中国生物制品学杂志

CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS

疫苗研究

  • 板蓝根多糖对单纯疱疹病毒-2型DNA疫苗免疫效果的影响

    周寒鹏;陶薇;傅婷;何卓晶;洪艳;

    目的探讨板蓝根多糖(isatis root polysaccharide,IRPS)对单纯疱疹病毒-2型(herpes simplex virus type-2,HSV-2)DNA疫苗(pgD)免疫效果的影响。方法水煎醇沉法提取IRPS,苯酚-硫酸法测定含量,计算产率。将BALB/c小鼠随机分为5组:PBS对照组、pgD疫苗组(100μg)、pgD+IRPS组(100μg+150μg)、pKan+IRPS组(100μg+150μg)、IRPS组(150μg),每组8只,均经小鼠后腿肌肉注射,100μL/只,初次免疫后2周,加强免疫1次。末次免疫2周后,经眼球采血,分离血清,ELISA法检测HSV-2特异性IgG水平及IgG1、IgG2a亚型抗体滴度;无菌制备小鼠脾细胞悬液,MTS法检测脾脏T细胞增殖能力,ELISA法检测IFNγ和IL-10的含量。结果 IRPS含量约8. 745 mg,产率为87. 45%。pgD+IRPS组小鼠血清中IgG水平显著高于其他4组(P <0. 001),IgG1和IgG2a的滴度、IgG2a/IgG1比值、脾脏T细胞增殖能力、IFNγ和IL-10的含量均显著高于pgD疫苗组(P <0. 05)。结论 IRPS作为疫苗佐剂可显著增强HSV-2 DNA疫苗的免疫水平,具有良好的应用前景。

    2020年06期 v.33 609-613页 [查看摘要][在线阅读][下载 684K]
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基础研究

  • 一种铜锌超氧化物歧化酶突变体的原核表达、纯化及酶活性测定

    唐剑光;张健锋;常东英;曹玉锋;乔宏雷;高洪喜;迟春萍;

    目的原核表达、纯化一种铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)突变体,并检测其酶活性。方法将经热力学优化的Cu,Zn-SOD突变体基因亚克隆至pET-28a载体中,构建重组表达质粒SOD1-pET-28a,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达;在500 mL摇瓶培养条件下,通过改变加入Cu、Zn离子的量优化诱导表达条件;表达的重组蛋白经初步纯化后,测定酶活性。结果重组表达质粒SOD-pET-28a经双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为15 000,主要以可溶性形式表达;工程菌株在500 mL摇瓶培养条件下培养至10 h左右,A_(600)至3. 5左右时加入终浓度为0. 1 mmol/L IPTG、0. 2 mmol/L ZnCl_2、0. 5 mmol/L CuSO4,可获得最佳表达量(29. 2%);初步纯化获得的重组蛋白纯度为97. 32%,比活为5. 08×103U/mg。结论成功利用大肠埃希菌表达系统表达了一种经热力学优化的Cu,Zn-SOD突变体,初步纯化的突变体具有较好的酶活性,为进一步摸索大规模生产工艺及实际应用奠定了基础。

    2020年06期 v.33 614-618页 [查看摘要][在线阅读][下载 752K]
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  • NOD样受体家族3炎性体对氧化三甲胺诱导的大鼠心肌细胞焦亡的调控作用

    李洁;李萍;李海霞;魏静;阎春生;哈小琴;

    目的探讨NOD样受体家族3(NOD-like receptor family 3,NLRP3)炎性体对氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)诱导的大鼠心肌细胞H9c2(2-1)焦亡(pyroptosis)的调控作用。方法将H9c2(2-1)细胞分别经不同浓度TMAO处理不同时间,CCK-8法检测细胞存活率,确定最适TMAO处理浓度。在此浓度条件下,TMAO分别处理H9c2(2-1)细胞24、48及72 h,同时设对照组(未经TMAO处理的细胞),采用RT-PCR及Western blot检测H9c2(2-1)细胞中NLRP3、白细胞介素-1β(IL-1β)及胱天蛋白酶-1(Caspase-1)mRNA转录和蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞焦亡并确定焦亡时间点。于TMAO组及对照组中加入NLRP3抑制剂MCC950,处理H9c2(2-1)细胞至焦亡时间点,采用同样方法检测相关指标的变化情况,以验证TMAO的促炎作用及NLRP3炎性因子对TMAO诱导的H9c2(2-1)细胞焦亡的调控作用。结果与对照组比较,300μmol/L TMAO处理H9c2(2-1)细胞后,24、48及72 h细胞存活率差异无统计学意义(P> 0. 05);48 h开始焦亡细胞数显著增加(P <0. 05),细胞中NLRP3、IL-1β及Caspase-1 m RNA转录和蛋白表达水平均显著升高(P均<0. 05)。加入MCC950 48 h,经TMAO处理的H9c2(2-1)细胞焦亡显著减少(P <0. 05),NLRP3、IL-1β及Caspase-1 mRNA转录和蛋白表达水平均显著降低(P均<0. 05)。结论 TMAO处理的H9c2(2-1)细胞促进了NLRP3炎性体的激活,出现炎症反应,导致H9c2(2-1)细胞焦亡,而抑制NLRP3可减轻TMAO诱导的炎症反应,减少H9c2(2-1)细胞焦亡。

