中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • b型流感嗜血杆菌结合疫苗质量控制过程中D-核糖检测干扰因素的分析

    邱远涛;雷永红;杨帆;王治伟;党晓燕;高强;林纪胜;

    目的分析b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗质量控制过程中十六烷基三甲基溴化铵(etyltrimethylmmonium ammonium bromide,CTAB)、乙醇和氯化钠对Hib多糖D-核糖检测方法的干扰。方法模拟Hib结合疫苗生产过程中CTAB、乙醇和氯化钠的浓度,分别制备含不同终浓度CTAB(0. 03%、0. 06%、0. 13%、0. 25%、0. 50%、1. 00%)、乙醇(10%、20%、30%、40%、45%、50%)、氯化钠(0. 06、0. 13、0. 25、0. 50和1. 00 mol/L)的D-核糖样品,检测样品的D-核糖含量,并计算回收率。结果 CTAB终浓度为0. 25%和1. 00%时,D-核糖回收率分别为92. 0%和53. 6%,乙醇终浓度为40%(V/V)和50%(V/V)时,D-核糖回收率分别为93. 6%和88. 0%,随着CTAB和乙醇浓度的增加,D-核糖的回收率降低。氯化钠浓度为0. 00~1. 00 mol/L时,D-核糖回收率为97. 6%~100. 8%,随着氯化钠浓度增加,D-核糖的回收率趋于平稳。结论高浓度CTAB和乙醇对D-核糖含量检测有干扰,氯化钠不影响D-核糖检测结果。

    2019年09期 v.32 947-949+957页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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基础研究

  • 绿豆肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

    刁静静;迟治平;孙迪;陈洪生;张丽萍;左锋;

    目的探讨绿豆肽对RAW264. 7巨噬细胞的免疫调节作用。方法在体外培养的RAW264. 7巨噬细胞中,分别加入10、100、200和400μg/mL的绿豆肽,检测RAW264. 7巨噬细胞的增殖能力、吞噬能力、SOD酶活力、NO含量和细胞因子分泌量,同时检测绿豆肽对经脂多糖(lipo-polysaccharide,LPS)诱导的RAW264. 7巨噬细胞中细胞因子分泌和LC3、p62蛋白表达水平的影响。结果与空白对照组比较,不同浓度绿豆肽组RAW264. 7巨噬细胞的增殖率及吞噬率显著提高(P <0. 05),400和200μg/mL组的SOD酶活力、NO含量及分泌TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著升高(P <0. 05)。各浓度绿豆肽均可显著抑制LPS诱导RAW264. 7巨噬细胞的TNF-α、IL-1β和IL-6分泌量(P <0. 05),浓度为400μg/mL时,上述细胞因子的分泌量与空白对照组差异无统计学意义(P> 0. 05)。不同浓度绿豆肽均可降低LPS诱导RAW264. 7巨噬细胞胞内LC3的含量,上调p62蛋白的表达量。结论绿豆肽可激活巨噬细胞、增加自身代谢酶活力、释放细胞因子,通过抗炎作用及抑制细胞自噬,从而提高宿主细胞的免疫功能。

    2019年09期 v.32 950-957页 [查看摘要][在线阅读][下载 379K]
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  • 东南亚地区寨卡病毒的流行及结构蛋白分子进化特征分析

    林垚;洪珊;蓝青萍;孙强明;

