中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗园地·卫生健康事业发展70年巡礼

  • 杨晓明:科技创新的探索者,疫苗行业的领路人

    10月,我们讲述一个隐在时间长河深处激扬、温润、跌宕、饱满丰盈的故事,记录追寻无畏困难用汗水和坚持换来成功的先锋。时光流转30余载,初心和理想始终是他前行的动力。他是科技创新的探索者,疫苗行业的领路人,是学者型的企业家。他精准的洞见与前瞻的判断树立了行业的标尺,他的故事蕴藏着中国生物制品行业发展的一段历史和画面。

    2019年10期 v.32 1057-1058页 [查看摘要][在线阅读][下载 74K]
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疫苗研究

  • 腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1反向遗传系统的建立

    高雅丽;张勇侠;陈宗香;康庄;罗心梅;丛聪;李立;刘兰军;

    目的建立腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1(JL1)反向遗传系统,获得单一成分的拯救病毒JL1~R。方法将JL1全长c DNA基因序列分为7个片段(F1~F7),在F7片段的3′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,Hdv RZ),分段合成后分别插入载体pT7-MCS3中,根据每段重叠区域的酶切位点拼接,构建全长表达质粒pT7-MCS3-MUV_(JL1)(HdvRz);同时构建表达腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、聚合酶蛋白(L)的3个辅助质粒;将全长表达质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒pCDIBP-T7RNAP共同电转染Vero细胞。对获得的病毒JL1~R进行测序、病毒滴度及中和抗体测定。结果拯救病毒JL1~R基因组SH及HN片段与疫苗株JL1对应片段的理论序列一致;JL1~R经Vero细胞连续传代培养2~10代病毒滴度均在6 lg CCID_(50)/mL以上;JL1~R与疫苗株S_(79)诱发抗MuV抗体滴度接近。结论成功构建了MuV疫苗株JL1的反向遗传操作系统,获得的单一成分拯救病毒JL1~R可作为腮腺炎疫苗株的备选株,解决了S_(79)疫苗生产中毒种及疫苗株的成分、纯度和批间一致性等问题,进一步提高了国内腮腺炎疫苗的免疫效果。

    2019年10期 v.32 1059-1063+1069页 [查看摘要][在线阅读][下载 319K]
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基础研究

  • 柯萨奇病毒A组16型抗原表位预测

    白晗;马淑花;郭会杰;刘少华;李秀玲;

    目的应用模拟表位策略研究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)抗原表位。方法分别以具有中和活性的抗CA16单克隆抗体2C6、4F9、1D8为靶分子,在噬菌体12肽库中淘选可与之特异性结合的阳性克隆,对淘选得到的阳性克隆进行序列测定和比对,并采用Phage ELISA法进行特异性鉴定。同时利用生物信息学方法对CA16衣壳蛋白理化性质进行分析,并与阳性噬菌体多肽序列和结构进行比对,预测CA16中和抗原表位。结果经噬菌体12肽库筛选,单克隆抗体2C6、4F9、1D8淘选阳性噬菌体富集率分别为2.39×10~3、1.32×10~4和3.762×10,获得可与单克隆抗体2C6、4F9、1D8结合的阳性克隆分别为10、11、6种,其中各组共有基序分别为K+X+WW和N/Q+S/T+Y/F/W、K+X+WW+D/E、T+X+P+W。Phage ELISA特异性鉴定阳性克隆肽CA1和CB1、FB3和FC3、DA1和DA2、DA5分别强特异性结合单克隆抗体2C6、4F9、1D8。经计算机预测分析,确定了主要位于CA16 VP1 800-810区域,并涉及VP4、VP3上的多个中和表位区域。结论应用模拟表位策略成功筛选出了CA16中和抗原表位,为CA16蛋白抗原结构、新型表位疫苗及诊断试剂的进一步研究奠定了基础。

    2019年10期 v.32 1064-1069页 [查看摘要][在线阅读][下载 289K]
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  • Ⅲ型登革病毒在C6/36及Vero细胞中复制对其毒力的影响

    林垚;洪珊;王晓丹;陈俊英;潘玥;孙强明;