    2020年06期 v.33 619-625页 [查看摘要][在线阅读][下载 1258K]
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  • 不同细胞培养水疱性口炎病毒的效果比较

    裴德宁;史新昌;秦玺;陶磊;饶春明;

    目的比较鸡胚成纤维细胞、非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)和人羊膜细胞(WISH细胞)培养水疱性口炎病毒(vescular stomatitis virus,VSV)的效果。方法将VSV分别按250、300、350 TCID_(50)/0.1 mL感染鸡胚成纤维细胞、Vero细胞和WISH细胞,比较3种细胞培养的VSV的滴度及液氮中保存3、6、12个月的稳定性。结果鸡胚成纤维细胞、Vero细胞和WISH细胞培养的VSV的滴度分别为(10~(6.21)±10~(0.07))、(10~(5.21)±10~(0.07))和(10~(4.88)±10~(0.12) TCID_(50)/0.1 mL。用鸡胚成纤维细胞培养的VSV放置12个月稳定性较高,而用Vero细胞和WISH细胞培养的VSV稳定性较低,滴度分别为(10~(5.75)±10~(0.12)、(10~(4.08)±10~(0.07))和(10~(3.62)±10~(0.12) TCID_(50)/0.1 mL。结论使用鸡胚成纤维细胞培养的VSV具有较高的滴度和稳定性,是实验室培养VSV的首选方法。

    2020年06期 v.33 626-628页 [查看摘要][在线阅读][下载 760K]
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  • 肿瘤相关基因AMER1不同功能段表达载体的构建及其在人肺腺癌A549细胞中的表达

    张亚萍;王斌;牛丹;陈思羽;闫文鹏;申宁宁;张晓琴;魏荣;王晨;李灵敏;

    目的构建APC膜结合蛋白1(APC membrane recruitment protein 1,AMER1)基因不同区域片段重组质粒,并检测其在人肺腺癌A549细胞中的表达。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增AMER1基因不同功能区域片段2-1135AA、2-327AA、2-785AA、327-785AA、785-1135AA及327-1135AA,扩增片段分别经T4 DNA酶与EGFP-N1载体连接,构建AMER1不同功能片段重组质粒,产物分别转化至感受态E. coli DH5α中,提取阳性克隆进行双酶切及测序鉴定;用脂质体2000介导各重组质粒转染肺腺癌A549细胞,同时设转染空载体EGFP-N1为对照组,q-PCR法检测AMER1不同功能区域片段m RNA转录水平。结果经双酶切及测序鉴定,AMER1不同功能区域片段重组质粒构建正确;与对照组比较,A549细胞中6个重组质粒AMER1基因m RNA转录水平均显著升高(P均<0. 01)。结论成功构建了AMER1基因不同功能片段截短子重组质粒,并在A549细胞中高表达,为进一步研究AMER1不同功能区域在肺腺癌中的作用及相关分子机制提供了生物学工具。

    2020年06期 v.33 629-633+639页 [查看摘要][在线阅读][下载 1348K]
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  • 白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的结构确证分析

    马伟;曹方;郭阳漾;王丹雅;杨欢;

    目的对本公司制备的白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白进行结构确证分析。方法通过发酵、提纯制备3批CRM197蛋白,经N-末端序列、C-末端序列、质量肽图和肽段覆盖率分析进行一级氨基酸序列结构确证分析,经圆二色谱法进行二级蛋白结构确证分析。结果 3批CRM197蛋白N-末端均为GADDVVDSSK,C-末端均为FEIKS,质量肽图的紫外图谱高度一致,肽段覆盖率为100%,一级结构与标准CRM197蛋白氨基酸序列完全一致。3批CRM197蛋白二级结构测算值比例差异不大,批间稳定。结论本公司自制的3批CRM197蛋白与标准CRM197蛋白结构基本一致,为研制以CRM197为载体蛋白的多糖-蛋白结合疫苗及其产业化生产奠定了基础。

