浓度二磷酸氯喹对THP-1细胞凋亡均具有诱导作用,且随着浓度的增加,细胞凋亡愈加明显。结论二磷酸氯喹在体外可抑制THP-1细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其作用具有剂量依赖性。

    2019年04期 v.32 386-389页 [查看摘要][在线阅读][下载 269K]
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  • 应用蛋白质组学筛选能量负平衡卵巢静止奶牛生物标记物

    张江;肖鑫焕;舒适;白云龙;赵畅;范子玲;夏成;

    目的运用蛋白质组学技术筛选能量负平衡卵巢静止奶牛的生物标记物,建立早期诊断标准,并探讨其发病机制。方法应用荧光差异双向凝胶电泳(fluorescence two-dimensional differential gel electrophoresis,2D-DIGE)和基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/lonization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS),鉴定能量正平衡发情奶牛和能量负平衡卵巢静止奶牛的差异蛋白质。采用生物信息学、蛋白印迹和受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析差异蛋白质,并确定用于早期诊断卵巢静止的生物标志物。结果两组奶牛筛选出12种差异表达蛋白,这些差异蛋白主要参与脂类代谢、维生素代谢、补体凝血级联及过氧化物酶增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor-α,PPAR)信号通路,其中α-1-微球蛋白/bikunin前体(alpha-1-microglobulin/bikunin precursor,AMBP)可作为卵巢静止早期诊断的标志物,预警值为4 346.75 ng/L。结论应用蛋白组学筛选出能量负平衡导致奶牛卵巢静止的12种差异表达蛋白,确定了用于早期诊断卵巢静止的生物标志物,为卵巢静止的临床诊断和发病机制奠定了基础。

    2019年04期 v.32 390-395页 [查看摘要][在线阅读][下载 301K]
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  • 条斑紫菜多糖对α-淀粉酶的抑制效果

    曾傲琼;让一峰;杨瑞金;赵伟;

    目的分析条斑紫菜多糖对α-淀粉酶的抑制效果。方法从条斑紫菜中提取多糖α-淀粉酶抑制剂(α-amylase inhibitor,α-AI),分析其在不同浓度(2.5~30 mg/m L)下,经热(30~90℃,20 min)、酸(p H 2.0~7.0,室温,30 min)、碱(p H 7.0~10.0,室温,30 min)、蛋白酶(分别为100 U/g的风味蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶,50℃,2 h)以及模拟胃肠道环境(胃处理:p H 2.0,100 U/g胃蛋白酶;肠道处理:p H 8.2,100 U/g胰蛋白酶)处理后对α-AI活性的影响,探讨α-AI的稳定性及其对淀粉酶的抑制效果。结果条斑紫菜多糖α-AI在多糖浓度为2.5~30 mg/m L之间对α-淀粉酶的抑制呈剂量依赖关系,浓度为30 mg/m L具有较高的抑制率。经不同条件处理,α-AI活性无显著变化(P>0.05),仍具有良好的淀粉酶抑制活性,且其活性在胃液和肠液中稳定,可较好地发挥生理作用。结论条斑紫菜多糖α-AI在控制血糖稳定方面具有较强的应用价值,可作为2型糖尿病患者潜在的功能性食品。

    2019年04期 v.32 396-402页 [查看摘要][在线阅读][下载 312K]
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  • PRRSV 2b蛋白互作宿主细胞蛋白的筛选

    崔一龙;邓守全;杨达汉;薛江东;马德慧;

    目的通过酵母双杂交筛选技术从猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAM)c DNA文库中筛选与猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)2b蛋白互作的宿主细胞蛋白。方法将PRRSV 2b基因扩增产物克隆至p GBKT7质粒上,构建重组钓饵载体p GBKT7-2b,转化至Y2H Gold酵母感受态中制备钓饵菌株后,进行自激活和毒性检测;将PAM c DNA文库菌株与钓饵菌株进行杂交融合,经DDO/X/A平板筛选后,对筛选的菌株进行PCR鉴定及测序分析。结果构建的钓饵菌株无毒性和自激活现象;共获得LGALS1、RPL12、LGALS3和RPS20 4种蛋白。结论成功构建了可用于双杂交筛选的钓饵菌株,筛选出4种与PRRSV 2b蛋白互作的PAM蛋白,其中LGALS1出现概率最高。

    2019年04期 v.32 403-407页 [查看摘要][在线阅读][下载 376K]
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  • 分装容器对培养基热穿透、灭菌效果及灵敏度的影响