    目的分析寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)在东南亚地区的感染传播情况,探讨其分子水平上的进化特征。方法用关键词和主题词检索ZIKV在东南亚地区暴发感染流行情况。在GenBank中获取ZIKV东南亚病毒株全基因序列,采用BIOEDIT软件进行比对;利用MEGA 7. 0软件绘制系统进化树;将结构蛋白核苷酸翻译获得其相应的氨基酸序列,分析突变情况;统计不同株型间结构蛋白核苷酸突变和氨基酸替代位点;预测包膜蛋白第三结构域(envelop domainⅢ,ED-Ⅲ)的二级结构。结果 ZIKV在东南亚国家均有血清学感染或回顾性检测阳性报道,其中越南、泰国和新加坡ZIKV感染病例较多,疾病负担较为严重。系统进化树表明,东南亚ZIKV株均属于亚洲型,2016年新加坡株(序列号:KY241788)与2015年巴西株亲缘关系最近,1966年分离的马来西亚株与其他东南亚株亲缘关系较远。东南亚ZIKV各株型间衣壳蛋白(capsid protein,C)的碱基突变点为22处,突变率为6. 36%,造成非同义氨基酸突变点为19处,突变率为16. 52%。前膜蛋白(pre-membrane protein,prM)的碱基突变点为51处,突变率为10. 12%,造成非同义氨基酸突变点为37处,突变率为22. 02%。包膜蛋白(envelope protein,E)的碱基突变点为141处,突变率为9. 33%,造成非同义氨基酸突变点为101处,突变率为20. 04%。ED-Ⅲ二级结构预测结果显示,在该区域2株代表株有相同数量的蛋白结合位点,代表株2(1966 Malaysia KX377336)存在1个蛋白结合位点富集区(ED-Ⅲ:55-63),而代表株1(2014 Thailand KU681081)蛋白结合位点分布较均匀,代表株2的ED-Ⅲ存在1个二硫键,而代表株1不存在,代表株1(ED-Ⅲ:79-80)存在1个解螺旋,而代表株2不存在。结论通过病例统计分析、系统发育分析、蛋白质核苷酸及氨基酸序列比较分析、ED-Ⅲ二级结构预测,为研究东南亚地区ZIKV不同株型间的生物学和流行致病性差异提供参考。

    2019年09期 v.32 958-964页 [查看摘要][在线阅读][下载 775K]
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  • 乳酸杆菌对子宫内膜上皮细胞增殖的影响

    何金英;朱素芳;莎如拉;孙文芳;马玉珍;

    目的研究乳酸杆菌对子宫内膜上皮细胞增殖的影响。方法以内蒙古地区68名健康生育期女性人群作为研究对象,取阴道分泌物,经条件培养基分离纯化乳酸杆菌,通过染色、酶触反应、产H2O2等试验确定其生物学性质,通过16sRNA基因扩增及测序对乳酸杆菌进行分类。将不同浓度(10、102、103和104个/mL)优势乳酸杆菌与子宫内膜上皮细胞共培养12、24、36和48 h,采用CCK-8法检测乳酸杆菌对子宫内膜上皮细胞增殖作用的影响,以确定乳酸杆菌对子宫内膜上皮细胞作用的最适浓度和时间。结果经过分离纯化得到141株乳酸杆菌,草酸铵结晶紫染色呈紫色,为革兰阳性菌,所有菌落均能产生H2O2,但产H2O2能力有差别。经16sRNA基因扩增及测序共分为6种乳酸杆菌,其中卷曲乳杆菌(L. crispatus)、格氏乳杆菌(L. asseri)和阴道乳杆菌(L. vaginalis)为内蒙古女性人群阴道中优势乳酸杆菌菌属,分别占54. 61%、24. 82%和12. 06%;不同浓度L. crispatus均能促进子宫内膜上皮细胞增殖,且乳酸杆菌浓度103个/mL、作用36 h时,子宫内膜上皮细胞增殖最显著,增殖率可达93. 10%。结论乳酸杆菌可促进子宫内膜上皮细胞的增殖,为乳酸杆菌促进子宫内膜局部的损伤修复提供了理论依据。

    2019年09期 v.32 965-969页 [查看摘要][在线阅读][下载 363K]
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  • 籽鹅羽束性状分析及SOX5候选基因生物学功能预测

    张宇辰;周瑞进;袁建彬;李文杰;臧树成;王立鹏;朗立敏;陈妍;杨焕民;