    2020年06期 v.33 634-639页 [查看摘要][在线阅读][下载 1461K]
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  • miR-590-5p与信号传导及转录激活因子3的靶向作用关系及其对视网膜母细胞瘤Y-79细胞生长和转移能力的影响

    刘青;宁超;杨捷玲;岳小丁;

    目的探讨miR-590-5p与信号传导及转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的靶向作用关系及其对视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)Y-79细胞生长和转移能力的影响。方法临床收集人RB组织样本和癌旁组织样本各20份,RT-PCR检测miR-590-5p和STAT3基因的转录水平,并分析两者的相关性。RT-PCR检测RB细胞株Y-79和SO-RB50及正常视网膜细胞株HREC中miR-590-5p基因的转录水平。荧光素酶报告基因试验检测miR-590-5p和STAT3的相互作用关系。将Y-79细胞分为Y-79、miR-NC、miR-590-5p mimic和mi R-590-5p mimic+STAT3组,转染相应的miRNA及载体,RT-PCR检测mi R-590-5p和STAT3基因转录水平,Western blot检测STAT3、增殖蛋白Ki67、活化半胱天冬酶(cleave caspase-3,cl-caspase-3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)蛋白表达水平,CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果与正常视网膜组织比较,RB组织中mi R-590-5p基因转录水平显著降低,STAT3基因转录水平显著升高(P <0. 01),且miR-590-5p与STAT3基因转录水平呈负相关(r=-0. 883 5,P <0. 001)。与正常视网膜细胞比较,SO-RB50和Y-79细胞miR-590-5p转录水平显著降低(P <0. 01),从中选取miR-590-5p转录水平最低的Y-79细胞进行后续试验。与Y-79组比较,miR-590-5p mimic组mi R-590-5p表达水平显著升高,STAT3基因转录和蛋白表达水平显著降低,细胞增殖水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ki67、VEGF、MMP-9蛋白表达水平显著降低,cl-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P <0. 01);与miR-590-5p mimic组比较,miR-590-5p mimic+STAT3组STAT3蛋白表达水平显著升高,细胞增殖水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ki67、VEGF、MMP-9蛋白表达水平显著升高,cl-caspase-3蛋白表达水平显著降低(P <0. 01)。与STAT3 WT+miR-NC组比较,STAT3 WT+miR-590-5p mimic组荧光素酶活性显著降低(P <0. 01)。结论 miR-590-5p可通过靶向作用于STAT3,抑制RB Y-79细胞的生长和转移能力。

    2020年06期 v.33 640-647页 [查看摘要][在线阅读][下载 1372K]
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  • 阻塞性睡眠呼吸暂停综合征相关维生素D受体蛋白基因的生物信息学分析

    杨丽华;马宇锋;韩剑星;

    目的分析维生素D受体蛋白(vitamin D receptor protein,VDR)的理化性质、分子结构和蛋白的相互作用,及其在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(obstructive sleep apnea hypopnea syndrome,OSAHS)中的功能及作用机制。方法利用NCBI、ExPASy、Protscale、SignalP 4. 0 Server、TMHMM Server v. 2. 0、PSORTⅡ、SOPMA、Conserved Domain、SWISS-MODEL、NetNGlyc 1. 0 Sever、NetOGlyc 4. 0 Server、Netphos 2. 0 Server、STRING等生物信息学软件对VDR进行结构、性质方面的系统分析。结果 VDR是一种酸性不稳定的亲水性蛋白,无信号肽形成区域,无跨膜结构,广泛定位于细胞核,是一种非分泌型蛋白。VDR的主要二级结构为无规卷曲,是NR-LBD超家族及NR-DBD样超家族的成员之一,可与RXRG、RXRB、EP300等蛋白发生理化相互作用。结论 VDR不仅参与甲状腺激素信号通路、脂肪细胞因子信号通路等信号通路,还参与Th17细胞的分化过程,为研究VDR在OSAHS发生发展过程中的作用提供了参考。