    敖嘉;余红;白云涛;陈超;严东珍;邓雪莲;

    目的分析不同分装容器内培养基的热穿透、灭菌效果、灵敏度差异以及三者之间的相互关系。方法将硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基分装于中试管和血浆瓶,用TMI温度探头比较两种容器的热穿透差异,用灭菌指示剂比较不同容器中培养基灭菌效果,灵敏度试验比较不同容器中培养基灵敏度。结果血浆瓶热穿透力<中试管热穿透力;两种容器内培养基灭菌效果和灵敏度结果均无差异。结论 116℃蒸汽灭菌30 min不会破坏硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基的有效营养成分,且能达到灭菌目的;两种培养基的热穿透性因分装容器种类而异,但灭菌效果、灵敏度与分装容器无直接关系。

    2019年04期 v.32 408-411+415页 [查看摘要][在线阅读][下载 302K]
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  • 猪瘟病毒生物反应器低血清培养及其免疫效力检测

    余彬辉;贾布拖;贾志平;李卫诚;

    目的利用生物反应器低血清培养基灌流培养猪瘟病毒,制备猪瘟病毒活疫苗,检测其免疫效价。方法对猪睾丸ST细胞进行低血清培养驯化,待ST细胞适应低血清培养后,接种至生物反应器,当细胞达到接种密度后,感染猪瘟兔化弱毒株(Classical Swine)毒种,培养96 h后,连续收液48 d,收获的病毒液经滤膜过滤后,制备猪瘟病毒活疫苗。将疫苗免疫健康新西兰家兔和28日龄健康仔猪,检测病毒滴度及免疫效价。结果用2%血清培养ST细胞,细胞接毒密度为5×106个/m L,病毒按3%~5%比例接种。利用上述条件培养的猪瘟病毒连续收获20次,病毒滴度均在7 500 RID/m L以上。免疫仔猪后第14天抗体效价达1∶128,未免疫仔猪抗体效价低于1∶16;攻毒后观察16 d,免疫仔猪无任何猪瘟临床表现,保护率100%,而未免疫仔猪在攻毒后第6天开始陆续死亡,死亡率100%。结论用低血清培养ST细胞制备的猪瘟病毒活疫苗具有较高的免疫效价,为猪瘟病毒疫苗生产工艺的改进奠定了基础。

    2019年04期 v.32 412-415页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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治疗制剂

  • 儿茶素没食子酸酯对糖尿病小鼠心肌氧化应激损伤的保护作用及其机制

    史敏;杜剑青;

    目的探讨儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对糖尿病小鼠心肌氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法将链脲佐菌素(streptozocin,STZ)诱导的糖尿病模型小鼠随机分为50、100、200 mg EGCG组和模型组,每组20只。EGCG组隔天经腹腔注射相应剂量的EGCG 1次,模型组注射100 mg/kg等量的生理盐水,共注射4周。给药4周后,检测各组小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血清活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平以及心肌组织Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达,计算心脏重量指数,观察心肌组织病理学变化。结果给药4周后,与模型组比较,各剂量EGCG组小鼠的FBG、心脏重量指数及血清MDA、ROS水平均明显降低(P<0.05),血清SOD水平及心肌组织Nrf2、NQO1、HO-1蛋白的表达均明显升高(P<0.05),且心肌组织病理形态均得到明显改善,其中100 mg EGCG组的变化幅度最大。结论 EGCG可改善糖尿病小鼠血清MDA、ROS和SOD水平,其作用机制可能与激活Nfr2通路有关。

    2019年04期 v.32 416-419页 [查看摘要][在线阅读][下载 254K]
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诊断制剂

  • 不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒抗体检测试剂性能评估

    谷金莲;刘艳;于洋;张瑾;周诚;

    目的评估不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体检测试剂性能。方法采用HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准验证方式,应用国内外市场占有较大份额及方法有代表性的9种试剂,对HCV抗体国家参考品的65份[HCV抗体阴性参考品30份(编号N1~30)、阳性参考品30份(编号P1~30)、最低检出限参考品4份(编号L1~4)和重复性参考品1份]血浆样本进行检测,通过分析HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项性能要求,评估不同化学发光免疫分析方法的HCV抗体试剂性能。结果 9种试剂检测阴、阳性参考品符合率均为96.7%(29/30)~100%(30/30),仅有3种试剂检测参考品符合率均为100%(30/30);最低检出限均检出L1、L2、L3阳性,检出L4阴性;重复性检测S/CO值的变异系数(CV)在1.6%~11.1%之间,化学发光免疫分析的双抗原夹心法比间接法试剂对同一阳性样本检测的S/CO值高;相同项目同一试剂的稳定性试验与常温条件下检测结果基本一致,对每种试剂检测3个批号的批间精密度,S/CO值的CV在2.3%~12.5%之间。结论 9种试剂对HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项指标验证显示,不同化学发光免疫分析法的HCV抗体检测试剂性能基本一致。