    目的分析籽鹅头顶部的表型性状-羽束性状(crest trait),并预测SOX5候选基因的相关生物学功能,从而进一步揭示禽类表型性状与调控基因的作用机制。方法选取无羽束公鹅6只,有、无羽束母鹅各15只,建立两个资源群体,有羽束群(crest population,C):3只无羽束公鹅,15只有羽束母鹅;无羽束群(non-crest population,NC):3只无羽束公鹅,15只无羽束母鹅。两个试验群体同舍分组饲养,收集试验蛋孵化,通过后代表型分离比,分析羽束性状遗传规律。采集1、14、21日龄肝脏、头顶部皮肤组织,采用qRT-PCR方法测定各组织中SOX5基因相对表达量,并通过生物信息方法进行关联性分析。结果观察籽鹅表型分离比,证明无羽束性状符合隐性遗传规律,有羽束性状受常染色体显性基因调控。在1日龄雏鹅肝脏组织中,C群SOX5基因的相对表达量显著高于NC群(P <0. 01),其他时期差异虽无统计学意义(P> 0. 05),但C群仍高于NC群。随日龄增长,公鹅体重呈上升趋势,且与SOX5基因在皮肤中相对表达量变化趋势相同。经SMART、David软件预测,SOX5基因具有保守结构域,能形成具有生物学功能蛋白。结论籽鹅羽束性状类似于鸡冠表型遗传方式,受常染色体基因调控,SOX5基因为羽束性状的调控基因,且广泛参与禽类相关组织的发育过程。

    2019年09期 v.32 970-976页 [查看摘要][在线阅读][下载 441K]
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  • 枯草芽孢杆菌Expansin蛋白的原核表达及活性分析

    叶凯霞;朱华琛;赵庆新;陈洪生;

    目的原核表达枯草芽孢杆菌Expansin蛋白,并分析其促进多糖糖化的活性。方法以过夜培养的Bacillus subtilis subsp. Subtilis subtilis str. 168基因组为模板合成expansin基因;在引物的N-端添加6-his tag,PCR合成融合基因6his-expansin,构建重组质粒6his-expansin-6his-p ET28a(+)[heh-pET28a(+)],转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白6His-Expansin-6His(HEH);并对表达条件进行优化。产物经Ni-NTA纯化,检测其与多糖降解酶(polysaccharide degrading enzyme,PDE)(纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶)及多糖复合酶(polysaccharide complex enzyme,PCE)制剂的协同活性(synergistic activity,SA)。结果经双酶切鉴定,重组质粒heh-p ET28a(+)构建正确;融合蛋白HEH在0. 05 mmol/L IPTG 30℃诱导30 h的最适表达条件下,表达量约为1. 2 mg/m L,其相对分子质量为26 400,目的蛋白纯度达95%;该蛋白与纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶的SA分别为171. 53%、61. 95%、230. 00%,与PCE降解滤纸(filter paper)、秸秆(rice straw)的SA分别为312. 83%、356. 59%。结论重组的融合蛋白HEH与PDE均具有较高的协同作用,为Expansin在生物质木质纤维素糖化领域的应用奠定了基础。

    2019年09期 v.32 977-982页 [查看摘要][在线阅读][下载 295K]
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  • 黄芩苷对大肠埃希菌的抗菌活性及其作用机制

    刘昊;赵自冰;王新;

    目的探讨黄芩苷对大肠埃希菌的抗菌活性及具可能的作用机制。方法在检测黄芩苷对大肠埃希菌最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)及抑菌活力的基础上,进一步检测1倍MIC的黄芩苷对大肠埃希菌胞外乳酸脱氢酶活力、前向散射光及DNA含量的影响。结果黄芩苷对大肠埃希菌的MIC为7 mg/mL,干预2 h时即可达到抑菌活性高峰。1倍MIC的黄芩苷作用大肠埃希菌后,菌液中乳酸脱氢酶活力逐渐上升,8 h时抑菌活力高达(201. 48±19. 06)U/L。1倍MIC的黄芩苷作用大肠埃希菌2 h后,细胞体积缩小、DNA含量减少,与对照组相比,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论黄芩苷通过对大肠埃希菌细胞膜造成损伤而增加其通透性,使菌体物质大量外渗,从而实现其抗菌活性。