    2020年06期 v.33 648-652+657页 [查看摘要][在线阅读][下载 1390K]
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  • T-cadherin基因通过雄激素受体通路对前列腺癌LNCa P细胞增殖的抑制作用

    王秋菊;宋晓玉;张莉;史敏;陈义波;贺巧;胥萍瑶;倪苏娇;吕梦宇;吴睿;赖琴;赵燕珍;

    目的分析前列腺癌组织中T-cadherin基因mRNA转录水平,探讨T-cadherin基因通过雄激素受体(androgen receptor,AR)通路抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖的作用。方法收集前列腺癌及癌旁相应正常组织各60份,实时荧光定量PCR检测组织中T-cadherin mRNA转录水平;将培养24 h的前列腺癌LNCaP细胞分为腺病毒GFP组、腺病毒GFP-T-cadherin组及空白对照组(不含腺病毒),CCK-8法检测T-cadherin对前列腺癌LNCaP细胞增殖的影响,Western blot法检测过表达T-cadherin后前列腺癌LNCaP细胞中AR及前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)蛋白表达水平,并检测不同组别LNCaP胞浆及胞核中AR蛋白表达水平。结果 T-cadherin基因在癌组织中较癌旁组织mRNA转录水平明显减少(P <0. 01),其转录水平与前列腺癌的分期、格里森评分及分化均有关(P均<0. 05);与空白对照组比较,腺病毒GFP-T-cadherin组能抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖(P <0. 05),而T-cadherin过表达能下调LNCaP细胞中AR及下游靶基因PSA的表达水平(P均<0. 05)。结论前列腺癌组织中T-cadherin基因mRNA转录水平明显减少,其过表达能通过AR通路抑制前列腺癌LNCaP细胞的增殖,本研究为前列腺癌的治疗提供了新的靶点。

    2020年06期 v.33 653-657页 [查看摘要][在线阅读][下载 1121K]
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  • 基于高通量测序的冷应激大鼠肝脏mRNA差异表达分析

    詹雪龙;牛春阳;薛琳琳;计红;李士泽;郭景茹;甄莉;

    目的高通量测序技术分析冷应激大鼠肝脏基因mRNA差异表达。方法将SPF级大鼠随机分为冷刺激组[(4±0. 05)℃]及常温对照组[(24±0. 05)℃],刺激24 h。采集2组大鼠肝脏组织并提取总RNA,应用Ⅲumina HiSeg平台测序,对筛选的差异表达基因进行基因功能(Gene Ontology,GO)注释及信号通路数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析,采用qRT-PCR验证随机筛选的基因mRNA表达水平。结果经测序分析,冷刺激组发掘新基因293个,其中244个有功能注释,差异表达基因98个;经GO分析,差异表达基因显著富集细胞过程、生物调控、代谢过程、细胞组分、细胞器、蛋白质运输等过程;经KEGG分析,大多数差异表达基因注释在原发性免疫缺陷、癌症形成过程、用于IgA生成的肠道免疫网络、细胞因子与细胞因子受体相互作用等通路,在MAPK、PI3K-Akt信号通路和内质网蛋白加工通路中表达量极高,在乙型肝炎和病毒感染通路表达量较低。与常温对照组比较,冷刺激组大鼠肝脏的多配体聚糖4(syndecan 4,Sdc4)及白蛋白(albumin,Alb)基因表达水平上调,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论成功筛选冷应激大鼠肝脏差异表达基因,该类基因很可能参与了机体代谢及损伤修复等过程,为深入研究大鼠冷应激机制积累了数据。

    2020年06期 v.33 658-664页 [查看摘要][在线阅读][下载 2506K]
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  • 人呼吸道合胞病毒微型基因组拯救系统的建立及功能鉴定

    朱传凤;韦钦钦;白慕群;王婉;傅生芳;马超;高雪军;