    目的探讨Ⅲ型登革病毒(dengue virus,DENV)在C6/36和Vero细胞中复制对其毒力的影响。方法将DV3-1及DV3-2两株Ⅲ型DENV在C6/36细胞上接种传代培养,待其毒力稳定再接种至Vero细胞连续传代培养。用Ⅲ型DENV标准质粒检测不同代次病毒拷贝数,PCR扩增获得传代毒种全长基因序列,并与原代病毒基因序列进行比对。结果 DV3-1在C6/36细胞上传代至第17代次(P17-C6/36)时毒力保持稳定,DV3-2在盲传过程中均未见明显的细胞病变;将DV3-1和DV3-2第17代次病毒在Vero细胞上继续传代,DV3-1传至第10代次(P10-Vero)CPE为40%,DV3-2传至第4代次CPE达30%。DV3-1在P17-C6/36时具有较高的病毒拷贝数,在P0(原代病毒)及P10-Vero时病毒拷贝数偏低。与P0比较,P17-C6/36及P10-Vero全长碱基共16处发生突变,导致12个氨基酸的非同义突变,其中P0和P10-Vero在第5 826、6 251、7 907位点碱基相同,P17-C6/36相应的氨基酸位点(第1 942、2 084、2 636位点)均发生非同义突变。结论传代细胞更换可对Ⅲ型DENV的毒力造成影响,多次传代及更换细胞传代后仍可能发生回复突变。本研究为后续DENV减毒策略的研究提供了实验依据。

    2019年10期 v.32 1070-1073+1079页 [查看摘要][在线阅读][下载 308K]
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  • cGAMP与幽门螺杆菌蛋白抗原肌肉注射诱导BALB/c小鼠免疫应答初步分析

    陈敬;钟佑秀;刘钰;汤重发;张燕斌;魏博;刘梅影;

    目的初步分析肌肉注射免疫环鸟-腺二核苷酸(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate,cGAMP)与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H. pylori)蛋白抗原在BLAB/c小鼠中诱导的免疫应答。方法将BALB/c小鼠随机分成4组,cGAMP组、抗原组(H. pylori蛋白抗原)、cGAMP+抗原组及对照组(未免疫),肌肉注射免疫小鼠。间接ELISA法测定免疫后小鼠血清中抗原特异性IgG抗体、胃组织及粪便上清液中IgA抗体;CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞体外增殖水平;酶联免疫斑点法(ELISpot)分析脾淋巴细胞分泌抗原特异性细胞因子水平。结果经肌肉注射免疫,cGAMP+抗原组可诱导小鼠产生显著高于对照组的血清IgG抗体应答(P <0. 01);可诱导胃肠道黏膜产生显著高于单独抗原组的特异性IgA抗体应答(P <0. 05);体外孵育H. pylori蛋白抗原和脾淋巴细胞,促进了淋巴细胞的增殖,cGAMP+抗原组显著高于单独抗原组(P <0. 01);与单独抗原组及对照组比较,cGAMP+抗原组免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞中抗原特异性IFNγ分泌细胞数量最多(P <0. 01)。结论 cGAMP通过肌肉注射途径可诱导BLAB/c小鼠对H. pylori蛋白抗原的体液免疫应答及脾脏中抗原特异性淋巴细胞免疫反应,其具有作为肌肉途径免疫H. pylori蛋白疫苗佐剂的潜质。

    2019年10期 v.32 1074-1079页 [查看摘要][在线阅读][下载 289K]
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  • 人乳头瘤病毒31型L1病毒样颗粒在毕赤酵母中的表达及其免疫原性初步评价

    蔡蓓蓓;王文伟;仝光杰;王蓓;楼觉人;胡海涛;

    目的在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)31型L1病毒样颗粒(virus-like particles,VLP),并初步评价其免疫原性。方法构建HPV31 L1四拷贝重组表达质粒,电转化毕赤酵母KM71,甲醇诱导表达蛋白。将重组菌经30 L发酵罐发酵,产物分离纯化,用纯化样品免疫小鼠,采用半数有效剂量(median effective dose,ED50)初步评价表达产物的免疫原性。结果经双酶切鉴定,四拷贝重组表达质粒构建正确。表达产物可与小鼠抗HPV L1单抗发生特异性结合。纯化产物在透射电镜下为直径60 nm的VLP结构,相对分子质量约55 000,纯度达95%以上。小鼠体内效价ED50值为0. 018μg。结论成功在毕赤酵母中表达了HPV31型L1 VLP,其在小鼠体内具有良好的免疫原性。