    2019年04期 v.32 420-423+427页 [查看摘要][在线阅读][下载 190K]
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临床研究

  • 甲型肝炎减毒活疫苗纳入扩大免疫规划的经济学评价

    陈盛恩;彭时辉;周义生;廖征;张艳霞;文海蓉;许波;

    目的评估南昌市将甲型肝炎减毒活疫苗(live attenuated hepatitis A vaccine,Hep A-L)纳入扩大免疫规划(Expanded Program on Immunization,EPI)接种策略的效果及效益。方法采用净现值法计算净效益和成本效益比,进行成本-效益分析。结果 2008~2016年,南昌市将Hep A-L纳入EPI投入成本1 865.36万元,减少甲型肝炎(简称甲肝)病例9 297例,即每投入2 006.41元,减少1例甲肝病例。产生净效益13 708.73万元,成本效益比为8.35∶1。结论南昌市将Hep A-L纳入EPI接种策略可获得较高的成本效果比和成本效益比。

    2019年04期 v.32 424-427页 [查看摘要][在线阅读][下载 146K]
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技术方法

  • DNA功能化金纳米颗粒在沙眼衣原体检测中的应用

    周朴帆;肖福兵;曾心靛;刘子卿;陈曦;唐婷;陈丽丽;

    目的建立一种基于DNA功能化金纳米颗粒检测沙眼衣原体的新方法。方法分析沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)Trp B保守基因序列,设计2条特异性寡核苷酸链,一条进行巯基修饰后与柠檬酸钠还原法制备的金纳米颗粒结合得到信号探针,另一条用生物素标记作为捕获探针。制备的靶序列与两种探针在包被链霉亲和素的酶标板内形成牢固的带有金纳米颗粒的核酸复合物,加入银染液后,经酶标仪读取630 nm处A值或肉眼观察96孔板底灰度。对建立的检测体系进行特异性和灵敏度验证。用建立的检测体系及荧光定量PCR法对可疑临床沙眼衣原体样本进行检测。结果制备的金纳米颗粒经透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察确定其粒径约20 nm,吸收峰为518 nm,金纳米颗粒标记的信号探针吸收峰为520 nm;不同靶序列浓度的银染结果可用肉眼进行分辨。优化后的检测体系为:反应时间2 h,杂交温度25℃,生物素探针浓度100 nmol/L,银染色时间8 min。建立的方法能特异性检测沙眼衣原体核酸序列,与其他生殖道病原菌无交叉反应,最低检测浓度达55 pmol/L。49份临床样本检出率为61%,与荧光定量PCR法相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立了一种简便、高效、特异的沙眼衣原体检测方法,成本低廉,为沙眼衣原体的临床病原学诊断提供了新的途径。

    2019年04期 v.32 428-433页 [查看摘要][在线阅读][下载 318K]
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  • 反向胶束电动毛细管色谱-直接紫外法测定天花粉中的氨基酸

    齐烨迪;赖昕;周鑫悦;陈莉;林珠灿;余丽双;

    目的建立检测天花粉中氨基酸的高效反向胶束电动毛细管色谱-直接紫外法,并进行验证。方法样品分离采用未涂层毛细管(75μm×60 cm,有效长度为49.5 cm),通过运行缓冲液,在一定电压下进样,检测波长为200 nm,样品浓度为50μg/m L,操作温度为25℃。对分离条件中运行缓冲溶液p H(10、11和12)、缓冲体系浓度(40 mmol/L KH_2PO_4-110 mmol/L Na OH、60 mmol/L KH2PO4-130 mmol/L Na OH、70 mmol/L KH_2PO_4-140 mmol/L Na OH)、缓冲液阳离子表面活性剂浓度[0.2、0.6、1、1.2 mmol/L十六烷基三甲基氯化铵(cetyltrimethylammonium chloride,CTAC)]、缓冲溶液有机添加剂浓度(5%、10%、15%、20%乙腈)、进样方式(电动进样:-10 k V进样5 s,压力进样:34.5 k Pa进样5 s)、分离电压(15、20、25 k V)进行优化。同时验证方法的线性、精密性及准确性。采用最适条件检测供试品天花粉中3种氨基酸分离情况。结果最适检测条件为:运行缓冲液为5%(v/v)乙腈、1 mmol/L CTAC、60 mmol/L KH2PO4-130 mmol/L Na OH(p H 11);压力进样:34.5 k Pa×5 s,分离电压:20 k V。瓜氨酸、天冬酰胺和γ-氨基丁酸3种氨基酸的峰面积和浓度均呈良好的线性关系,R~2均>0.99;峰面积RSD分别为4.7%、4.5%和3.8%,迁移时间RSD分别为0.62%、0.93%和1.10%;加标回收率在82.48%~111.16%之间。该方法可有效分离天花粉中的3种氨基酸。结论本实验建立的方法快速有效,且具有良好的精密性及准确性,可用于天花粉中氨基酸的快速测定。