    目的建立人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,hRSV)微型基因组拯救系统,并鉴定其功能。方法利用包含T7启动子、锤头状核酶、hRSV的前导序列、基因起始信号、非编码区、多克隆位点、基因终止信号、尾随序列、丁肝核酶、T7终止子的基本载体pRSV1和pRSV2,与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,eGFP)基因构建微型基因组质粒pRSV1-eGFP和微型反基因组质粒pRSV2-eGFP。以pcDNA3. 1(+)为表达载体,与优化后的RSV的核蛋白(N)、磷蛋白(P)、聚合酶大片段(L)和转录延长/终止抑制因子(M2-1)基因序列构建辅助质粒pcDNA-N、pcDNA-P、pcDNA-L和pcDNA-M2-1。将微型基因组质粒或微型反基因组质粒通过单转染、与RSV共感染或与辅助质粒共转染至表达T7 RNA聚合酶(T7 RNP)的BSR-T7/5细胞,荧光显微镜或流式细胞仪观察eGFP的表达,并鉴定微型基因组的功能及辅助蛋白的生物学活性。结果微型基因组质粒、微型反基因组质粒和4个辅助质粒经双酶切及测序证明构建正确;微型基因组质粒通过先感染后转染或与辅助质粒共转染,观察到eGFP的表达,证实了微型基因组的功能活性;缺乏N、P或L蛋白,检测不到eGFP的表达;缺乏M2-1蛋白,eGFP的表达量降低。结论成功建立了RSV微型基因组拯救系统,并证实了其拯救功能,为利用反向遗传学手段拯救重组RSV,研发RSV减毒活疫苗奠定了基础。

    2020年06期 v.33 665-670+675页 [查看摘要][在线阅读][下载 1450K]
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治疗制剂

  • 国内重组人粒细胞刺激因子理化对照品质量情况分析

    刘兰;史新昌;韩春梅;秦玺;陶磊;杨婧清;范文红;饶春明;

    目的分析评价国内12家生产企业重组人粒细胞刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)理化对照品的质量情况。方法对rhG-CSF理化对照品进行常规检测(包括生物学活性、蛋白质含量、比活性、非还原SDS-PAGE纯度、反相高效液相纯度、等电点、N-端氨基酸序列)和结构确证(包括质谱分子量、液质肽图、二硫键分析)。结果 12家生产企业的rhG-CSF理化对照品比活性大致范围在(6. 0~12. 0)×10~7IU/mg;纯度均大于96. 0%;等电点主区带均在5. 8~6. 6区间内;N-端氨基酸序列为MTPLGPASSLPQSFL或TPLGPASSLPQSFLL;经结构确证,其主体结构相同。结论国内各生产企业自行控制的rhG-CSF理化对照品总体质量良好,可对制品进行质量控制。

    2020年06期 v.33 671-675页 [查看摘要][在线阅读][下载 1145K]
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  • 参芎葡萄糖注射液对大鼠肺动脉高压的治疗作用及其机制

    张玉坤;曾鸣;秦光梅;邓旺;何东平;

    目的观察参芎葡萄糖注射液对大鼠肺动脉压、肺血管重构、右心室肥厚及肺组织脂联素(adiponectin,APN)蛋白表达的影响,探讨参芎葡萄糖注射液对大鼠肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)的作用及其机制,为其治疗PH提供实验依据。方法采用野百合碱(monocrotaline,MCT)按60 mg/kg剂量单次腹腔注射建立PH SD大鼠模型,将模型大鼠分为MCT组和参芎葡萄糖注射液治疗组,参芎葡萄糖注射液治疗组腹腔注射单剂量MCT后第2~28天,每日按19. 5 g/kg剂量注射参芎葡萄糖注射液1次。另取20只大鼠作为正常对照组,按60 mg/kg经腹腔单剂量注射生理盐水。各组大鼠饲养4周(28 d)后,检测平均肺动脉压(mean pulmonary artery pressure,mPAP)和右心肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI),光镜下观察肺血管结构改变,免疫组化及Western blot法检测肺组织APN蛋白的表达。结果 MCT组较正常对照组大鼠肺小动脉平滑肌明显增生肥大,而参芎葡萄糖注射液治疗组大鼠肺小动脉平滑肌增生肥大较MCT组有所改善;参芎葡萄糖注射液治疗组大鼠较MCT组m PAP明显降低(P <0. 01),RVHI明显下调(P <0. 01),APN蛋白表达明显上调(P <0. 01)。结论参芎葡萄糖注射液能改善PH大鼠的mPAP及右心肥厚,并上调其肺组织APN的表达,提示其发挥对PH的保护作用过程中可能有APN蛋白的参与。

    2020年06期 v.33 676-680页 [查看摘要][在线阅读][下载 1336K]
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诊断制剂

  • 血管内皮生长因子定量测定试剂盒(酶联免疫吸附法)的性能验证及评价

    赵晓君;王磊;陆浩;邹检平;