    2019年10期 v.32 1080-1083页 [查看摘要][在线阅读][下载 252K]
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  • 肾综合征出血热病毒PS-6株全基因组序列分析

    王伟;张朔;李文娟;梅可佳;邵燕;张颖;

    目的分析肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)疫苗用PS-6毒株的分子基础和遗传背景,从分子生物学角度确认分型。方法 PCR法扩增PS-6毒株的L、M、S片段并进行序列测定,对获得序列进行拼接及序列分析。结果 PS-6株全基因组L片段由6 533个核苷酸组成,编码2 152个氨基酸;M片段由3 617个核苷酸组成,编码1 136个氨基酸;S片段由1 702个核苷酸组成,编码430个氨基酸。PS-6毒株3个片段与Ⅰ型病毒的同源性为83%~99%,与Ⅱ型病毒的同源性为70%。结论从分子生物学角度证明疫苗用PS-6毒株为Ⅰ型出血热病毒,为进一步研究该疫苗株的基因组结构、生物学特性、免疫原性及基因工程疫苗的研制奠定了理论基础。

    2019年10期 v.32 1084-1086+1091页 [查看摘要][在线阅读][下载 191K]
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  • GⅡ.21型诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达、纯化及鉴定

    李攀;刘术敏;邓丹妹;吴常伟;程英杰;黄恩启;

    目的构建含有GⅡ.21型人诺如病毒(human norovirus,HuNoV)衣壳蛋白VP1基因的重组质粒,通过PichiaPink毕赤酵母表达VP1蛋白,并鉴定纯化产物。方法合成NoV GⅡ.21 VP1蛋白基因序列,将其连接至pPink-HC载体,构建重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1;经测序鉴定后,电转化毕赤酵母PichiaPink,甲醇诱导目的蛋白表达;采用AKTA pure M150型纯化仪纯化目的蛋白,Western blot法分析其抗原性,SEC-HPLC法检测纯化蛋白出峰时间。结果经测序鉴定,重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1构建正确;纯化的目的蛋白VP1纯度在95%以上,能与抗NoV病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)抗体发生反应;测定目的蛋白出峰时间为16. 923 min,与NoV VLP理论出峰时间一致。结论成功在毕赤酵母高表达了GⅡ.21衣壳蛋白VP1,并制备了高纯度及良好抗原性的目的蛋白,为多价重组NoV疫苗的研发及规模化生产奠定了基础。

    2019年10期 v.32 1087-1091页 [查看摘要][在线阅读][下载 278K]
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治疗制剂

  • 治疗用卡介苗在膀胱癌预防及治疗中的作用

    唐溯;刘菊;潘科锦;徐永革;曾献武;夏爽;陈佩;林萍;巩迪;

    目的探讨治疗用卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin vaccine for treatment,BCGt)在膀胱癌预防及治疗中的作用。方法 MB49细胞灌注小鼠膀胱,建立小鼠原位膀胱癌模型,进行BCGt预防性和治疗性试验,观察小鼠生存情况。末次治疗后第6天,经小鼠眼球采血,检测血清中IgG、IFNγ和IL-6的含量,同时取小鼠脾脏,检测特异性T淋巴细胞;每次治疗后检测小鼠尿液中一氧化氮(NO)含量;末次治疗45 d后进行记忆性免疫试验。结果成功建立了基于MB49细胞的小鼠原位肿瘤模型,致癌率100%。BCGt免疫预防和治疗两种方式均可延长小鼠的生存期;BCGt治疗后小鼠血清中的IgG、IFNγ、IL-6及尿液中NO含量明显升高(P <0. 05),特异性T淋巴细胞反应明显增强(P <0. 001),且可产生免疫记忆。结论 BCGt具有预防及治疗膀胱癌的作用,且BCGt抗肿瘤作用可能是通过产生IFNγ、IL-6、NO等发挥作用的。