    2019年04期 v.32 434-438+444页 [查看摘要][在线阅读][下载 324K]
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  • 重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺的优化

    陈继军;南建军;乔玉玲;张超;宋兰兰;熊颖;安晨;房世娣;毛晓燕;

    目的优化重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺。方法采用试验设计(Design of Experiment,DOE)方法优化重组抗CD52单克隆抗体亲和层析纯化工艺,试验因子为中间清洗液Na Cl浓度(130~870 mmol/L)和洗脱液p H(3.50~4.20),试验响应变量为纯化后样品收率、纯度、残余宿主蛋白含量、外源DNA含量及蛋白A含量,通过DOE构建模型,预测中间清洗液Na Cl浓度和洗脱液p H范围。同时采用DOE方法验证预测工艺参数的稳定性。结果确定中间清洗液Na Cl浓度为400~700 mmol/L,洗脱液p H为3.55~3.75。试验因子在该参数范围内变动时,样品收率均大于80%,纯度均大于97%,外源DNA浓度均低于260 pg/mg,宿主蛋白含量均低于2 300 ng/mg,蛋白A含量均低于6.5 ng/mg。结论成功优化了重组抗CD52单克隆抗体的亲和纯化工艺,且具有较好的稳定性。

    2019年04期 v.32 439-444页 [查看摘要][在线阅读][下载 280K]
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  • 联合应用S/D法和膜过滤法灭活/去除凝血酶病毒效果的验证

    陈英红;孙伊;罗浩铭;姜瑞芝;张晓荧;刘艳;张娜;

    目的验证联合应用S/D法和膜过滤法灭活/去除凝血酶病毒的效果。方法采用S/D法灭活凝血酶中间体的乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)和伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV),膜过滤法去除猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)和呼肠孤病毒Ⅲ型(reovirus3,Reo3),细胞病变法测定病毒滴度;参照《中国药典》三部(2010版)要求,测定聚山梨酯80和磷酸三丁酯的残留量,并检测样品病毒灭活/去除前后的效价、蛋白质含量及相对分子质量。结果 S/D法可有效灭活脂包膜指示病毒,膜过滤法可在一定过滤量范围内去除PPV和Reo3指示病毒。梨酯80和磷酸三丁酯残留量符合《中国药典》三部(2010版)限度要求;样品经灭活/去除病毒后,效价提高了8.5%,蛋白质含量提高了12.7%,灭活前后相对分子质量范围无明显变化。结论联合应用S/D法和膜过滤法可用于凝血酶及其他血液制品的病毒灭活/去除工艺,以提高制品的病毒安全性。

    2019年04期 v.32 445-448页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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  • 测定含甘油牛血清白蛋白样品Lowry法的优化及验证

    王晔;耿其秀;秦亚男;李世玲;