    目的验证北京健平九星生物医药科技有限公司研发的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)定量测定试剂盒(酶联免疫吸附法)的性能。方法依据美国临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)批准的EP15-A2文件方法验证精密度及准确度,EP6-A文件方法验证线性范围,C28-A3文件方法验证生物学参考区间。结果高、低浓度混合血清样本精密度检测结果 CV分别为5. 64%和7. 67%,均小于15%;准确度验证中,VEGF含量理论值为150 pg/mL的国际参考品5 d测量均值为157 pg/m L,标准差为2. 30 pg/mL,验证区间为149. 53~164. 47 pg/mL;理论值为350 pg/m L的国际参考品5 d测量均值为365. 80 pg/mL,标准差为5. 03 pg/mL,验证区间为349. 47~382. 13 pg/mL;验证区间均包括定值,且相对差值均不超过±10%。线性范围验证中,高、低浓度混合血清样本的测定值与预测值差别不大,相关系数r~2=0. 991,线性较好(斜率b接近1)。生物学参考区间验证中,20份健康人血清样本中有19份VEGF含量均在厂家设定的6. 25~142. 20 pg/m L参考值范围内,满足20例参考个体中不超过2例的检测值不在参考范围内。结论北京健平九星生物医药科技有限公司研发的VEGF定量测定试剂盒的精密度、线性范围、准确度和生物学参考范围均达到了临床应用的实验要求,各性能指标的验证方法均可为相关实验室提供参考。

    2020年06期 v.33 681-683+688页 [查看摘要][在线阅读][下载 1229K]
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临床研究

  • 湘潭县和融水县2岁以下婴幼儿轮状病毒腹泻病流行病学调查

    刘玉晴;李庆亮;白萱;姜志军;张久威;冯冬扬;杨彪;董犇;陈天柱;鄢廷栋;何绍航;杨可嘉;李放军;莫兆军;汪萱怡;徐葛林;

    目的通过对监控区域内腹泻病例的监测,获取轮状病毒(rotavirus,RV)腹泻发生率。方法在广西壮族自治区融水县、湖南省湘潭县两个地区的村卫生室及乡镇卫生院中开展腹泻监测,收集腹泻病例和流行病学信息,采集病例粪便样本。应用ELISA法检测RV,RT-PCR法对其进行基因分型。结果湘潭县和融水县RV腹泻高峰主要集中在2月份,分别占总数的45. 9%和53. 9%;两地腹泻发病率为285. 1/(1 000人·年),RV检出率为18. 0%,RV腹泻发病率为51. 2/(1 000人·年);湘潭县和融水县的轮状病毒血清型均以G9型(分别占58. 7%和73. 7%)和P8型为主(分别占67%和81. 6%)。结论 RV是导致2岁以下婴幼儿腹泻的常见病原体,湘潭和融水县的RV流行株均为G9型和P8型,流行高峰为2月。

    2020年06期 v.33 684-688页 [查看摘要][在线阅读][下载 1278K]
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  • 2008~2016年国内报道的重症手足口病易发人群Meta分析

    冯骁;殷琼洲;张莹;徐兴丽;李琦涵;

    目的探讨与普通病例相比,重症手足口病的发病是否取决于患者居住于农村、散居、患者为男性、年龄≤3岁等人群特征因素,找出重症手足口病发病的人群特征规律,为重症手足口病易发人群的预防及保护提供参考。方法利用Review Manager 5. 3分析软件对我国不同地区调查的2008~2016年间重症手足口病患者人群特征因素(居住于农村、散居、患者为男性、年龄≤3岁)进行Mantel-Haenszel法二分类变量的Meta分析。结果共纳入符合标准的21篇文献,累计调查307 713人,其中重症病例8 370人,普通病例299 343人。Meta分析显示,患者居住于农村(OR=1. 18,95%CI:1. 05~1. 33)、散居(OR=1. 55,95%CI:1. 29~1. 87)、患者为男性(OR=1. 13,95%CI:1. 07~1. 20)、年龄≤3岁(OR=5. 18,95%CI:4. 33~6. 19)均是重症手足口病发病的影响因素。结论患者居住于农村、散居、患者为男性、年龄≤3岁为重症手足口病发病的影响因素,具有以上特征的人群应成为下一次手足口病大流行时的重点保护对象,以降低重症手足口病的发病率及死亡率。

    2020年06期 v.33 689-694页 [查看摘要][在线阅读][下载 1325K]
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技术方法

  • 人免疫球蛋白类制品中IgA残留量ELISA检测方法的验证及应用

    邹浩勇;喻剑虹;龚钦;彭焱;