    2019年10期 v.32 1092-1096页 [查看摘要][在线阅读][下载 334K]
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诊断制剂

  • 抗树鼩CD4单克隆抗体的制备及其生物学特性的鉴定

    吴忠香;张雪梅;徐婧雯;宋杰;李慧;朱文兵;蒋曦;李卫宇;董少忠;

    目的制备鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。方法将重组质粒p GEX-5X-1-CD4和pET30a(+)-CD4分别转化感受态E. coli BL21和BL21(DE3),经IPTG诱导表达,并通过Glutathione Sepharose 4 Fast Flow亲和层析柱纯化重组蛋白GST-CD4和His-CD4。以His-CD4蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠,经杂交瘤技术筛选出能分泌抗树鼩CD4的杂交瘤细胞株,制备小鼠腹水单克隆抗体,间接ELISA法检测效价,并通过Protein A亲和层析柱纯化获得鼠抗树鼩CD4单克隆抗体,Western blot及FACS法分析其生物学特性。结果筛选出3株能稳定分泌抗树鼩CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为37D2、38E1、39F2,腹水单克隆抗体效价分别为1∶204 800、1∶204 800、1∶3 200。经HRP标记的38E1单克隆抗体可与树鼩PBMC总蛋白发生特异性结合,经PECy5. 5标记的38E1单克隆抗体能特异性识别树鼩PBMC。结论成功制备了鼠抗树鼩CD4的单克隆抗体,为进一步对树鼩作为动物模型的研究及应用奠定了基础。

    2019年10期 v.32 1097-1101+1107页 [查看摘要][在线阅读][下载 320K]
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临床研究

  • 2017年兰州市5岁以下儿童病毒性腹泻分子流行病学分析

    王芳;靳淼;李丹地;章青;李宇宁;

    目的分析2017年兰州市5岁以下儿童病毒性腹泻病原体及其流行特点,为病毒性腹泻的防控提供科学依据。方法收集2017年就诊于兰州大学第一医院儿科的5岁以下急性腹泻患儿粪便样本219份,采用双抗体夹心ELISA法检测A组轮状病毒(rotavirus A,RVA),阳性样本采用RT-PCR法进行G/P分型;同时采用RT-PCR法鉴定人杯状病毒(human calicivirus,HuCV)、人星状病毒(human astrovirus,HAstV),PCR法鉴定腺病毒(adenovirus,AdV),阳性样本进行测序。结果 219份样本中,病毒总检出率80. 37%,其中居于首位的是RVA(51. 60%),其次为Hu CV(20. 09%)、AdV(4. 11%)及HAstV(4. 57%)。RVAG基因型中以G9(90. 27%)为主,P基因型以P[8](91. 15%)为主,其次为P[4](7. 96%),二者组合主要为G9P[8](88. 50%)。HuCV全部为诺如病毒(noruvirus,NoV),未检出札如病毒,NoV以GⅡ-4型(52. 27%)为主,其次为GⅡ-3型(36. 36%),仅1例GⅠ-3型。AdV以F组的41型(55. 56%)为主,HAstV全部为1型。病毒性腹泻的高发季节特点以RVA最为明显,在第4季度,高危人群年龄在0~17月龄。结论兰州市5岁以下儿童病毒性腹泻病原多样,RVA为最主要病原,主要流行株为G9P[8],其次为NoV,主要流行株为GⅡ-4型,与近年全国流行的优势基因型相同。

    2019年10期 v.32 1102-1107页 [查看摘要][在线阅读][下载 238K]
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技术方法

  • Y群脑膜炎球菌结合物制备过程中荚膜多糖水解条件的优化

    杨明;刘方蕾;孔素娟;刘月萍;杨淼;马钰;李阿妮;高晶晶;谭小梅;罗树权;