    目的优化《中国药典》三部(2015版)通则50中Lowry法2试验条件,进一步提高检测结果的准确性,并进行方法学验证,为柱纯化组分百日咳疫苗中间品蛋白准确定量提供参考。方法用Lowry法2测定经脱氧胆酸钠-三氯乙酸预处理的不同浓度且含50%甘油的牛血清白蛋白,使福林酚反应在20℃水浴条件下分别静置30、40和50 min,筛选出蛋白含量测定值相对误差最小的反应时间;再在10、20和30℃条件下,筛选出相对误差最小的反应温度。对该方法进行精密度、准确度、专属性验证,并确定线性范围。结果福林酚反应温度为30℃、反应时间为30 min时,测定值的平均相对误差最低,与其他试验条件的差异有统计学意义(P<0.05)。在该试验条件下,同一工作日不同试验人员间及同一试验人员不同工作日检测结果的RSD均小于2.00%,重复性检测结果 RSD为0.50%,精密度良好;30、50和70μg/m L蛋白溶液测定值的RSD均小于2.00%,回收率在99%~102%之间,可对蛋白准确定量;含甘油50μg/m L蛋白溶液的回收率及其RSD分别为102%和0.50%;不含甘油对照组回收率和RSD分别为100%和0.82%,专属性良好;在0~140μg/m L标准范围内,检测含甘油样品的测定范围在15~140μg。结论采用Lowry法2测定含高浓度甘油的蛋白样品时,福林酚反应温度、反应时间是影响试验结果的重要因素。30℃条件下反应30 min,可提高测定结果的准确性,符合且更有利于柱纯化组分百日咳疫苗中间品的蛋白定量的要求。

    2019年04期 v.32 449-453页 [查看摘要][在线阅读][下载 203K]
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  • 破伤风抗毒素间接ELISA检测方法的建立及应用

    张玲玲;包正琦;张光磊;刘东梅;段丽娟;戴于栋;高建军;

    目的建立检测破伤风抗毒素(TAT)效价的间接ELISA法,并进行初步应用。方法用方阵滴定法确定包被抗原和待检血清的最适工作浓度,并对各种反应条件进行优化,建立间接ELISA法。用建立的间接ELISA法检测3批TAT效价,并与小鼠中和试验法检测结果进行比较。结果建立的间接ELISA法的最适反应条件:抗原最适包被质量浓度为1.2μg/m L,血清最佳稀释浓度为400 m IU/m L;抗原与待检血清作用时间为45 min,加入酶标二抗后作用时间为60 min;抗原最适包被缓冲液为0.05 mol/L p H 9.6碳酸盐(CBS)缓冲液,4℃包被12 h;封闭液为30%BSA(5%蔗糖和5%乳糖);酶标二抗最适工作浓度为1∶8 000。3批TAT间接ELISA法效价检测结果与小鼠中和试验法效价检测结果相比,差异无统计学意义(P均>0.05)。结论建立的间接ELISA法具有较高灵敏度,可用于TAT效价的检测。

    2019年04期 v.32 454-457+461页 [查看摘要][在线阅读][下载 235K]
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  • 白喉杆菌发酵产毒过程中影响因素的分析

    姚雷;秦鲁南;洪禹;祝传顺;朱卫华;杜琳;

    目的分析白喉杆菌发酵产毒过程中,通气方式、通气量大小、培养基成分等影响因素对其产毒的影响。方法采用相对固定的通气和搅拌转速,对比发酵罐底部通气和顶部通气的产毒量;采用顶部通气、相对固定的通气量和搅拌速度,对比胰酶牛肉消化液培养基和酸水解酪蛋白培养基对产毒的影响;采用顶部通气、相对固定的通气量和搅拌转速,使用胰酶牛肉消化液培养基,对比添加L-胱氨酸、麦芽糖、谷氨酸铵对产毒的影响。结果采用顶部通气配合高速搅拌有利于产毒;胰酶牛肉消化液培养基产毒量和产毒速度均优于酸水解酪蛋白培养基;补充碳源和氮源有助于维持白喉杆菌产毒速度和产毒量。结论用胰酶牛肉消化液培养基培养白喉杆菌,配合补充适量的营养成分及提高搅拌速度、增加通气量,对产毒速度和产毒量有促进作用。

    2019年04期 v.32 458-461页 [查看摘要][在线阅读][下载 178K]
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综述

  • Polo样蛋白激酶1与乳腺癌发生、发展及治疗的相关性

    武佳琦;杨英;

    乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,发病率高,极易复发和转移,且具有年轻化趋势,靶向治疗已成为乳腺癌治疗的趋势和研究热点。Polo样蛋白激酶1(Polo-like kinase 1,Plk1)是一种广泛存在于真核生物中的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在人类多数肿瘤中表达水平较高,近年来被认为是治疗恶性肿瘤的干预靶点,靶向Plk1的乳腺癌治疗已成为近年来关注的热点。本文对Plk1与乳腺癌发生、发展及转移的相关性,以及目前靶向Plk1的乳腺癌治疗策略进行综述。

    2019年04期 v.32 462-465页 [查看摘要][在线阅读][下载 149K]
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  • 蚕丝蛋白在生物样本保存领域应用的研究进展

    滕芸;周新丽;