    2019年09期 v.32 983-986页 [查看摘要][在线阅读][下载 192K]
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诊断制剂

  • 抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品的研制

    孙彬裕;孙楠;胡泽斌;于婷;黄杰;曲守方;

    目的研制抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品。方法将抗D(IgM)杂交瘤细胞培养上清液经0. 22μm滤膜无菌过滤分装,冻干制备抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品(简称参考品)。按YY/T 1238-2014《RhD(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)》行业标准,检测其外观、pH、特异性、亲和力及效价;并由4家实验室进行协作标定,进行瓶间精密度及热稳定性试验。结果参考品外观为白色冻干粉末,复溶后为无色或淡黄色透明液体,无摇不散的沉淀及异物;pH为7. 2;效价为1∶64;与RhD阳性红细胞有凝集反应,与RhD阴性红细胞无凝集反应;凝集时间均在15 s以内,3 min凝集块均大于1 mm2。经各实验室协作标定,随机抽取的2支参考品效价均为1∶64;37℃放置3、7、14 d的效价均为1∶64。结论成功制备抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品,其瓶间精密度及稳定性均较好,可用于抗D(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)效价检测的质量控制。

    2019年09期 v.32 993-995+1005页 [查看摘要][在线阅读][下载 163K]
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  • 鲎血G因子的原核表达

    吴尚;黄慧;余华军;庞启明;卢鑫剑;张海涛;

    目的在大肠埃希菌中表达重组鲎血G因子,并检测其酶活性。方法根据大肠埃希菌偏好性优化G因子成熟肽编码序列,将G因子α亚基及β亚基克隆至原核表达载体pET32a-sumo上,分别构建pET32a-sumo/factorG-α及pET32a-sumo/factorG-β原核表达质粒,转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达;产物经Ni-NTA亲和层析,SUMO蛋白酶切割融合伴侣,获得重组目的蛋白factorG-α及factorG-β;将二者等摩尔质量重组获得复合物G,荧光底物Boc-Glu-(OBzl)-Gly-Arg-MCA检测其酶活性。结果经PCR及测序鉴定,重组质粒pET32a-sumo/factorG-α及p ET32a-sumo/factorG-β构建正确;表达蛋白均以包涵体的形式存在沉淀中,表达量占菌体总蛋白的30%及45%;纯化的factorG-α及factorG-β蛋白相对分子质量约为74 000和31 000,每1 L LB培养基酶切回收蛋白分别为0. 7和1. 7 mg。factorG-α及factorG-β蛋白与荧光底物几乎不反应,而复合物G可与荧光底物反应产生较高的荧光强度。结论成功表达了具有酶活性的鲎血G因子,为进一步探讨鲎血G因子的生物学功能及新型真菌感染检测试剂盒开发奠定了基础。

    2019年09期 v.32 996-1000页 [查看摘要][在线阅读][下载 296K]
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临床研究

  • 吉林地区食源性肠炎沙门菌流行病学特征及同源性分析

    周凤岩;凤淳雅;郭世杰;陶娜;

    目的运用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)技术,分析吉林地区2014~2018年食源性疾病患者粪便样本中分离的肠炎沙门菌(Salmonella enteritidis)的同源性及分子流行病学特征,为鉴定溯源及防控预警提供数据支持。方法对吉林地区2014~2018年食源性疾病患者1 000份粪便样本中分离的肠炎沙门菌进行鉴定,确定血清型及PFGE分子分型,采用Bio Numerics version 6. 6软件对PFGE图谱进行数据分析,绘制聚类树状图。结果分离出符合O(1,9,12):H(g,m)的肠炎沙门菌51株,检出率为5. 1%;经聚类分析,带型相似度为51. 3%~100%,共获得12种带型,其中,PS3与PS4型菌株带型相似度为93. 7%,为近年主要流行菌株,且菌株同源性较高。结论吉林地区肠炎沙门菌PFGE型别具有多样性和复杂性,具有优势克隆系。