    目的对Y群脑膜炎球菌结合物制备过程中荚膜多糖水解条件进行优化,确定水解反应参数,以适用于后续结合物制备。方法分别使用双氧水(H2O2)和冰醋酸2种水解反应试剂,在不同浓度(H2O2分别至终浓度1%和2%,冰醋酸分别至终浓度0. 05和0. 1 mol/L)、不同温度(37和50℃)下反应不同时间,比较水解物的分子大小;采用确定的工艺参数连续制备3批多糖水解物,检测分子大小、O-乙酰基含量,并进行结构确认和抗原性分析。结果确定了Y群脑膜炎球菌多糖水解反应参数为:水解试剂冰醋酸,水解反应温度37℃,冰醋酸终浓度0. 05 mol/L,反应时间3 h。采用以上反应参数制备的3批多糖水解物在结构、特异基团及抗原性等方面完好地保留了多糖的特性,且分子大小适宜、批件一致性良好。结论优化的Y群脑膜炎球菌荚膜多糖水解反应参数可应用于多糖水解物制备,为后续稳定制备合格结合物提供了保障。

    2019年10期 v.32 1108-1111页 [查看摘要][在线阅读][下载 198K]
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  • 静注人免疫球蛋白生产工艺对凝血因子Ⅺ的去除效果

    杨帆;欧阳平;白光明;陈棚;兰学渊;

    目的评价低温乙醇及压滤生产工艺对静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)中凝血因子Ⅺ(FⅪ)的去除效果。方法取9批次低温乙醇工艺不同阶段分离的血浆蛋白及3批次FⅡ沉淀精制和制剂阶段的样品,采用部分凝血酶时间(nonactivated partial thromboplastin time,NAPTT)试验检测样品中FⅪ的含量。结果 FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离对FⅪ的去除效率约为6%,FⅠ+Ⅲ分离对FⅪ的去除效率约为154%,FⅡ分离对FⅪ的去除效率约为10%。半成品中FⅪ含量稳定,且均低于30 mIU/mL。结论低温乙醇及压滤生产工艺能稳定有效地去除IVIG中的FⅪ,确保产品质量安全。

    2019年10期 v.32 1112-1114+1125页 [查看摘要][在线阅读][下载 171K]
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  • 人源细胞间黏附分子-1基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立、验证及应用

    张海霞;李生军;陈琳;韩玉梅;李倩;赵克学;李向茸;马忠仁;李琼毅;次仁扎西;冯若飞;

    目的建立并验证细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,并用该方法检测不同细胞中ICAM-1的基因水平。方法根据GenBank中登录的ICAM-1基因序列设计并合成引物,建立ICAM-1基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法,验证方法的适用性、线性范围、灵敏性、特异性及精密性。同时采用该方法对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)、人星形神经胶质瘤细胞(u251)、人原发性肝癌细胞(PLC/PRF/5)、人胚肾细胞(HEK293)及人脐静脉内皮细胞(HuvEc)进行检测。结果该方法的溶解曲线峰单一,无非特异性产物和引物二聚体;标准质粒在6. 74×10~4~6. 74×10~9 copies/μL浓度范围内与Ct值呈良好的线性关系,线性方程为y=-3. 576 log x+42. 982,R~2=1. 000;建立方法的灵敏性是普通PCR法的10倍;该方法检测不同物种细胞无交叉反应,仅能检出人源细胞ICAM-1;批内和批间CV均<1%。不同组织来源的细胞内ICAM-1基因含量不同,其中MRC-5细胞含量最高。结论成功建立了ICAM-1基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,且具有良好的特异性、灵敏性及精密性,可用于ICAM-1基因的定量检测。

    2019年10期 v.32 1115-1120页 [查看摘要][在线阅读][下载 364K]
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  • 两种重组人乳头瘤病毒52型免疫原性检测方法相关性的比较

    王蓓;张群;仝光杰;王文伟;蔡蓓蓓;楼觉人;

    目的比较两种重组人乳头瘤状病毒52型(human papilloma viruses type 52,HPV52)免疫原性检测方法的相关性。方法分别采用假病毒体外中和试验(pseudovirus based neutralization assay,PBNA)及酶联免疫吸试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫后小鼠血清中HPV52型中和抗体滴度,比较两种检测方法的相关性。结果重组四价HPV疫苗免疫小鼠血清中,HPV52型中和抗体滴度与抗体滴度的Spearman相关系数为0. 765,P <0. 01;不同状态HPV52型VLP蛋白颗粒免疫小鼠血清中,HPV52型中和抗体滴度与抗体滴度的Spearman相关系数为0. 809,P <0. 01。结论采用PBNA法检测的HPV52型中和抗体滴度与ELISA法检测的抗体滴度具有较高的相关性。