    蚕丝是一种天然的高分子材料,由60%~80%的丝素、15%~35%的丝胶及约5%的石蜡、色素、糖类等杂质组成。丝素具有良好的生物相容性和降解性,在药物缓释、促进伤口愈合、组织工程支架等生物医药领域及降血糖、抑菌等医疗保健方面均具有广泛应用;丝胶包裹在丝素纤维外层,对丝素起保护作用,其不仅是非常有用的生物材料,还具有许多生物活性和药理作用,如抗氧化性、抗肿瘤活性、物理胃肠功能等作用。近年,蚕丝蛋白在生物样本保存领域的应用备受研究者关注,本文对蚕丝蛋白在生物样本低温保存和常温保存方面的应用和成果、存在的问题及未来的研究方向作一综述,以期为蚕丝蛋白在生物样本保存领域的应用提供参考。

    2019年04期 v.32 466-471页 [查看摘要][在线阅读][下载 204K]
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  • B群流行性脑脊髓膜炎疫苗的研究进展

    刘建东;张静飞;郑海发;

    流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)是一种由革兰阴性的奈瑟双球菌导致的呼吸道传染病,以急性脑膜炎和败血症为主要症状。根据脑膜炎奈瑟双球菌荚膜多糖的特征可将其菌株至少分为12个血清群,其中A、B、C、W135、Y血清群是主要的致病菌群,随着A、C、Y、W135血清群菌株多糖疫苗的广泛应用,有效控制了相应血清群脑膜炎的流行,B血清群成为流脑主要的流行菌群之一,因此研制有效的疫苗对于预防流脑流行至关重要。本文对B血清群流脑疫苗研究所用抗原成分的变异程度、作用机制和免疫原性作一综述,同时对两种已批准上市的B血清群流脑疫苗进行比较。

    2019年04期 v.32 472-475页 [查看摘要][在线阅读][下载 156K]
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  • 渔用疫苗佐剂的研究进展

    谢华亮;王庆;王林川;

    目前,我国水产养殖业已进入规模化、产业化模式,在水产动物疾病的困扰下,免疫防控是抵抗传染性疾病的有效方式之一。弱毒疫苗存在毒力返强的风险,传统的灭活疫苗和新兴的重组疫苗存在抗原量大、免疫持续期短、免疫效力低的问题,单独使用时不能达到理想的免疫效果。佐剂是一种先于抗原或与抗原同时使用的物质,可增强非特异性免疫反应,仅使用少量抗原即能达到理想的免疫效果,配比合适的疫苗佐剂可有效提高疫苗的保护力。本文就目前常见的渔用疫苗佐剂作一综述,为佐剂疫苗的研发提供参考。

    2019年04期 v.32 476-481页 [查看摘要][在线阅读][下载 218K]
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  • 代谢组学在动物应激研究中的应用

    李文杰;连帅;王立鹏;杨焕民;

    代谢组学是生物机体在病理生理、遗传、环境或行为的不同刺激下,对机体所产生代谢产物变化的研究,是生物领域研究中一种重要的研究手段,已在植物学、营养学、中药学、微生物学、临床疾病诊断等研究领域得到广泛应用。动物应激一直是畜牧行业关注的热点,许多因素可导致动物应激,常见的应激类型有冷应激、热应激、氧化应激、束缚应激、噪音应激、运输应激,还有不可预知的慢性应激等,这些应激均可对动物机体产生一定危害。目前,代谢组学也已应用于动物应激领域的研究,本文对代谢组学在动物的冷应激、热应激、氧化应激及束缚应激研究中的应用作一综述。

    2019年04期 v.32 482-484+488页 [查看摘要][在线阅读][下载 152K]
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专题报道

  • 铝佐剂及佐剂吸附疫苗质量标准的探讨

    王晓娟;马锐;曹琰;郭中平;

    <正>1926年,Glenny首次以铝盐吸附白喉类毒素,发现其免疫效果远超过液体类毒素,标志着铝佐剂出现,佐剂疫苗诞生。随着生物技术的迅速发展,重组亚单位疫苗、抗独特型抗体疫苗、核酸疫苗及合成肽疫苗等得到开发,这些疫苗抗原纯度高,相对分子质量小,疫苗的不良反应少,而这些抗原的免疫原性普遍较弱。为提高抗原的有效性,须在抗原中添加佐剂,以增强其诱导免疫反应能力,因此佐剂疫苗

    2019年04期 v.32 485-488页 [查看摘要][在线阅读][下载 112K]
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