    2019年09期 v.32 1001-1005页 [查看摘要][在线阅读][下载 429K]
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  • 乙型脑炎减毒活疫苗对中国主要流行基因型毒株的免疫效果

    刘欣玉;鲁旭;赵丹华;徐宏山;李玉华;

    目的评价乙型脑炎(简称乙脑)减毒活疫苗SA14-14-2免疫人体后对中国流行的两种主要基因型(Ⅰ型和Ⅲ型)的免疫效果。方法收集乙脑减毒活疫苗免疫的健康儿童免疫前及免疫后28 d采集的血清样品,采用蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)检测血清中对中国流行的两种基因型乙脑病毒的中和抗体,并计算血清中和抗体阳转率。结果疫苗免疫后对国内流行的基因Ⅰ型和Ⅲ型乙脑病毒均产生了较高水平的中和抗体,血清中和抗体阳转率分别为90. 0%和92. 0%,几何平均滴度(GMT)分别为1︰26. 2和1︰27. 5,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论乙脑减毒活疫苗免疫人体后,对中国流行的2种基因型乙脑病毒均具有较好的免疫效果。

    2019年09期 v.32 1006-1009页 [查看摘要][在线阅读][下载 161K]
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技术方法

  • b型流感嗜血杆菌荚膜多糖定量~1H-NMR法的建立及验证

    许美凤;毛琦琦;赵丹;陈苏京;李亚南;李茂光;叶强;

    目的建立测定b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖绝对含量的定量~1H核磁共振法(nuclear magnetic resonance,NMR,即~1H-NMR法),并进行验证。方法精密称取Hib荚膜多糖粉末,重水溶解,配制一定浓度的供试品多糖溶液;采用Bruker Avance-600型超导核磁共振波谱仪,设置NMR实验参数条件,以重水为溶剂,二甲基砜为内标物建立定量~1H-NMR法进行多糖含量测定;对该方法进行专属性、准确度、线性、精密度及耐用性验证;应用建立的定量~1H-NMR法及化学法测定5批Hib荚膜多糖含量。结果经~1H-NMR谱、~(13)C-NMR谱、~1H-~1H COSY谱及~1H-13C HSQC谱归属显示,Hib荚膜多糖的定量峰(δ_(H)5. 06)及内标物二甲基砜的定量峰(δ_(H)3. 14)分离良好,互不干扰,且不受样品内其他谱峰的干扰,方法专属性良好;供试品溶液加入100、150及200μL国际标准品,加标回收率在101%~102%;Hib多糖质量浓度在1~20 mg/mL范围,线性方程为y=0. 234 3 x-0. 002 6(R~2=1. 000 0);供试品溶液6次重复性及中间精密度测定的定量峰积分面积比值的RSD分别为0. 78%及0. 60%,精密度良好;5 mg/mL的供试品溶液在不同脉冲角度及不同延迟时间定量峰积分面积比的RSD分别为0. 07%及0. 13%,耐用性良好。5批荚膜多糖经定量~1H-NMR法及化学法检测,核糖含量均在《中国药典》三部(2015版)规定合格范围内(320~410 mg/g)。结论成功建立了测定Hib荚膜多糖含量的定量~1H-NMR法,该方法具有良好的专属性、准确度、线性、精密度及耐用性,为Hib疫苗的质量控制研究奠定了基础。

    2019年09期 v.32 1010-1014+1019页 [查看摘要][在线阅读][下载 294K]
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  • 人类乳头瘤病毒特异性抗体单一稀释度ELISA检测方法的建立、验证及初步应用

    赵慧;潘晖榕;李娟;林之杰;林碧珍;李长贵;