    目的验证人免疫球蛋白类制品中IgA残留量的ELISA检测方法,并进行应用。方法用IgA国际标准品建立与ELISA检测试剂盒相匹配的标准曲线,并验证方法的准确性、专属性、精密度及线性范围。分别采用ELISA法、紫外法和免疫比浊法检测4批静注人免疫球蛋白(pH 4)成品。同时用经验证的ELISA法检测35批静注人免疫球蛋白(pH 4)成品中的IgA含量。结果加入0. 5、1、2 IU/L标准品的样品平均回收率分别为90. 33%、94. 43%、93. 37%,CV分别为4. 5%、1. 8%、3. 1%;标准品加入100、50、25 mg/L麦芽糖的回收率分别为99. 44%、99. 38%、99. 67%,CV分别为0. 16%、0. 13%、0. 11%;两个时间点6次重复测定结果的CV均<10%,且两个时间点的测定结果差异无统计学意义(P> 0. 05);IgA浓度在0. 5~8 IU/L范围内与A450呈良好的线性关系,回归方程为y=0. 088 7 x2-0. 111 5 x+0. 188,R~2=0. 999 9。与紫外法和免疫比浊法比较,ELISA法检测结果偏低,紫外法最高,3种方法间差异有统计学意义(P <0. 05)。35批静注人免疫球蛋白(pH 4)成品中IgA含量均值为(22. 4±2. 24)IU/mL,CV <10%。结论 ELISA检测方法具有良好的准确性、专属性及精密度,且快速、灵敏,操作简便,可用于人免疫球蛋白类制品中IgA含量的质量监测。

    2020年06期 v.33 695-698页 [查看摘要][在线阅读][下载 1281K]
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  • 不同来源T细胞及红细胞在胸腺肽类免疫增强剂活性检验方法中的替代性

    李睿;周谡;朱鸿雁;张志超;方静;唐黎明;

    目的研究不同来源的T细胞及红细胞在胸腺肽类免疫增强剂活性检验方法中的替代性。方法 T细胞活性测定法-脱E受体法(E-玫瑰花结试验)参照国家食品药品监督管理局国家药品标准WS1-(X-001)-2002Z进行,采用豚鼠胸腺T细胞作为T细胞来源,兔红细胞作为红细胞来源,并对豚鼠周龄、脱E条件、兔红细胞保存方式进行优化;采用Jurkat细胞作为T细胞来源,绵羊红细胞作为红细胞来源,并对脱E时间、给药浓度、给药时间进行优化。结果豚鼠胸腺T细胞与兔红细胞可形成玫瑰花结,最佳试验条件为:选取4~7周龄豚鼠胸腺T细胞,45℃孵育1 h脱去E受体,用阿氏液保存兔红细胞;Jurkat细胞与绵羊红细胞可形成玫瑰花结,最佳试验条件为:45℃孵育30 min脱去E受体,1 mg/mL给药。结论豚鼠胸腺T细胞-兔红细胞及Jurkat细胞-绵羊红细胞的组合可形成玫瑰花结,但对样品的反应性不如猪胸腺T细胞-绵羊红细胞的组合。

    2020年06期 v.33 699-704页 [查看摘要][在线阅读][下载 1429K]
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  • 长效重组人生长激素-Fc融合蛋白纯化工艺的建立

    郭胜苍;俞露;富瑞丽;王莹;刘玉林;张宇;王江林;刘涵;

    目的建立长效重组人生长激素-Fc(recombiant human growth hormone-Fc,rhGH-Fc)融合蛋白的纯化工艺。方法 rhGH-Fc融合蛋白细胞培养液经离心、低pH处理、过滤、浓缩预处理后,再经Protein-A亲和层析、CM阳离子交换层析、Q HP阴离子交换层析进行纯化,同时检测rhGH-Fc融合蛋白的蛋白含量、纯度、等电点及宿主蛋白、宿主DNA、Protein-A残留量等指标。结果 Protein-A亲和层析、CM阳离子交换层析、Q HP阴离子交换层析纯化产物的蛋白含量分别为145、132、92.4 mg,纯度分别为95. 40%、95. 90%和99. 19%,宿主蛋白残留量分别为2 500、864和71 ng/mg,宿主DNA残留量分别为329、0. 56和0. 12 ng/mg,Protein-A残留量分别为24. 5、3. 2和0 ng/mg。rhGH-Fc融合蛋白相对分子质量约97 300,等电点范围为5. 5~6. 5,可与鼠抗人生长激素(human growth hormone,hGH)抗体发生特异性结合。结论成功建立了rhGH-Fc融合蛋白的纯化工艺,该工艺的纯化产物回收率及纯度均较高,本实验为rhGH-Fc融合蛋白的大规模生产奠定了理论基础。