    2019年10期 v.32 1121-1125页 [查看摘要][在线阅读][下载 202K]
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  • 牛对氧磷酶-1蛋白多克隆抗体的制备及其双抗夹心ELISA检测方法的建立

    赵畅;张江;范子玲;白云龙;孙书函;宋玉曦;夏成;

    目的制备牛对氧磷酶-1(paraoxonase-1,PON-1)蛋白多克隆抗体,并建立PON-1的双抗夹心ELISA检测方法。方法将重组牛PON-1蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,经AKTA蛋白纯化系统纯化抗体。以获得的多克隆抗体为捕获抗体,牛PON-1单克隆抗体为检测抗体,HRP标记的山羊抗小鼠IgG为二抗,构建牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测法,并对多克隆抗体(1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 600、1∶3 200、1∶6 400、1∶12 800)及单克隆抗体浓度(0. 2、0. 4、0. 8、1. 6、3. 2、6. 4 mg/mL)、包被条件(37℃孵育2 h、4℃孵育过夜)、封闭液(1%脱脂奶粉、5%脱脂奶粉、0. 5 mol/L氯化铵)、封闭条件(37℃2 h、37℃4 h、4℃过夜)进行优化,同时验证方法的线性及准确度。采用该方法及市售试剂盒同时检测酮病组及对照组奶牛血清中的PON-1含量。结果建立的双抗夹心ELISA法最适检测条件为:单克隆抗体浓度为3. 2 mg/mL,多克隆抗体工作浓度为1∶800稀释,封闭液为5%脱脂奶粉,包被及封闭条件均为4℃过夜。牛PON-1蛋白标准品浓度在90~3 125 ng/mL浓度范围内,与A_(450)值呈良好的线性关系,标准曲线方程为y=0. 618 6 x-0. 753 6,R~2=0. 981 3;5份样品检测结果均值为764. 21 ng/mL,回收率为97. 97%。市售试剂盒和本实验建立方法检测酮病组奶牛体内PON-1含量均显著低于对照组(P <0. 001)。结论成功获得了抗牛PON-1蛋白的多克隆抗体,并建立了牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测方法,且该方法具有良好的线性及准确度。

    2019年10期 v.32 1126-1130+1137页 [查看摘要][在线阅读][下载 288K]
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  • 发色底物检测法用于人纤维蛋白溶酶原纯化工艺的可行性分析

    胡勇;彭焱;陈克金;詹骞;周雁翔;岳胜兰;容胜;周志军;

    目的分析发光底物检测法用于人纤维蛋白溶酶原(plasminogen,Pg)纯化工艺的可行性。方法采用纤溶酶原测定试剂盒对ACL7000血凝仪运行发色底物法的性能进行确认;并对该方法的线性范围、准确度、精密度、选择性进行验证;应用Softmax及Statistic软件分析定标血浆及Pg纯化样品检测结果的平行性;采用验证的方法检测Pg全层析工艺样品的效价及目标样品存贮稳定性。结果 ACL7000血凝仪运行发色底物法的性能稳定。定标血浆标准曲线线性范围为0. 128~1. 28 U/mL,稀释样品回收率在92%~103%之间,R~2≥0. 99;定标血浆的高、中、低值、检测下限及正常质控血浆(control plasma normal,CPN)效价回收率批内及批间分别在91%~108%和94%~107%之间,批内及批间CV分别在0. 5%~1. 9%和0. 3%~1. 4%之间;Pg纯化各段层析缓冲液所含特殊组分除1%Tween80+0. 3%磷酸三丁酯外对Pg效价检测无影响。纯化样品Pg效价检测曲线与定标血浆曲线平行。全层析工艺Pg半成品的比活性达8 U/mg以上,效价总回收率达50%以上;Pg亲和层析洗脱液在-30℃保存42 d、18~25℃及2~8℃保存7 d效价稳定,Pg半成品在-30℃保存68 d、18~25℃及2~8℃保存38 h效价稳定。结论纤溶酶原测定试剂盒(发色底物法)具有较好的线性范围、准确度、精密度和选择性,ACL7000血凝仪运行该方法可用于Pg全层析工艺样品的效价检测,本实验为Pg纯化工艺研究奠定了基础。