    目的建立人类乳头瘤病毒(human papillomaviruses,HPV)特异性抗体单一稀释度ELISA检测法,并进行方法验证及初步应用。方法以HPV16及HPV18 L1病毒样颗粒蛋白作为包被抗原,血清样品采用单一稀释度稀释(未免疫血清及免疫后血清分别进行100及500倍稀释),建立HPV特异性抗体的单一稀释度ELISA检测法,并验证方法的特异性、准确性、线性范围、检测限度及精密性。采用建立的方法检测自然感染HPV及接种疫苗后的血清样本(各28份),并与假病毒中和试验(pseudovirus-based neutralization assay,PBNA)检测结果进行比较。结果 100份阴性血清样本HPV16及HPV18 IgG抗体均为阴性;HPV16及HPV18抗体滴度的平均回收率分别为74%和73%;HPV16及HPV18抗体的定量检测范围分别为0. 049~0. 370 IU/mL及0. 030~0. 231 IU/mL;该方法重复性CV在2. 9%~6. 6%之间,日间精密性CV在7. 7%~11. 9%之间。接种疫苗后的血清样本检测值显著高于自然感染样本(P <0. 05),接种疫苗后的血清样本检测值与PBNA法检测结果具有显著相关性(HPV16和HPV18抗体检测结果的r值分别为0. 727和0. 800)。结论成功建立了HPV特异性抗体的单一稀释度ELISA检测法,且具有较好的特异性、准确性、精密性,可用于HPV疫苗免疫效果评价及疫苗上市后抗体水平的监测。

    2019年09期 v.32 1015-1019页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K]
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  • 应用流式细胞仪检测聚合物纳米胶束表面抗体偶联效率

    田九博;张丽娜;王萱;马培元;穆秀丽;孟涛涛;孟凡秀;弓韬;于保锋;

    目的探索应用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测纳米级聚合物胶束(polymeric micelles,PMs)表面偶联抗体效率的方法。方法将DMPE-PEG-Maleimide、DPPE-PEG-Maleimide、DSPE-PEG-Maleimide、DOPE-PEG-Malei-mide、DLPE-PEG-Maleimide聚合物纳米胶束分别与Anti-GOLPH2抗体共同孵育,使其彼此偶联;再与SNU-423细胞共同孵育,采用FCM检测SNU-423细胞膜表面GOLPH2抗原的阳性表达率,并比较各类聚合物纳米胶束与AntiGOLPH2抗体的相对偶联效率。结果 SNU-423细胞表面GOLPH2抗原的阳性表达率为1.23%;在各类聚合物纳米胶束中,DLPE-PEG-Maleimide与Anti-GOLPH2抗体的相对偶联效率最高,且与抗体浓度呈正相关。结论应用FCM检测聚合物纳米胶束表面抗体偶联效率的方法,能在一定程度上反映抗体与聚合物纳米胶束的抗体偶联情况,其检测结果具有一定的参考价值。

    2019年09期 v.32 1020-1024页 [查看摘要][在线阅读][下载 311K]
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  • 两种毛细管电泳方法分析重组人促红素异构体含量的比较

    李响;史新昌;于雷;周勇;饶春明;

    目的全柱成像毛细管等电聚焦电泳(whole column imaging detection-capillary isoelectric focusing electrophoresis,WCID-CIEF)及毛细管区带电泳法(capillary zone electrophoresis,CZE)检测分析重组人促红素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)异构体含量。方法 5批rhEPO原液同时经WCID-CIEF法(采用4 mol/L尿素,0. 35%甲基纤维素,4%两性电解质混合溶液作为样品缓冲液,聚焦电压为3 k V,预聚焦时间1 min,聚焦时间7 min,成像波长280 nm)及CZE法(采用0. 01 mol/L NaCl、tricine、NaAC和7 mol/L Urea及2. 5 mmol/L腐胺混合溶液作为电泳缓冲液,pH 5. 55,进样压力3. 45 kPa,进样时间10 s,分离电压15. 4 kV,分离时间80 min,检测波长214 nm)检测分析异构体含量。结果 WCID-CIEF及CZE法测定5批rhEPO原液均有5~8条异构体条带,异构体含量差异无统计学意义(P> 0. 05),具有明显的相关性(r为0. 999),各峰面积占比相差总和小于3%。结论虽然WCIDCIEF谱图及CZE谱图的含义略有不同,但两种毛细管电泳方法的分析结果基本相同,均可满足rhEPO异构体的质量控质需求。