    2020年06期 v.33 705-708+713页 [查看摘要][在线阅读][下载 1493K]
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综述

  • 柯萨奇病毒A组2型及5型的研究进展

    禹玉婷;胡岗;靳卫平;申硕;

    柯萨奇病毒A组2型(coxsackievirus A2,CV-A2)和柯萨奇病毒A组5型(coxsackievirus A5,CV-A5)均属小RNA病毒科肠道病毒属,是柯萨奇病毒A组成员,可在全球范围内引起疱疹性咽峡炎、无菌性脑炎和手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)的暴发流行,且两种病毒在进化过程中可在核苷酸的多个区域与其他A类肠道病毒发生重组,感染后可引起中枢神经系统及其他严重、致死性疾病,严重威胁人类健康。本文就CV-A2和CV-A5的分类、形态及基因结构特征、感染所致疾病及实验室诊断、流行病学研究、预防与控制等方面作一综述。

    2020年06期 v.33 709-713页 [查看摘要][在线阅读][下载 1361K]
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  • qPCR法检测脊髓性肌萎缩症基因的质控点初探

    李耀华;

    脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是一种常染色体隐性遗传病,95%的SMA患者为运动神经元存活基因1(survival motor neuron 1,SMN1)外显子7和/或外显子8缺失。SMA基因检测有利于开展携带者筛查以判断受孕风险。荧光定量PCR法具有设备普及率高、速度快、通量大以及配套设施成熟等优势,但需对PCR扩增体系的各要素进行合理的质量控制。本文结合体外诊断试剂注册管理相关法规规章、技术审评要求,对用于SMA检测的荧光定量PCR产品的样本采集、核酸提取、引物/探针设计、扩增体系、适用机型等质量控制点进行讨论,以指导相关生产企业的研发和注册人员进行合理的产品设计开发及注册申报。

    2020年06期 v.33 714-718页 [查看摘要][在线阅读][下载 1380K]
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  • 益生菌抗轮状病毒感染免疫调节机制的研究进展

    仝晓丹;冉旭华;闻晓波;

    轮状病毒(rotavirus,RV)是引起婴幼儿和幼龄动物腹泻的主要病原体之一,全世界每年因感染RV而死亡的婴幼儿约为21. 5万人,目前尚无抗RV特效药。研究表明,益生菌作为对宿主有益的一类微生物,可缓解由RV引起的腹泻,并可通过下调A20表达、降低TLR3诱导的小肠损伤和上调细胞因子表达等,提高机体抗RV免疫状态。本文对益生菌在抗RV感染及其对宿主免疫调节作用等方面作一综述,为RV的防治提供参考。

    2020年06期 v.33 719-721+724页 [查看摘要][在线阅读][下载 1379K]
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专题报道

  • 疫苗异常毒性检查及相关问题探讨

    王晓娟;赵勇;曹琰;郭中平;

    <正>异常毒性检查一直是疫苗质量控制中涉及安全性的批放行检查项目,主要检查疫苗在生产过程中可能引入的外来污染物或疫苗成分降解在动物体内产生的非正常或毒性反应。目前,WHO或部分国家/地区药典标准对疫苗异常毒性检查进行了修订,引起国内外疫苗行业的广泛关注。本文就国内外异常毒性检查的建立及发展历程进行总结,并对

    2020年06期 v.33 722-724页 [查看摘要][在线阅读][下载 1303K]
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  • 浅析无针注射器在预防性疫苗中的应用及国内外注册要求

    任慧梅;金苏;李敏;

    <正>无针注射器并不是新兴概念,在发达国家已经逐步应用于临床医疗及家庭保健等方面。无针注射器的技术发展,逐步解决了传统有针注射引起的疼痛和恐惧等问题,并避免了针刺伤害、医用垃圾和潜在的交叉感染,是未来发展方向。2014年,美国食品药品监督管理局(FDA)批准了使用Pharmajet Stratis无针注射器进行流感疫苗Afluria的接种,这是首个

    2020年06期 v.33 725-728页 [查看摘要][在线阅读][下载 1337K]
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