    2019年10期 v.32 1131-1137页 [查看摘要][在线阅读][下载 304K]
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  • 超快速液相色谱法测定大鼠肝细胞中腺苷酸含量

    贾鹏禹;孙蕊;李良玉;韩毅强;周行;冯乃杰;

    目的建立大鼠肝细胞中3种腺苷酸[三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)]的超快速液相色谱测定法。方法制备3种腺苷酸混合标准工作液,同时将BRL大鼠肝细胞样品经超声波破碎仪处理提取目标化合物。液相色谱条件:色谱柱为Poroshell 120 SB-AQ C18(100 mm×3. 0 mm,2. 7μm),流动相为20 mmol/L磷酸氢二钠+20 mmol/L磷酸二氢钠缓冲溶液,流速为0. 20 mL/min,柱箱温度为30℃,二极管阵列检测器光谱扫描范围为190~800 nm,定量波长为259 nm,进样量为5μL。同时对方法的线性范围、稳定性、重复性及准确性进行验证。结果色谱柱对标准品和待检样品的3种腺苷酸组分分离状况良好,样品目标峰位无杂峰干扰,色谱分离在15 min内完成。各目标组分在10~100μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,检测限在0. 652~0. 793μg/mL之间;样品提取液于不同时间点进样所得ATP、ADP和AMP的峰面积RSD分别为2. 06%、1. 15%和1. 26%;6份平行样品在同一检测流程下所得的ATP、ADP和AMP峰面积的RSD分别为2. 13%、2. 04%和1. 89%;样品各组分平均回收率在97. 05%~102. 58%之间,RSD在2. 16%~2. 55%之间。结论建立了大鼠肝细胞中3种腺苷酸含量的超快速液相色谱测定法,且具有良好的线性、稳定性、重复性及准确性。

    2019年10期 v.32 1138-1142页 [查看摘要][在线阅读][下载 195K]
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综述

  • 基因编辑与诱导多能干细胞的联合应用

    蒋如如;李欣;哈小琴;

    基于干细胞的细胞疗法是目前最有潜力和创新性的方法,诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC)结合成体干细胞和胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)的优点和特征,在重编辑技术方面取得了重大进展。本文介绍了iPSC技术和位点特异性核酸酶(site specific nucleotide,SSN)介导的基因编辑工具的发展,以及这两种新技术在生物医学研究和治疗试验中的联合应用。iPSC在体外的多能特性不仅为基础研究提供了无限的细胞来源,而且还有益于人类疾病治疗药物的筛选。此外,随着基因组编辑技术的发展,通过使用核酸酶,如锌指核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)、转录激活因子样效应核酸酶(transcription activator-like effector nucleases,TALEN),以及成簇的、规则间隔短的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/Cas系统来纠正基因突变导致的疾病,以便于逆转体细胞突变引起的疾病。将i PSC和SSN技术联合起来创建具有体外同基因背景的新的可靠的人类疾病模型,为精确的细胞替代治疗提供新的解决方案。

    2019年10期 v.32 1143-1147页 [查看摘要][在线阅读][下载 193K]
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  • 基于轮状病毒VP6蛋白新型候选疫苗的研发进展

    陈肖宏;闻晓波;冉旭华;

    轮状病毒(rotavirus,RV)是一种人畜共患病原体,给畜牧业和人类健康带来巨大威胁。对RV感染的治疗,目前尚无有效药物,接种疫苗是有效防控RV性胃肠炎暴发的重要措施。目前人商品化RV疫苗均为口服减毒活疫苗,存在散毒风险及潜在安全性等问题,且该疫苗在不发达国家的免疫效力较低,因此,非复制型疫苗很可能成为主要的候选疫苗。本文以RV结构蛋白VP6为基础,对该蛋白在RV免疫应答中的作用及其在RV非复制型疫苗的研发及防治中的应用作一综述。