    2019年09期 v.32 1025-1029页 [查看摘要][在线阅读][下载 230K]
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  • 病毒灭活/去除工艺对抗CD20单克隆抗体生物学活性影响评价方法的建立

    刘春雨;张峰;于传飞;武刚;崔永霏;黄璟;王兰;

    目的建立病毒灭活/去除工艺对抗CD20单克隆抗体生物学活性影响的评价方法。方法以Raji细胞株作为靶细胞,通过补体依赖性细胞毒(complement dependent cytotoxicity,CDC)作用,用CCK-8试剂进行抗CD20单克隆抗体的生物学活性检测,并验证系统适应性。以抗CD20单克隆抗体参比品计算低pH及纳米膜过滤(简称纳滤)2种病毒灭活/去除工艺前后样品的相对百分效价,并对检测结果进行统计学分析。结果抗CD20单克隆抗体CDC生物学活性存在量效关系,且符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)~B]+D。该方法的曲线平行性较好,且有良好的稳定性和有效性。低pH病毒灭活工艺处理前后样品的相对效价分别为(97. 22±2. 49)%和(87. 84±5. 60)%,相对变化值的平均平方值为10. 57%;纳滤病毒去除工艺处理前后样品的相对效价分别为(87. 65±4. 31)%和(89. 43±7. 33)%,相对变化值的平均平方值为4. 17%。2种工艺3次检测间差异的单因素方差分析及处理前后配对t检验差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论以抗CD20单克隆抗体为目标抗体,建立了病毒灭活/去除工艺对生物学活性影响的评价方法,该方法具有良好的平行性、稳定性及有效性,为其他单克隆抗体类治疗药物的质量控制提供了实验依据。

    2019年09期 v.32 1030-1035页 [查看摘要][在线阅读][下载 250K]
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  • 阴离子交换层析处理对静注人免疫球蛋白(pH 4)制品的影响

    张学成;马小伟;安文琪;梁雪爽;罗坚;王承勖;吴静娟;李光飞;

    目的分析在低温乙醇蛋白分离法基础上引入阴离子交换层析(anion exchange chromatography,AEX)纯化工艺处理,对静注人免疫球蛋白(pH 4)制品质量的影响。方法检测并对比分析低温乙醇蛋白分离法及联合AEX纯化工艺制备的静注人免疫球蛋白(pH 4)制品分子量大小分布、抗补体活性(anticomplement activity,ACA)、抗-HBs效价、白喉抗体效价、IgA含量、抗体Fc段生物学活性、IgG亚型分布、N-糖基化类型、蛋白质二级结构和三级结构的异同。结果在低温乙醇蛋白分离法基础上,引入AEX纯化工艺处理,可大幅度降低静注人免疫球蛋白(pH 4)制品中IgA含量;有利于去除制品中三级结构发生改变的蛋白质;未对制品其他质量指标产生显著影响。结论在低温乙醇蛋白分离法基础上,引入AEX纯化工艺可提高静注人免疫球蛋白(pH 4)制品质量。

    2019年09期 v.32 1036-1042页 [查看摘要][在线阅读][下载 327K]
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  • 09CS中11个血清型肺炎球菌荚膜多糖抗体IgG含量质控检测范围的建立

    石刚;李红;郭丽娜;卢旭;毛琦琦;陈晓航;王欣茹;陈翠萍;叶强;

    目的建立09CS中11个血清型(2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F)肺炎球菌(pneumococcus,Pn)荚膜多糖抗体IgG含量的质控检测范围。方法将细胞壁C多糖(CPS)分别与Pn22F、Pn25两个型别多糖混合,制备CPS+Pn22F和CPS+Pn25两种样品吸收液,稀释09CS后,ELISA法检测13价肺炎链球菌结合疫苗(pneumococcal conjugate vaccine,13PCV)的13个血清型IgG抗体水平,验证两种吸收液检测结果的一致性。将09CS作为待测血清(用CPS+Pn25稀释),第二代国际肺炎参考血清007sp为标准血清(用CPS+Pn25稀释),第一代国际参考血清89SF为质控血清(用仅含CPS的吸收液稀释),采用ELISA法连续检测待测血清52次,计算11个血清型抗体浓度平均值(GMC)、标准偏差(SD)和变异系数(CV)、U检验中99%置信区间下的正态分布范围。结果 09CS经两种吸收液吸收后,13个型别的检测结果一致性较好,r2=0. 983 5,且差异无统计学意义(P> 0. 05)。11个血清型有效定值异常率均低于20%,异常率最大的型别为Pn20,异常率为17. 3%;各型的CV为7. 55%~12. 86%,均低于15%;Pn2、Pn8、Pn9N、Pn10A、Pn11A、Pn12F、Pn15B、Pn17F、Pn20、Pn22F、Pn33F血清型荚膜多糖抗体IgG含量的质控检测范围分别为18. 56~31. 45、13. 35~26. 61、11. 90~23. 63、14. 23~25. 74、5. 96~8. 84、3. 70~6. 47、23. 89~37. 50、10. 68~16. 90、15. 97~24. 31、10. 63~17. 61、24. 24~47. 55μg/mL。结论建立了09CS中11个血清型Pn荚膜多糖抗体IgG含量的质控检测范围,可应用于Pn疫苗临床血清荚膜多糖抗体IgG含量的ELISA法检测。

    2019年09期 v.32 1043-1047页 [查看摘要][在线阅读][下载 224K]
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综述

  • 以白细胞介素-6信号通路为靶点的生物技术药物研究进展

    贾春翠;饶春明;于雷;

    白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)为一种多功能的细胞因子,其仅通过与自身受体形成复合体才能进行信号转导从而发挥生物学作用。鉴于IL-6在多种疾病中发挥的重要作用,随着IL-6信号转导系统研究的日益深入,以IL-6及其受体IL-6R、gp130与sIL-6R等为靶点的药物筛选和药物设计将为多种疾病的治疗开辟新的途径。本文以IL-6信号通路为靶点的生物技术药物研究进展作一综述。

    2019年09期 v.32 1048-1053页 [查看摘要][在线阅读][下载 220K]
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疫苗园地·卫生健康事业发展70年巡礼

  • 预防医学的守望

    他们是前辈,他们是老师,他们是院士,他们是国家的栋梁,他们是时代的中流砥柱。他们亲历、见证、参加、领导了中国预防医学从起步到发展的全过程。他们急国家所急,想国家所想,终其一生都在和各种细菌病毒作斗争,在随时可能爆发的"火山口"上眺望、决择、守护、担当,他们为突发传染病的防控构建了一座坚固的堡垒,为人民的健康守住了第一道安全防线。

    2019年09期 v.32 945-946页 [查看摘要][在线阅读][下载 101K]
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专题报道

  • 国家药品标准物质在生物制品质量控制中的应用

    曹丽梅;刘明理;袁伟媛;王一平;徐苗;

    <正>药品标准物质为药品检定的重要物质基础,是控制药品质量必不可少的工具[1]。根据《中华人民共和国药品管理法》[2]《药品注册管理办法》,中国食品药品检定研究院(简称中检院)负责对标定的药品标准物质从原材料选择、制备方法、标定方法、标定结果、定值准确性、量值溯源、稳定性、分装和包装条件等资料进行全面技术审核,并作出可否作为国家药

    2019年09期 v.32 1054-1056页 [查看摘要][在线阅读][下载 94K]
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