    2019年10期 v.32 1148-1151+1157页 [查看摘要][在线阅读][下载 200K]
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  • 整合素相关蛋白-受体信号调节蛋白α通路在肿瘤治疗及异种器官移植中的研究进展

    高境鸿;金于兰;

    目的肿瘤的产生和发展是多项因素共同作用的结果,其中,免疫系统起着至关重要的作用。整合素相关蛋白(cluster of differentiation 47,CD47)是一种广泛表达于多种细胞表面的跨膜蛋白。CD47高表达于众多肿瘤细胞表面,其受体信号调节蛋白α(signal regulatory protein α,SIRPα)主要表达在巨噬细胞表面,使癌细胞免于被巨噬细胞杀伤,造成免疫逃逸。另外,CD47-SIRPα通路也影响着异种器官移植的成功。解决不同种属生物间CD47与SIRPα一般不结合问题,可明显提高异种器官移植的成功率。本文从CD47与SIRPα的生理结构、抗肿瘤机制、相关药物的研发情况以及该通路在异种器官移植中的作用进行综述,并对该通路目前的研究进展进行介绍。

    2019年10期 v.32 1152-1157页 [查看摘要][在线阅读][下载 238K]
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专题报道

  • 我国预防性疫苗效价检测方法的现状和思考

    吴星;王晓娟;梁争论;

    <正>《中国药典》三部(2015版)中效价(效力)的定义为用适当的定量生物测定法确定的生物活性的量度~([1])。疫苗效价与其活性及预期保护效果直接相关,是疫苗有效性和生产一致性的关键指标,一般包括体内效力ED_(50)、病毒滴度、活菌数、抗原含量等项目。疫苗效价检测方法的选择主要取决于不同品种疫苗的自身特性,包括制备方法、组成成分以及对疫苗免疫机制的了解程度等,其标准一般依据临床试验结果和生产一致性数据制定。减毒活疫苗通常需检测其

    2019年10期 v.32 1158-1163+1168页 [查看摘要][在线阅读][下载 199K]
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  • 人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留控制的相关探讨

    赵欣;李敏;罗建辉;

    <正>人用狂犬病疫苗生产经历了神经组织、禽胚及细胞培养3个发展阶段~([1-2])。随着生物技术发展,不同时期生产企业采用不同细胞、工艺进行生产,制品的质量不断提升。目前,国内已上市人用狂犬病疫苗生产用细胞基质主要包括原代细胞系(primary cell lines,PCLs)、传代细胞系(continuous cell lines,CCLs)及二倍体细胞系(diploid cell lines,DCLs),代表性的细胞基质分别为原代地鼠肾细胞、Vero细胞

    2019年10期 v.32 1164-1168页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K]
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  • 膜生物反应器工艺在生物制药废水处理系统改造中的应用

    于晓达;孙永伦;

    <正>疫苗类制药废水属高浓度有机废水,含脂肪、蛋白质、氨氮等物质,难降解物多,废水水质及水量均存在较大波动,不易处理。膜生物反应器(membrane bioreactor,MBR)是一种将高效膜分离技术与传统活性污泥法相结合的新型高效废水处理工艺,采用具有独特结构的浸没式膜组件,将其置于曝气池中,经好氧曝气和生物处理后的废水,由泵通过滤膜过滤后抽出~([1])。

    2019年10期 v.32 1169-1171+1176页 [查看摘要][在线阅读][下载 185K]
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  • 疫苗运输稳定性的研究进展

    李向群;任凤兰;郑海发;

    <正>疫苗的稳定性对全球免疫规划的成功具有重大影响。国际人用药品注册技术要求国际协调会(International Conference on Harmonisation,ICH)发布的《稳定性指导原则》~([1])主要阐述的是在实时储存条件下进行疫苗稳定性研究,WHO发布的《疫苗稳定性研究指导原则》~([2])也明确要求在推荐的实时储存条件下进行稳定性和温度高于推荐储存温度下的稳

    2019年10期 v.32 1172-1176页 [查看摘要][在线阅读][下载 161K]
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